超高效液相串聯質譜法同時定量檢測6個細胞色素P450酶探針代謝產物

1 引 言

細胞色素P450酶（CYP）是重要的藥物代謝酶，參與了約75%臨床藥物的體內代謝＼[1，2＼]。CYP超級家族中的6個同工酶（CYP1A2， CYP2B6， CYP2C9， CYP2C19， CYP2D6和CYP3A4）與藥物代謝的關系最為密切，它們代謝的藥物占全部CYP代謝藥物的99%以上＼[3，4＼]， 由CYP酶誘導或抑制引起的藥物相互作用是影響藥物臨床有效性和安全性的重要因素。評價新藥候選化合物對CYP酶的抑制和誘導作用已成為創新藥物研發過程的一個重要環節＼[5＼]，有助于降低藥藥相互作用的風險，提高臨床合并用藥的安全性。國內也有文獻報道混合探針法（“Cocktail”法）研究中藥對CYP酶的抑制和誘導作用＼[6，7＼]。

CYP同工酶的活性測定是評價酶抑制和誘導作用的關鍵技術，并以LCMS/MS技術同時檢測多種CYP酶底物或代謝產物的混合探針法（稱為“Cocktail”法）為首選方法＼[8＼]。其特點是能同時評價多個CYP酶的活性，單次實驗過程中同時獲得多種亞型的代謝信息，方法簡便、經濟，將個體間影響降至最低，應用范圍廣、能滿足大量化合物的評價要求＼[9＼]。混合探針法利用CYP酶催化的特異性底物反應，通過定量測定底物的消耗或產物的生成來確定酶的活性。由于CYP同工酶之間存在一定的底物交叉性，因此，檢測底物代謝產物的生成更能準確地反映酶的活性。本研究選用美國FDA相互作用評價指南推薦的底物，針對非那西丁O脫乙基（CYP1A2）、安非他酮羥基化（CYP2B6）、甲苯磺丁脲4甲基羥基化（CYP2C9）、S美芬妥英4′羥基化（CYP2C19）、右美沙芬O去甲基化（CYP2D6）和咪達唑侖1′羥基化（CYP3A4）特異性反應的代謝產物，建立靈敏、快速的超高效液相串聯質譜法定量檢測方法，以體外人肝微粒體孵育液為代表性基質，為CYP酶活性評價的高通量檢測提供了可靠的生物分析方法。