野生與栽培藍靛果果實提取物的體外抗氧化活性

劉德江，申 健，田立娟，程廣東，趙永勛

（佳木斯大學 生命科學學院，黑龍江 佳木斯 154007）

藍靛果Lonicera edulisTurcz.是忍冬科忍冬屬植物，為落葉小灌木。我國藍靛果主要分布在東北、華北和西北地區，以東北的大、小興安嶺和長白山地區的野生資源貯量最為豐富，但掠奪式采摘使其資源破壞嚴重，而人工規模化栽培的產量幾乎為零[1-3]。有關研究結果表明，藍靛果果實中含有大量的活性物質，此類活性物質具有抗病毒、抗癌和改善肝臟解毒功能等功用[4-5]，具有較高的營養及藥用雙重價值[6]，是開發天然抗氧化劑的良好資源[7]。多年來，國內外現有關于藍靛果的研究內容主要集中在野生藍靛果抗氧化性質的研究方面，而有關栽培藍靛果的抗氧化性質的研究在國內外尚無報道。因此，文中測定并統計了以不同產地野生與栽培藍靛果果實提取物制備的樣液對DPPH? 、?OH及O2ˉ?自由基的清除率，比較分析了二者抗氧化活性的大小及差異性，以期為野生藍靛果資源的有效保護及藍靛果人工規模化的栽培提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材 料

野生藍靛果果實2010年6～7月分別采摘于黑龍江省的伊春、勃利和吉林省的汪清；栽培藍靛果果實2010年5～6月采摘于4年生的栽培藍靛果樹，這些栽培樹都是采用2007年通過采枝扦插繁殖得到的伊春、勃利和汪清的苗木而種植的。將采摘后的果實除雜后放入－20 ℃的冰箱中凍藏。

1.2 方 法

1.2.1 藍靛果提取物樣品的制備

根據劉德江等人采用的方法[8-9]制備藍靛果提取物樣品，提取方法為超聲波法，超聲波作用時間為19 min，超聲波作用功率為229 W，料液比為1∶19，提取級數為1 級。選用HPD-200A大孔樹脂進行粗提物純化，最佳純化條件為：上樣液的質量濃度為50 mg/mL，洗脫流速為2.0 mL/min，洗脫液濃度為70%(v/v)。將提取物減壓濃縮后進行真空冷凍干燥處理以備用。

1.2.2 DPPH?自由基的清除

采用楊玲等人的方法[10-12]將藍靛果提取物用蒸餾水制成樣液，其質量濃度分別設為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mg/mL， 并 配 制 DPPH 2×l0-4mol/L的60%乙醇溶液。分別取不同質量濃度提取物樣液各2.0 mL，加入DPPH的60%乙醇溶液2.0 mL，搖勻后放置30 min，以蒸餾水為空白對照，在517 nm處測定其吸光度（A0）。然后，分別取不同質量濃度提取物樣液各2.0 mL，與2.0 mL乙醇溶液混合后，在517 nm處測定其吸光度（Ax）。最后，測定DPPH乙醇溶液2.0 mL與蒸餾水2.0 mL混合后的517 nm處的吸光度（Ac）。樣液對自由基的清除能力以K來表示。重復3次。清除率（K）的計算公式如下：

1.2.3 ?OH自由基的清除

依據楊玲等人的方法[13]，在具塞試管中依次加入2.0×10-4mol/L的甲基紫溶液1.0 mL、1.0×10-3mol/L的 Fe2+溶 液 1.0 mL、0.12% 的H2O2溶液1.0 mL，以Tris-HCl緩沖液將pH值調至4.5后，用蒸餾水精確稀釋到10 mL，搖勻放置30 min后，用分光光度計在578 nm處測定吸光度（Ai），以甲基紫和Tris-HCl緩沖溶液作為空白溶液，測定其吸光度（A），兩者均以水為參比。測定樣品時在上述體系中預先加入1.0 mL的樣液，采用上述方法測定樣品的吸光度（As），以同體積的樣液、Tris-HCl和水溶液作參比，重復3次。清除率（S）的計算公式為：

1.2.4 O2ˉ?自由基的清除

參照郭雪峰的方法[14-15]測定樣液對超氧自由基的清除能力。反應體系中依次加入50 mmol/L的Tris-HCl溶液5.7 mL、樣液0.2 mL、6 mmol/L的鄰苯三酚溶液0.1 mL，將混合物反應4 min，滴入2滴HCl以終止反應，在320 nm波長下測定吸光度（A1）；用等體積的蒸餾水代替鄰苯三酚，測定其吸光度（A2）；再用等體積的蒸餾水代替樣品溶液，測定其吸光度（A3）。重復3次。清除率（S）的計算公式為：

2 結果與分析

2.1 DPPH?自由基的清除結果

不同產地野生與栽培藍靛果果實提取物不同質量濃度的樣液對DPPH·的清除作用分別如圖1A、B、C所示。由圖1A、B、C可知，不同產地野生與栽培藍靛果果實提取物不同質量濃度樣液對DPPH·都具有很強的清除能力，且其對DPPH·的清除能力隨著藍靛果樣液質量濃度的增加而呈現出更強的變化趨勢。在圖1的A與B中，不同產地野生藍靛果果實樣液對DPPH·的清除能力均高于栽培果樣液。由圖1A可知，當樣液質量濃度分別為0.5、2.0 mg/mL且P＜0.05時，野生與栽培藍靛果果實樣液對DPPH·的清除能力之間存在差異；由圖1B可知，當樣液質量濃度分別為2.0、2.5 mg/mL且P＜0.05時，野生與栽培藍靛果果實樣液對DPPH·的清除能力之間亦有差異；由圖1C可知，當樣液的質量濃度分別為0.5、2.0 mg/mL且P＜0.05時，栽培和野生藍靛果果實提取樣液對DPPH·自由基的清除能力之間具有差異性。在圖1A、B、C中，當P＜0.01時，野生與栽培藍靛果果實提取樣液對DPPH·自由基的清除能力之間均無差異。

2.2 ?OH自由基的清除結果

不同產地野生與栽培藍靛果果實提取物不同質量濃度樣液對?OH的清除作用分別如圖2A、B、C所示。由圖2A、B、C可知，不同產地野生與栽培藍靛果果實提取物不同質量濃度樣液對?OH均有較強的清除能力，且隨著藍靛果樣液質量濃度的增加，其對?OH的清除能力愈來愈強，當樣液的質量濃度達到2.5 mg/mL時，栽培和野生藍靛果樣液對?OH的清除能力均達到70%以上，汪清栽培果樣液的清除率最大（86.5%）。在圖2A、B中，不同產地栽培藍靛果樣液對?OH的清除能力均高于野生果樣液。當樣液的質量濃度分別為如圖2A的2.0、2.5 mg/mL 和如圖2B的1.5、2.0 mg/mL且在P＜0.05時，野生與栽培藍靛果樣液對?OH的清除能力之間差異顯著。在圖2C中，當樣液的質量濃度分別為0.5、1.0 mg/mL時，栽培藍靛果樣液對?OH的清除能力略低于野生果樣液；而當樣液的質量濃度增加到1.5、2.0 mg/mL時，兩者在P＜0.05時具有差異。圖2A、B、C中，當P＜0.01時，野生與栽培藍靛果樣液對?OH的清除能力之間均無差異。

圖1 不同產地野生與栽培藍靛果果實提取物不同質量濃度樣液對DPPH·的清除作用Fig.1 Scavenging activities to DPPH· of different mass concentration of extracts from wild and cultivated Lonicera edulis at different regions

圖2 不同產地野生與栽培藍靛果果實提取物不同質量濃度樣液對?OH的清除作用Fig.2 Scavenging activities to ?OH of different mass concentration extracts from wild and cultivated Lonicera edulis at different regions

2.3 O2ˉ?自由基的清除結果

不同產地野生與栽培藍靛果果實提取物不同質量濃度樣液對O2ˉ?的清除作用分別如圖3A、B、C所示。由圖3A、B、C可知，以不同產地的野生與栽培藍靛果果實提取物制備的不同質量濃度的樣液對O2ˉ?自由基均有極強的清除能力，且同等質量濃度的栽培果提取樣液對O2ˉ?的清除能力均略高于野生果樣液。除此之外，當樣液的質量濃度均為0.5 mg/mL時，野生和栽培藍靛果提取樣液的清除率均高于60%以上；當樣液的質量濃度均為2.5 mg/mL時，野生和栽培藍靛果提取樣液的清除率均達到90%，最大為98.1%。由圖3B可知，當樣液的質量濃度為1.5 mg/mL且在P＜0.05時，栽培與野生果樣液的清除率之間具有顯著的差異；由圖3C可知，當樣液的質量濃度分別為2.0、2.5 mg/mL且在P＜0.05時，栽培與野生果樣液的清除率之間具有顯著差異。在圖3A、B、C中，當P＜0.01時，野生與栽培藍靛果提取樣液對O2ˉ?的清除能力之間均無差異性。

圖3 不同產地野生與栽培藍靛果果實提取物不同質量濃度樣液對O2ˉ?的清除作用Fig.3 Scavenging activities to O2ˉ? of different mass concentration extracts from wild and cultivated Lonicera edulis at different regions

3 結 論

不同產地野生與栽培藍靛果果實提取物不同質量濃度樣液對DPPH?、?OH及O2ˉ?自由基都具有較強的清除能力，且其清除率隨著提取樣液的質量濃度的增加而增加，呈量效關系。方差分析結果表明，當P＜0.05時，野生與栽培藍靛果提取樣液對DPPH?、?OH及O2ˉ?自由基的清除率，僅表現出點狀差異，卻未呈現出線性關系；而當P＜0.01時，野生與栽培藍靛果提取樣液對三種自由基的清除率之間并無顯著差異。

綜上所述，不同產地的野生與栽培藍靛果均有較高的抗氧化活性，且野生與栽培果的抗氧化活性之間無顯著差異。

參考文獻：

[1]霍俊偉,睢 薇,阮瑞雪.黑龍江省野生藍靛果忍冬染色體的觀察[J].中國林副特產,2004,8(4):15－16.

[2]李 恒,邢桂菊,廉美丹.藥用植物——藍靛果[J].中國林副特產,2002,(1):10.

[3]申 健,楊國亭,劉德江.木醋對幾種小漿果扦插繁殖的影響[J].經濟林研究,2013,31(1):167－171.

[4]金 政,王啟偉,金 美,等.藍靛果對四氯化碳所致小鼠肝損傷修復作用的形態學研究[J].中國中醫藥科技,2002,9(1): 46.

[5]向延菊,鄭先哲,王大偉.野生漿果資源——藍靛果忍冬利用價值的研究現狀及應用前景[J].東北農業大學學報,2005,36(5): 669－671.

[6]CHAOVANALIKIT A. Athocyanins, phenolics antioxidant capacity and color characteristics of bluehoneysuckles[J]. J Agric Food Chem, 2001,45: 362－367.

[7]WANG H, CAO G, PRIOR RL. Total antioxidant capacity of fruits[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1996,(44):701－705.

[8]劉德江,劉 娟,申 健,等. RSM法優化藍靛果色素的提取工藝[J].林業實用技術,2012,(3):59－61.

[9]劉德江,孫國志,李佳琳,等.五種HPD系列樹脂分離純化藍靛果紅色素的工藝研究[J].中國食品添加劑,2012,(5):154－158.

[10]楊 玲.藍靛果提取物抗氧化及抗癌作用的研究[D].哈爾濱:東北林業大學,2009.

[11]李姣娟,周盡花,戴 渝,等.川桂葉總黃酮清除DPPH自由基作用的研究[J].中南林業科技大學學報, 2010, 30(10):125－128.132.

[12]郭雪峰,岳永德,湯 鋒,等.用清除超氧陰離子自由基法評價竹葉提取物抗氧化能力[J].光譜學與光譜分析,2008, 28(8):1823－1826.

[13]楊 玲,王振宇.藍靛果乙醇提取物體外抗氧化作用的研究[J].食品工業科技,2009,30(12):162－164.

[14]李姣娟,戴 瑜,周盡花,等.川桂葉總黃酮對油脂抗氧化作用的研究[J].中南林業科技大學學報,2011,31(10):134－137.

[15]王振宇,劉奕琳.藍靛果乙醇洗脫物的抗氧化活性研究[J].食品工業科技,2012,33(9):163－165.