銀丹心腦通軟膠囊對腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能及梗死體積的影響1）

徐忠祥，姚本海，徐 平，張 駿，范瑞明

中醫(yī)藥對腦缺血再灌注損傷有積極作用［1，2］，能夠多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)地預(yù)防和治療腦缺血性損傷。銀丹心腦通（YDXNT）對缺血性腦損傷具有明確的保護(hù)作用［3-5］。本研究以YDXNT對缺血性腦卒中的保護(hù)作用為切入點(diǎn)，觀察YDXNT對腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)癥狀學(xué)評分及梗死體積的影響，以尋求YDXNT對缺血性腦卒中治療作用的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 SD雄性大鼠（SPF級），由第三軍醫(yī)大學(xué)大坪

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 YDXNT浸膏（貴州百靈醫(yī)藥集團(tuán)提供），尼莫地平片（正大青春寶藥業(yè)有限公司，批號：國藥準(zhǔn)字H33022285），10%水合氯醛溶液（遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥房提供）。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 4%多聚甲醛、Poly-lysine、氯化-2，3，5-三苯基四氮唑（2，3，5-Triphenyltetrazolium chloride，TTC）均購自昆明綠盟科技有限公司。

1.4 動物分組 40只健康雄性SD大鼠，體重200 g～240 g，隨機(jī)分為4組，即假手術(shù)組、模型組、尼莫地平組、YDXNT組，每組共10只。尼莫地平組按12 mg／kg給藥，銀丹心腦通組按0.48 g／kg給藥，藥物試驗(yàn)前用蒸餾水配制，給藥容積1 ml／100 g。預(yù)先連續(xù)灌胃給藥7 d，每日1次，其中假手術(shù)組和模型組灌服相當(dāng)量的蒸餾水，第8天施行造模手術(shù)。

1.5 腦缺血再灌注模型大鼠的制備 參照Longa等線栓改良法制備大鼠大腦中動脈閉塞（MCAO）模型。采用Longa等神經(jīng)功能評分法對術(shù)后大鼠評分，分值在2分或2分以上則認(rèn)為模型制作成功并納入實(shí)驗(yàn)研究。

1.6 神經(jīng)癥狀學(xué)評分 參照Zea Longa5分制神經(jīng)功能缺損評分標(biāo)準(zhǔn)。0分，無神經(jīng)功能缺失癥狀；1分，輕度局灶性神經(jīng)功能缺失；2分，中度局灶性神經(jīng)功能缺失（向左側(cè)轉(zhuǎn)圈）；3分，重度神經(jīng)功能缺失（向左側(cè)傾斜）；4分，不能自發(fā)行走，意識水平降低。

1.7 腦梗死體積測定 使用TTC染色法。將大鼠處死后立即斷頭取腦，于冰盤上自額極3 mm處向后作厚度為2 mm的冠狀切片，置于37℃的2%TTC中避光溫育30 min，染色后立即浸入4%多聚甲醛固定保存。濾紙吸去表面液體后用刀片小心刻取未著色部分，分別用電子天平稱量著色部分和未著色部分腦組織重量，計(jì)算腦片中梗死部分的重量百分比，以此反映腦梗死體積比。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0軟件分析。數(shù)值變量資料經(jīng)正態(tài)性和方差齊性檢驗(yàn)，正態(tài)分布資料采用方差分析，有差異者進(jìn)一步做Bonferroni檢驗(yàn)或Games-Howell檢驗(yàn)。數(shù)值變量采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s）表示。

2 結(jié) 果

2.1 腦缺血再灌注大鼠各組神經(jīng)癥狀學(xué)評分比較 假手術(shù)組評分為0，不進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，模型組、YDXNT組及尼莫地平組均能導(dǎo)致神經(jīng)功能缺損，3組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 缺血再灌注大鼠神經(jīng)癥狀學(xué)評分s） 分

表1 缺血再灌注大鼠神經(jīng)癥狀學(xué)評分s） 分

組別 神經(jīng)癥狀學(xué)評分假手術(shù)組0模型組 2.375±0.744尼莫地平組 2.250±0.463 YDXNT組 2.125±0.354注：模型組、尼莫地平組及YDXNT組間比較，P＞0.05。

2.2 腦缺血再灌注大鼠各組腦梗死體積比較 腦缺血再灌注大鼠各組腦梗死灶肉眼觀察，假手術(shù)組無梗死灶，而模型組、尼莫地平組及YDXNT組均有明顯梗死灶。

2.3 腦缺血再灌注大鼠各組腦梗死體積測定 與模型組比較，YDXNT組和尼莫地平組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示YDXNT和尼莫地平均能減小腦梗死體積，而YDXNT組和尼莫地平組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表2。

表2 腦缺血再灌注大鼠各組腦梗死體積測定（±s） %

表2 腦缺血再灌注大鼠各組腦梗死體積測定（±s） %

組別 腦梗死體積（梗死重量百分比）模型組11.954±6.024尼莫地平組 3.237±1.9371）YDXNT組 3.625±2.3741）與模型組比較，1）P＜0.05

3 討 論

銀丹心腦通立足于苗族醫(yī)學(xué)“兩病兩綱”理論，糅合了傳統(tǒng)中醫(yī)的辨證施治思想，精選銀杏葉、丹參、燈盞細(xì)辛、三七、絞股藍(lán)、大蒜、山楂、天然冰片等八味治療腦血管病安全有效的草藥科學(xué)配伍組方而成。銀丹心腦通能夠改善腦血流量，增加腦供血，抑制血小板聚集，延長血栓形成時間，加速血栓溶解，修復(fù)損傷血管，恢復(fù)血管彈性，降低血液黏稠度，保持血流通暢，明顯降血脂及防止動脈脂質(zhì)增加，減輕腦缺血組織的炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)血壓［3-8］。銀丹心腦通可以多途徑、多靶點(diǎn)的治療缺血性腦卒中。

本研究通過采用線栓改良法制備大鼠MCAO模型，觀察到銀丹心腦通及尼莫地平均可以明顯減少腦缺血再灌注大鼠的梗死體積（與模型組比較，P＜0.05），但兩者之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），銀丹心腦通以及尼莫地平對腦缺血再灌注損傷均有一定的保護(hù)作用，可以明顯減少腦梗死的體積。另外還觀察到假手術(shù)組大鼠無神經(jīng)系統(tǒng)缺損的表現(xiàn)，進(jìn)一步除外造模時手術(shù)操作對神經(jīng)癥狀學(xué)評分造成的影響。銀丹心腦通組、尼莫地平組、模型組均有明顯神經(jīng)系統(tǒng)缺損的表現(xiàn)，但3組神經(jīng)功能評分無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。銀丹心腦通能夠明顯改善腦梗死患者的神經(jīng)功能缺損以及生活能力［9］。張碩峰等［4］通過采用三氯化鐵致大鼠大腦中動脈血栓形成（MCAT）模型，觀察到銀丹心腦通對缺血性腦損傷具有保護(hù)作用，能夠明顯改善MCAT大鼠術(shù)后6 h、24 h神經(jīng)癥狀學(xué)評分，明顯降低腦梗死范圍，抑制血小板聚集，改善大鼠的血液流變性。在腦缺血再灌注損傷時，腦梗死體積的測定可以用來作為判斷所用藥物對腦缺血再灌注損傷是否有保護(hù)作用的重要指標(biāo)之一［10］。本研究結(jié)果明確銀丹心腦通能夠明顯減少腦缺血再灌注大鼠腦梗死的體積，雖然與模型組相比銀丹心腦通不能明顯改善大鼠神經(jīng)功能，但是仍然認(rèn)為銀丹心腦通對腦缺血再灌注損傷具有一定的保護(hù)作用。而針對3組MCAO模型大鼠神經(jīng)癥狀學(xué)評分無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，考慮可能的原因有以下幾點(diǎn)：造模時將入圍標(biāo)準(zhǔn)定得過高，可能把藥物干預(yù)有效但評分達(dá)不到納入標(biāo)準(zhǔn)的大鼠排除在外，這可能是造成3組神經(jīng)功能評分無差異的主要原因。每組實(shí)驗(yàn)大鼠數(shù)量偏少，不能充分反映神經(jīng)功能評分的實(shí)際情況。因個體差異的原因，在造模時所插入的線栓不能保證所有的模型均能完全阻斷血流。本研究在缺血2 h再灌注后短期內(nèi)即對MCAO模型大鼠進(jìn)行神經(jīng)癥狀學(xué)評分，藥物治療作用時間短暫，這可能也是造成3組神經(jīng)癥狀學(xué)評分無顯著性差異的原因之一。

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