動態監測誘導痰嗜酸性粒細胞對評價哮喘氣道炎癥的臨床意義

趙 璇 王曉東

（山東省平度市人民醫院 山東 平度 266700）

支氣管哮喘的基本病理特征是氣道炎癥反應，它與病情惡化、氣道結構重建密切相關［1］。有研究表明，EOS在哮喘氣道炎癥反應中起重要作用。EOS炎癥程度可作為一個獨立的指標來診斷哮喘和衡量哮喘病情［2］；ECP是EOS激活后釋放的一種毒性蛋白，是EOS活化的標志，也是造成哮喘氣道炎癥的重要介質，可直接反映氣道炎癥狀態［3］。為提高臨床對哮喘的診斷及預后分析，我們于2004年12月至2008年12月對98例住院患者（哮喘急性發作組36例；哮喘治療緩解組32例；健康對照組30例）采用誘導痰的方法，并進行動態監測誘導痰細胞學分類及ECP測定，旨在探討其與氣道炎癥反應狀態的關聯，并評價其在哮喘診斷和預后分析的價值。

1 研究對象和實驗方法

1.1 研究對象：研究對象均來自本院2004年12月至2008年12月期間住院病例：（1）哮喘的診斷標準及病情嚴重程度的分度均按中華醫學會呼吸病學分會1997年修定的“支氣管哮喘防治指南”［4］的標準進行；哮喘急性發作組36例，男20例，女16例，年齡22～82歲，平均（52±15）歲；哮喘治療緩解組32例：男15例，女17例，年齡32～75歲，平均（53±12）歲，均為哮喘治療后隨訪癥狀體征消失，并維持4周以上；（2）健康對照組30名：男15例，女15例，年齡28～64歲，平均（49±16）歲，為健康志愿的非吸煙者，無過敏史、無呼吸道疾病史，做痰誘導前1個月內無呼吸道感染。各組在年齡分布和性別組成上無顯著性差異（P＞0.05）。

1.2 實驗方法

1.2.1 痰液誘導及處理：哮喘患者（發作組和緩解組）誘導痰液前均吸入支氣管舒張劑喘樂寧200μg，以預防哮喘發作；采用Brightling等［5］報道的方法：用3%高滲鹽水超聲霧化吸入15～20min，用力咳痰至培養皿，向痰液內加入4倍體積的0.1%的二硫蘇糖醇，渦旋震蕩10min；再加入等量的磷酸鹽緩沖液震蕩5min，2 000r／min離心10min；上清液分裝，－70℃凍存待檢。沉淀用磷酸鹽緩沖液懸浮，用錐蟲藍拒染法鑒定細胞活力，＞50%為合格痰。制作細胞涂片，蘇木精－伊紅染色，光鏡下進行細胞學分類。

1.2.2 誘導痰ECP測定：ECP檢測采用熒光酶免疫法，按照ECP熒光酶免疫試劑盒的步驟，采用Pharmacia CAP變應原檢測系統（瑞典，靈敏度2μg／L，測定范圍2～200μg／L）檢測。

1.2.3 統計分析方法：數據輸入SPSS12.0統計軟件包進行統計分析，數值以±s表示，多組間的比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用最小顯著差異法。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 實驗結果

如（表1）所示，哮喘急性發作組EOS數量、ECP測定值明顯高于哮喘治療緩解組、健康對照組（P＜0.01）；健康對照組EOS、Neu數量、ECP測定值明顯低于哮喘急性發作組、哮喘治療緩解組（P＜0.01）；哮喘治療緩解組EOS數量、ECP測定值明顯低于哮喘急性發作組，但明顯高于健康對照組（P＜0.05），哮喘治療緩解組與哮喘急性發作組Neu數量無明顯差異性。

3 討論

近年，人們已經逐步認識到哮喘是一種包括嗜酸粒細胞、肥大細胞、巨噬細胞、T淋巴細胞等炎癥細胞浸潤的慢性炎癥性疾病，多種炎癥細胞在氣道浸潤和聚集，相互作用，可以分泌50多種炎癥介質和25種以上細胞因子，與炎癥細胞相互作用構成復雜的網絡，使氣道反應性增高，氣道收縮，黏液分泌增加，血管滲出增多。氣道炎癥最終導致氣道壁組織結構破壞增厚、基底膠原沉積、平滑肌增生肥大、分泌物閉塞氣道等病理改變。哮喘患者病情惡化可能是由于氣道炎癥加重所至。目前臨床上主要以肺功能、患者的癥狀來間接評價氣道炎癥的輕重，這些間接方式的主要缺點是與氣道炎癥的相關性差。纖支鏡檢查證實，很多以肺功能和臨床癥狀來指導治療的哮喘患者其氣道炎癥持續存在。

表1 誘導痰細胞組成及ECP含量

誘導痰最早用于肺癌的診斷，20世紀90年代初，Pin等把誘導痰引入哮喘患者氣道炎癥評價；近十年來，隨著誘導痰技術的改進和檢測方法的完善，除細胞總數和淋巴細胞分類的重復性較差外，嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、巨噬細胞等細胞分類和上清液液相成分具有良好的重復性，使其成為一種無創評價氣道炎癥的重要方法。嗜酸性粒細胞在哮喘發病機制中有著重要地位。嗜酸性粒細胞是一種毒性細胞，可以通過釋放胞質中的主要堿基蛋白（MBP）、嗜酸性粒細胞陽離子蛋白（ECP）、嗜酸性粒細胞衍生性神經毒素（EDN）等毒性顆粒蛋白損傷靶器官；這些顆粒蛋白是造成哮喘特征性表現的主要原因之一。其中，ECP是嗜酸性粒細胞活化后產生的主要毒性蛋白，能介導氣道上皮和細胞破壞，誘導肥大細胞釋放組胺等，造成氣道炎癥，在嗜酸性粒細胞性炎癥中起到重要作用。

長期治療方案應以氣道炎癥是否抑制為指導原則，根據氣道的炎癥輕重及時調整藥物劑量，使氣道炎癥得到有效控制的同時盡量減少藥物的用量。因此，臨床上連續監測患者誘導痰EOS和ECP的變化，有助于預測哮喘病情的波動情況，對于需要長期治療的慢性支氣管哮喘患者，針對病情制訂相應的治療方案，具有一定的臨床參考價值。

［1］British Thoracic Society.The British guidelines on asthma management.Thorax，1997，52：S1－S21

［2］Rosi E，Ronchi MC，Grazzini M，et al.Sputum analysis，bronchial hyperresponsivness，and airway function in asthma：Results of a factor analysis.J allergy Clin Immunol，1999，103：232－237

［3］傅蓉，陳光瑾，馬瑞琴，等.哮喘患者血清嗜酸性細胞陽離子蛋白及白細胞介素－2受體觀察.中華結核和呼吸雜志，1999，22：211－212

［4］中華醫學會呼吸病學分會哮喘學組.支氣管哮喘防治指南（支氣管哮喘的定義、診斷、治療、療效判斷標準及教育和管理方案）.中華結核和呼吸雜志，1997，20：261－267

［5］Brightling CE，Ward R，Goh KL，et al.Eosinophilic bronchitis is an important cause of chronic cough［J］.Am J Respir Crit Care Med，1999，160（2）：406－410