高危型HPV在宮頸癌前哨淋巴結微轉移中的研究

劉正玲

(山東省臨沂市第二人民醫院，山東臨沂276400)

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取我院2008年1月至2011年12月婦科病房收治的Ia2～Ⅱa期宮頸癌患者共42例。所有患者符合以下條件:臨床分期Ia2～Ⅱa(FIGO，2003);初治病人;臨床檢查無其他部位轉移腫塊，鎖骨上及腹股溝淋巴結無腫大;體格檢查及CT檢查未發現盆腔及腹主動脈旁淋巴結轉移、臨近臟器無侵犯;無其他轉移的癥狀和體征存在;全身或局部無感染;既往無其他腫瘤病史;無嚴重影響患者生存時間或者生活質量的合并癥，其他部位臟器檢查未發現腫瘤;術前未行化療、放療的患者。患者年齡范圍29～65歲，平均年齡41歲，Ia2期2例，Ib期32例，Ⅱa期8例。腺癌4例，鱗癌38例。高分化癌0例，中分化癌28例，低分化癌14例。

1.2 實驗方法

1.2.1 采用放射性核素聯合亞甲藍的方法識別前哨淋巴結。

1.2.2 標本采集:早期宮頸癌術中選取前哨淋巴結標本200 mg，剩余標本送病理科常規病理檢查。

1.2.3 FQ－PCR檢測HPV 16/18:檢測步驟均按照試劑盒說明書進行。

1.3 統計學處理:淋巴結微轉移與臨床病理特征關系的分析采用χ2檢驗。以P＜0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 SLN的檢出率:42例早期宮頸癌患者有40例患者檢出前哨淋巴結標本共82枚。

2.2 宮頸癌前哨淋巴結中HPV16/18的表達:82枚前哨淋巴結，經FQ－PCR法檢測到18例患者26枚前哨淋巴結HPV16/18表達陽性，陽性率為31.7%(26/82)。病理組織學方法檢測有11枚前哨淋巴結有癌轉移，陽性率為13.4%(11/82)，病理陽性淋巴結經PCR法檢測HPV16/18的表達均陽性。經病理組織學方法證實無癌轉移的71枚淋巴結中，經PCR法檢測到15枚前哨淋巴結HPV16/18表達陽性，陽性率為21.3%(15/71)。FQ－PCR法與傳統病理組織學方法檢測早期宮頸癌前哨淋巴結的陽性率，兩者比較，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 PCR方法與常規病理組織學方法檢測前哨淋巴結的比較 例，%

2.3 HPV16/18DNA前哨淋巴結與臨床病理特征間的關系:82枚前哨淋巴結HPVDNA陽性率與臨床分期、腫瘤大小、細胞分化程度、腫瘤浸潤深度有關(P＜0.05)，而與患者年齡、組織類型無關(P＞0.05)，見表2。

表2 HPV DNA前哨淋巴結與臨床病理特征的關系 例，%

3 討論

3.1 前哨淋巴結與宮頸癌:腫瘤的淋巴轉移通常表現為有序的梯隊轉移現象，SLN是指直接接受原發腫瘤淋巴引流的第一個(組)淋巴結，是區域淋巴引流的第一站，是腫瘤最有可能轉移的部位。目前認為聯合應用生物活性染料和放射性同位素法是最佳檢測前哨淋巴結的方法，檢出率達90%，甚至100%。本研究聯合應用藍色染料和放射性同位素作為示蹤劑檢測宮頸癌SLN，42例患者中有40例患者檢測出前哨淋巴結，SLN檢出率達95.2%。有學者［1］提出，通過對SLN進行活檢來了解盆腔淋巴結的狀況，可以使盆腔淋巴結陰性患者避免行盆腔淋巴結清掃術，縮小了手術范圍，減少了手術創傷和術后并發癥。但是有些患者的SLN具有跳躍性，SLN活檢有可能導致SLN的漏診，且由于常規病理檢查中的假陰性結果10% ～20%甚至更高，應在多中心大樣本臨床研究中證實其可行性。

3.2 HPV與宮頸癌:目前的研究結果表明，HPV感染是宮頸癌主要的致病原因。文獻報道，高危型HPV16與HPV18在宮頸癌中的檢出率達75% ～95%［2］。在本研究中，宮頸癌原發灶中HPV16/18的檢出率為95.2%(40/42)，和文獻報道一致。在宮頸癌組織中，高危型HPV主要以整合狀態存在于癌細胞中，且隨著宮頸癌細胞的增殖而存在于新生的癌細胞中［3］。因而在宮頸癌轉移灶中同樣有整合在DNA中的HR－HPV，因此HR－HPV可以作為宮頸癌細胞轉移的分子標志。HPV一般易感染鱗狀上皮細胞，而不易感染盆腔淋巴結組織，因此在盆腔淋巴結組織中檢測到HPV則提示宮頸癌淋巴結存在微轉移。國外學者也有報道，通過檢測宮頸癌患者盆腔淋巴結中HPV的狀況來判斷該淋巴結是否存在微轉移。Lee等［4］通過對57例IB－ⅡA期宮頸癌患者SLN進行檢測。結果在宮頸癌原發灶中有55例(96.5%)檢出HPV DNA，SLN中有44例(80%)患者檢出1個或多個相同HPV DNA亞型，有5例患者術后復發，所有復發患者SLN中均檢出高危型HPV DNA，其中l例患者盆腔淋巴結和SLN術中快速冰凍病理切片檢查和常規病理檢查均未發現腫瘤轉移，所以淋巴結中HPV陽性但組織病理學檢查陰性可預示早期轉移，為減少SLN活檢假陰性率，檢測HPV亞型將起一定作用［5］。國內孫穎［6］等通過對31例宮頸癌患者盆腔淋巴結HPV DNA進行研究，結果盆腔淋巴結HPV DNA的檢出率為58.1%，18例組織病理學檢查無淋巴結轉移的盆腔淋巴結HPV DNA檢出率為27.8%，盆腔淋巴結組織病理學確認轉移與HPV DNA檢出有關，認為盆腔淋巴結HPV DNA檢出陽性是一個有意義的淋巴結轉移預測因子。在淋巴結有轉移、脈管累及及宮體浸潤等宮頸癌患者的盆腔淋巴結中HPVl6/18陽性率高，進一步表明盆腔淋巴結HPVl6/18陽性和淋巴結轉移密切相關。而在臨床中發現有些淋巴結組織病理學檢查陰性且臨床分期較早的患者預后較差，大約20%的復發率［7］，提示很可能存在組織病理學檢查未能發現的微轉移。目前公認的檢測微轉移最敏感而且特異性高的方法是PCR。為了提高實驗結果的可信程度，本研究應用技術成熟、并已廣泛應用于臨床宮頸癌篩查的HPV16/18核酸擴增熒光檢測商品試劑盒。本研究顯示，9例病理組織學陽性前哨淋巴結中HPV DNA均為陽性，71枚病理陰性淋巴結HPV DNA檢出15枚陽性，陽性檢出率為21.3%(15/71)，且HPV亞型均與原發病灶相同，提示淋巴結中HPV為原發病灶轉移而來，證明淋巴結中存在子宮頸癌細胞的轉移。Lukaszuk等［8］報道，用PCR法檢測116例HPV陽性的宮頸癌患者盆腔淋巴結的微轉移情況，結果顯示，HPV陽性檢出率為69.8%，病理陽性的61例淋巴結中HPV均為陽性，微轉移患者所占比率和術后復發率大致相等。提示可以通過檢測HPV來預測宮頸癌盆腔淋巴結微轉移，并指導臨床醫師判斷預后。本研究比較PCR法與常規病理組織學方法檢測前哨淋巴結HPV16/18陽性率，兩者之間的差異有統計學意義(P＜0.05)。提示HPV16/18感染比組織學更早出現，進一步體現了淋巴結轉移的狀態。本研究顯示宮頸癌的微轉移與患者腫瘤大小、臨床分期、腫瘤分化程度及深肌層浸潤有關(P＜0.05)，而與患者年齡及臨床病理類型無關(P＞0.05)。HPV DNA淋巴結陽性率和影響宮頸癌患者預后的臨床特征相關，提示淋巴結HPV DNA陽性代表了宮頸癌的發展與轉移。

4 結論

4.1 聯合應用藍色染料和放射性同位素作為示蹤劑可得到理想的宮頸癌前哨淋巴結檢出率。

4.2 利用FQ－PCR檢測前哨淋巴結中HPV16/18的表達可檢測常規病理檢查遺漏的宮頸癌的淋巴結微轉移。HPV可作為宮頸癌淋巴結微轉移檢測的標志物。

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