烏司他丁對自體回收血液中紅細胞和血小板保護作用的研究＊

梁健華，程平瑞，林翠芳，阮緒廣

（廣東省廣州市番禺區(qū)中心醫(yī)院麻醉科 511400）

異體輸血有許多并發(fā)癥且受到血源的限制，自體血回收是解決血源緊張與防止血源性傳染病的重要途徑。但有研究表明，血液回收過程中可造成一定程度的紅細胞破壞和血小板激活，回輸后出現(xiàn)一系列相關并發(fā)癥。本研究將烏司他丁應用于自體血回收過程中，通過掃描電鏡和流式細胞儀對回收血中紅細胞破壞程度和血小板的活化程度進行觀察和量化，觀察烏司他丁是否減輕自體血回收過程中紅細胞的損傷及血小板的激活，為自體血回輸更好地用于臨床提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院骨科病房2010年8月至2011年9月收治的50例接受骨科椎體手術的患者，ASA分級Ⅰ～Ⅲ級，其中男36例，女14例，年齡33～62歲，平均年齡（48.4±7.2）歲。所有患者術前各項常規(guī)檢驗均正常，無冠心病、糖尿病、血液系統(tǒng)疾病、腦血管病病史，無惡性腫瘤，無嚴重肝、腎功能不全，術中血液沒有受到污染，手術出血量估計在1 000mL以上。50例患者分為研究組和對照組，兩組在性別、年齡、手術時間、術中失血量等一般資料方面的比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 手術方法 兩組患者入院后均給予一般常規(guī)治療和護理，術前常規(guī)肌肉注射0.01mg／kg劑量的阿托品。兩組患者均給予氣管插管靜吸復合全身麻醉的麻醉方式，維持肺泡氣七氟醚的最低有效濃度在（1.0±0.2）MAC左右，手術過程中根據(jù)心率和血壓的變化隨時調(diào)節(jié)瑞芬太尼的用量。麻醉成功后行右側(cè)頸內(nèi)靜脈和左側(cè)橈動脈置管以便對血壓和中心靜脈壓進行持續(xù)監(jiān)測，同時方便采血。手術期間應用HP多功能監(jiān)護儀對患者基本生命體征進行全程監(jiān)測。手術過程中盡量維持平均動脈壓在60～80mm Hg之間。研究組于手術開始前靜脈推注烏司他丁4 000U／kg，并預充6 000U／kg于儲血罐；對照組給予等容量的生理鹽水。兩組均使用北京精產(chǎn)自體-3000型全自動血液回收機對術中出血進行回收、處理，并進一步濃縮成為“洗滌紅細胞”以備回輸給患者。在回收血過程中使吸引器負壓壓力控制在80～120mm Hg之間；根據(jù)出血量調(diào)節(jié)肝素鹽水（生理鹽水500mL加肝素12 500U）的滴速，使肝素鹽水與回收血的體積比為1∶10。

1.2.2 標本采集 兩組血液回收后立即抽取回收血液2mL和3mL于檸檬酸鈉抗凝的試管（s1和s2試管）中，然后從中心靜脈內(nèi)抽血2mL和3mL（最初5mL血丟棄）于檸檬酸鈉抗凝的試管（p1和p2試管）中，標本在15min內(nèi)送檢并固定。

1.2.3 觀察指標和檢測方法 （1）回收血紅細胞的形態(tài)和非雙凹形紅細胞的百分比：采用掃描電子顯微鏡觀察。（2）回收血紅細胞檢測：s1和p1分別用來檢測回收血ATP和2，3-DPG含量，其中ATP試劑由Promega公司提供，2，3-DPG試劑由Roche公司提供。（3）回收血和體內(nèi)血血小板活化程度檢測：預先在美國B-D公司生產(chǎn)FacscaliburⅡ型流式細胞儀試管中加入美國pharmingen公司產(chǎn)的抗人CD41aFITC、CD62pPE、CD45perp抗體各10μL，同時加入鼠抗人IgG1抗體10μL作陰性對照，s2和p2分別用來檢測回收血和體內(nèi)血中血小板表面的GMP-140、P-選擇素，同時對回收血和體內(nèi)血中血小板的活化程度進行量化。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，其中計量資料用±s表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，同組前后比較采用配對t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 回收血紅細胞的形態(tài)和非雙凹形紅細胞的百分比 兩組回收血電子顯微鏡示有少量紅細胞邊緣出現(xiàn)不歸整，大多數(shù)基本保持雙凹圓盤狀，研究組回收血非雙凹形紅細胞百分比為（7.1±2.4）%，顯著低于對照組的（11.6±4.3）%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.2 回收血紅細胞檢測 研究組回收血紅細胞ATP和2，3-DPG含量顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組回收血紅細胞ATP和2，3-DPG含量對比（±s）

▲：P＜0.05，與對照組比較。

組別 n ATP 2，3-DPG對照組25 5.42±1.24 3.32±0.53研究組 25 6.42±1.24▲ 4.08±0.65▲

表2 兩組回收血和體內(nèi)血回輸前后血小板活化程度（±s）

表2 兩組回收血和體內(nèi)血回輸前后血小板活化程度（±s）

▲：P＜0.05，與對照組比較；△P＜0.05，與同組體內(nèi)血（回輸前）比較。

組別 n 回收血血小板活化程度體內(nèi)血血小板活化程度（回輸前）體內(nèi)血血小板活化程度（回輸后）對照組 25 73.8±9.5 23.3±8.6 42.1±5.4△研究組 25 43.6±7.4▲ 20.8±6.1 33.7±4.5▲△

2.3 回收血和體內(nèi)血回輸前后血小板活化程度檢測 研究組回收血和體內(nèi)血回輸后血小板表面的GMP-140含量均顯著低于對照組，回收血和體內(nèi)血回輸后血小板的活化程度均顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。兩組體內(nèi)血回輸后血小板活化程度均顯著高于回輸前，且對照組要顯著高于研究組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

3 討 論

隨著醫(yī)療事業(yè)的發(fā)展，醫(yī)療用血供不應求的矛盾日趨突出，異體輸血可能引起感染性疾病（艾滋病、肝炎等），抑制機體免疫功能，增加術后與病死率相關的炎性反應，降低惡性腫瘤患者術后生存率，自體血回收是解決血源緊張與防止血源性傳染病的重要途徑。隨著自體血液回輸?shù)膹V泛應用，臨床上出現(xiàn)了一系列的并發(fā)癥，包括血紅蛋白尿，血壓下降，術中及術后傷口彌漫性出血；呼吸道阻力升高，肺順應性下降，動脈氧分壓下降，二氧化碳分壓升高，肺水腫等類似于成人呼吸窘迫綜合征（ARDS）的現(xiàn)象；輸血后帶狀核細胞的升高；全身性水腫。這一系列并發(fā)癥被稱為“自體血回輸綜合征”，以上并發(fā)癥的出現(xiàn)與血液回收過程中紅細胞、血小板的破壞和激活有直接關系［1］。

血液回收過程中由于自體血和管道的接觸、吸引器的吸引力作用、洗滌、離心等機械作用，紅細胞的破壞在所難免。ATP主要用于維持細胞膜“鈉泵”的正常功能，保持紅細胞的離子平衡，維持紅細胞膜的正常結(jié)構(gòu)與功能［2-3］。Wang等［4］報道洗滌式血液回收全過程處理可使紅細胞有一定程度破壞（ATP及2，3-DPG含量減少）。本研究結(jié)果顯示，回收血非雙凹形紅細胞百分比顯著高于體內(nèi)血，同時ATP及2，3-DPG含量顯著低于體內(nèi)血，說明在血液回收過程中確實對紅細胞的形態(tài)和功能產(chǎn)生了影響。Bull等［5］認為血液回收時機械力的作用以及血液稀釋都是導致血小板活化的重要因素，血小板活化后會大量釋放GMP-140至血漿，因此，檢測GMP-140水平就能反映血小板的活化程度。本研究結(jié)果顯示，回收血血小板活化程度明顯高于體內(nèi)血，此結(jié)果和之前研究結(jié)果一致。

烏司他丁是一種廣譜的酶抑制劑，主要是從健康男性尿中分離出來的。現(xiàn)代研究結(jié)果顯示，術中使用烏司他丁對機體重要器官如腎臟、肝臟、肺臟和血液系統(tǒng)有保護作用。有相關研究證實烏司他丁能保護紅細胞［6］。江蓮等［7］觀察到它能降低炎性介質(zhì)，保護紅細胞免疫功能。李麗等［8］觀察到CPB期間，烏司他丁通過減輕紅細胞膜脂質(zhì)過氧化反應，對CPB下心內(nèi)直視手術患者紅細胞起到一定的保護作用。另外，烏司他丁能改善血小板代謝，維護血小板正常聚集功能［9-13］。本研究結(jié)果顯示，研究組回收血非雙凹形紅細胞百分比為（7.1±2.4）%，顯著低于對照組的（11.6±4.3）%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；研究組回收血紅細胞ATP和2，3-DPG含量顯著高于對照組（P＜0.05）；研究組回收血和體內(nèi)血回輸后血小板表面的GMP-140含量均顯著低于對照組，回收血和體內(nèi)血回輸后血小板的活化程度均顯著低于對照組（P＜0.05）。兩組體內(nèi)血回輸后血小板活化程度均顯著高于回輸前，且對照組要顯著高于研究組（P＜0.05）。這說明烏司他丁可以很好地保護血液回收過程中外界因素對紅細胞和血小板的破壞和激活。

總之，烏司他丁能減輕自體血回收過程中紅細胞的損傷及血小板的激活，從而減輕血液回輸對機體的不良反應，值得臨床推廣和普及。

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