酶抑制法檢測蔬菜農藥殘留的效果評價

（浙江省農業科學院農產品質量標準研究所，農業部農藥殘留檢測重點實驗室，浙江杭州310021）

農藥殘留是影響蔬菜質量安全的主要因素，直接關系到人民群眾的身體健康，是當前全社會關注的一個焦點（丁常榮和曹學文，2005；胡正生 等，2005；劉鈞 等，2005；孫勝龍 等，2005）。目前，對于蔬菜產品農藥殘留的監控監測主要是利用色譜法的實驗室定量檢測和酶抑制法的快速定性檢測。色譜法可以對農藥殘留進行精確定量分析，靈敏度高，作為一種實驗室檢測技術有較大優勢，但其儀器投資大、檢測時間長、人員技術 要求高，不利于在基層推廣應用（許泓 等，2004；王建華 等，2005；張志恒，2009）。由此，農藥殘留速測法得到了廣泛快速的推廣，目前農業生產基層和流通環節普遍使用農藥殘留 速測儀對日常蔬菜進行監控。酶抑制法速測對操作人員的要求、成本消耗以及后期的維護費用均較低，更重要的是檢測時間短，能夠達到現場快速出結果的需求，對濫用農藥和不法商販有較大的威懾力（陸自強 等，2002）。但是，速測產品檢測結果的準確性及其對蔬菜中各種農藥殘留的控制效果尚未見系統報道。本試驗以4種速測儀及其配套酶試劑為樣本，分析了酶抑制法檢測蔬菜中農藥殘留的靈敏度和準確性，探討其對蔬菜中農藥殘留控制的主要品種和控制限，以期為酶抑制法速測農藥殘留的運用及其發展方向提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

選擇市場上使用量較大的酶抑制法農藥殘留快速檢測儀CL（T1）、FPRD（T2）、TMYQ（T3）、RP（T4）及其配套酶試劑。除T4 儀器配套酶試劑為丁酰膽堿酯酶外，其他均為乙酰膽堿酯酶。氣相色譜儀GC3800（美國Varian 公司），液相色譜儀Waters-2695（美國Waters 公司）。

2010年9～12月在市場隨機采購葉菜類（大白菜、普通白菜、葉用萵苣、菠菜、芹菜、茼蒿、烏塌菜）、甘藍類（青花菜、花椰菜、結球甘藍）、根菜類（白蘿卜）、茄果類（茄子、辣椒）、瓜類（黃瓜、西葫蘆）和豆類（豇豆、四季豆）共計75份蔬菜樣品。

1.2 檢測殘留農藥

甲胺磷、氧樂果、甲拌磷、對硫磷、甲基對硫磷、水胺硫磷、磷胺、久效磷、克百威、滅多威、敵敵畏、乙酰甲胺磷、樂果、毒死蜱、三唑磷、甲萘威、抗蚜威。農藥標準品濃度均為1 000 mg·L-1，購自農業部環境保護科研監測所。

1.3 試驗方法

2010年9～12月在農業部農產品及轉基因產品質量安全監督檢測測試中心（杭州）實驗室內進行樣品室內試驗。

1.3.1 靈敏度 將各種標準溶液分別配制成0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.3、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg·L-1濃度梯度溶液，按照使用說明書上的速測方法，用4種速測儀進行測定，根據抑制率值判定其靈敏度，3次重復。

1.3.2 檢測限 以毒死蜱為試驗農藥，采集不同毒死蜱濃度含量的普通白菜，用氣相色譜儀精確定量檢測毒死蜱含量，并分別用4種速測儀檢測，記錄檢測結果，判定其最低檢測限。

1.3.3 準確度 以假陽性和假陰性結果進行判定。假陽性：用色譜定量法檢測市場采購的蔬菜樣品，對于儀器檢測為陰性的42份樣品，分別用4種速測儀進行檢測，與儀器檢測結果的一致性進行比較，分析假陽性率。

假陰性：用色譜精確定量檢測30份不同毒死蜱含量濃度的蔬菜樣品，分別 用4種速測儀進行檢測，判定結果一致性，分析假陰性率。

1.4 檢測方法

速測法：依據儀器使用說明書，同時乙酰膽堿酯酶速測儀依據國家檢測方法標準GB/T 5009.199—2003《蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速檢測》進行測定；丁酰膽堿酯酶速測儀依據農業行業標準NY/T 448—2001《蔬菜上有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘毒快速檢測方法》進行測定。乙酰膽堿酯酶抑制率≥50%判定為陽性樣品，丁酰膽堿酯酶抑制率≥70%判定為陽性樣品。

色譜法：依據農業部行業標準NY/T 761—2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留檢測方法》進行測定。

2 結果與分析

2.1 農藥殘留檢測靈敏度

4種農藥殘留快速檢測儀對17種農藥檢測的靈敏度見表1。4種農藥殘留快速檢測儀不是對所有有機磷和氨基甲酸酯類農藥都能靈敏反應，且不同農藥檢測靈敏度差異也較大。其中，高毒農藥克百威檢測靈敏度最好，在0.003～0.1 mg·kg-1之間，基本低于國家標準限值要求（0.02 mg·kg-1）；其次為滅多威，靈敏度在0.01～0.5 mg·kg-1之間，在國家標準限值以下；而久效磷、甲胺磷檢測的靈敏度范圍在1～3 mg·kg-1之間，氧樂果基本在3～5 mg·kg-1之間；對于甲拌磷、對硫磷、甲基對硫磷、水胺硫磷等其他高毒農藥檢測不靈敏，靈敏度均高于10 mg·kg-1。中毒農藥甲萘威檢測的靈敏度較高，在0.15～0.5 mg·kg-1之間，遠低于國家標準限值（2 mg·kg-1）；抗蚜威的靈敏度在0.3～4 mg·kg-1之間，除T3 檢測儀外均高于國家標準限值（1 mg·kg-1）。可見，酶抑制法并不能靈敏檢測到蔬菜中所有有機磷和氨基甲酸酯類農藥，而只對部分農藥靈敏度較高，對于部分高毒農藥及蔬菜中使用較多的中毒農藥毒死蜱、三唑磷農藥靈敏度不高。

表1 4種農藥殘留快速檢測儀對17種農藥檢測的靈敏度

2.2 農藥殘留檢測限

采用酶抑制法速測蔬菜中毒死蜱的檢測限不理想，基本在10 mg·kg-1以上。其中，最好的速測產品T3 檢測限也達到了5.0 mg·kg-1，高于國家標準蔬菜限值要求（葉菜類0.1 mg·kg-1），T1 和T2 產品檢測限均為10.8 mg·kg-1，而T4 產品檢測限大于11 mg·kg-1。可見，當蔬菜中毒死蜱含量高于國家標準時，用速測產品檢測仍然會顯示合格。可能是速測法樣品提取過程簡單，蔬菜中農藥提取不完全，導致檢出限偏高；此外，也可能是速測儀及其配套酶試劑對于毒死蜱的檢測不靈敏，導致了蔬菜中毒死蜱速測結果達不到標準要求。

2.3 農藥殘留檢測準確性

2.3.1 假陽性表2結果表明，酶抑制法速測的結果存在假陽性現象，假陽性率T1 為19.0%、T2 為7.1%、T3 為26.2%、T4 為16.7%。可見，部分速測產品假陽性率偏高，可能是因為速測中使用膽堿脂酶對某些蔬菜品種所含的干擾物質抗干擾能力不強造成的。因此，對于蔬菜速測陽性結果，必須用色譜法檢測進一步確認，才可判定結果的準確性。供試的5 類蔬菜品種葉菜類、甘藍類、豆類、瓜類、茄果類，未見有某一品種整體呈假陽性（圖1），但經酶抑制法檢測每一類蔬菜均可能出現假陽性問題。

表2 蔬菜有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留檢測色譜法和速測法比對假陽性結果

2.3.2 假陰性 由表3可見，目前酶抑制法檢測蔬菜毒死蜱農藥殘留假陰性率較高。檢測結果根據國家標準GB2763—2005 進行判定，假陰性率均在20%以上（T1 為20.0%、T2 為33.3%、T3 為20.0%、T4 為30.0%），平均假陰性率為25.8%。根據GB/T5009.199—2003《蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速檢測》標準要求，酶抑制法陽性結果的符合率應在80%以上，可見，目前速測產品對于毒死蜱檢測假陰性率偏高。可能是速測法以在時間上求快為主，樣品前處理提取方式與色譜檢測標準方法相比簡單，農藥成份提取效率低；此外，根據溶液試驗結果，速測產品對于毒死蜱普遍不靈敏也導致了樣品檢測不能達到安全限控制的要求。

圖1 不同品種蔬菜酶抑制法速測假陽性結果

表3 蔬菜毒死蜱農藥殘留檢測色譜法和速測法比對假陰性結果

此外，供試的葉菜類、甘藍類、瓜類、茄果類、根菜類蔬菜中未發現一類蔬菜出現全部假陰性現象（圖2）。但四季豆在T4 快速檢測儀檢測時全部表現為陰性，說明不同速測產品酶試劑對不同蔬菜產品的檢測靈敏度也存在差異，因此，在產品投入使用前有必要對典型蔬菜品種殘 留農藥的靈敏性進行驗證，以確保有效控制目標農藥。

圖2 不同品種蔬菜毒死蜱殘留速測假陰性結果

3 結論與討論

酶抑制法檢測蔬菜中農藥的種類有限，對不同農藥品種靈敏度差異較大。9種高毒農藥中，對克百威、滅多威的檢測靈敏度相對較好，分別在0.003～0.1 mg·kg-1和0.01～0.5 mg·kg-1之間，低于國家標準限值；甲胺磷、氧樂果、久效磷及磷胺靈敏度在1 mg·kg-1以上，高于國家標準限值，而對甲拌磷、對硫磷、甲基對硫磷、水胺硫磷不靈敏。中毒農藥品種中，甲萘威靈敏度較高，在0.01～0.5 mg·kg-1之間，低于色譜定量方法的檢出限，而對毒死蜱、三唑磷等蔬菜中經常檢出的農藥靈敏度不高。

試驗中各種酶抑制法速測儀溶液檢測限與其實際標注檢測限也存在差異。如T1 標注甲胺磷檢測限為0.4 mg·L-1，而實測值為2.5 mg·L-1；T2 標注甲胺磷、敵敵畏檢測限優于國家標準（即分別為＜0.05 mg·L-1和＜0.2 mg·L-1），而實測檢測限分別為2 mg·L-1和10 mg·L-1。與GB/T5009.199—2003 和NT/T448—2001 標準檢測限比較，各速測檢測限也不盡相同，部分指標檢測限達不到國家標準要求。

本試驗對常見蔬菜品種進行了檢測，結果部分檢出值與真實值存在偏離，即有假陽性和假陰性現象，蔬菜產品假陽性率為7.1%～26.2%，說明蔬菜批量速測時，可能存在誤判問題。因此，對于不合格樣品，一定要通過色譜法進一步檢測確認后再做判定。由于與色譜法比較速測檢測限高出2～3個數量級，因此，檢測結果無法完全滿足國家標準中農藥的最大殘留限量要求值，因此，以國家標準來評判速測檢測結果，會導致總體上假陰性率偏高，即實際檢測工作中蔬菜的合格率偏高問題。因此，速測方法作為控制蔬菜高毒具有重要作用，但作為執法依據結果精確度不夠。

本試驗評價結果表明，酶抑制法快速檢測蔬菜中農藥殘留，因靈敏度差異，已不能適應目前大部分農藥殘留的檢測。但是，因有機磷和氨基甲酸酯類農藥一般在1 mg·kg-1以上甚至更高含量時才可能出現人體中毒，因此酶抑制法速測仍可作為監控手段。此外，速測對于生產者也起到威懾作用。

因酶抑制法檢測結果與酶反應的活性、反應溫度、酶和底物的濃度、pH值、反應時間等密切相關（余向陽 等，2005；楊建紅 等，2006；于基成 等，2006；劉暢 等，2007）。而且，蔬菜中次生物質對酶抑制劑的干擾也十分嚴重，如蔥、蒜等含有刺激性物質的樣品對酶有較強的抑制作用（滕葳 等，2003；孫勝龍 等，2005）。此外，樣品和提取液的量、提取時間、取樣部位及提取液的澄清度也影響著速測結果的準確性。因此，為更好的發揮速測作用，對蔬菜產品中農藥殘留進行控制，有必要進一步提高和改進現有速測方法的酶試劑質量和前處理方法。尤其要提高速測法對氧化樂果、對硫磷、甲拌磷、甲基對硫磷、敵敵畏、毒死蜱、馬拉硫磷、三唑磷等高毒和經 常性檢出農 藥的檢測靈敏度，提升甲胺磷、久效磷等高毒農藥的靈敏度達到國家標準限值要求。

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