ABO新生兒溶血病實驗室檢測方法及臨床應用

黎海瀾 綜述，焦 偉 審校

（廣西壯族自治區人民醫院輸血科，南寧 530021）

近年來對新生兒溶血病（HDN）的研究越來越受關注，HDN的早期診斷與防治已成為臨床研究的熱點。現就ABOHDN實驗室檢測方法及臨床應用等進行綜述。

1 ABO-HDN的發病機制及實驗室檢測的臨床意義

新生兒溶血病是由于母嬰血型不合而引起的同族免疫性溶血，臨床表現為不同程度的黃疸、貧血、肝脾腫大，嚴重者可有核黃疸，甚至死亡［1］。ABO-HDN是ABO血型抗體引起的，在O型母親所生的A型或B型嬰兒中有較高的發生率，由于自然界廣泛存在類A和類B物質，故ABO-HDN第1胎即可發病，但通常病情較輕，隨著妊娠次數增加，發病率會相應增高，病情相對嚴重［2］。一般由抗-A引起的 HDN要比抗-B常見［3］。在A型、B型等母親所生B、A、AB型嬰兒僅少數發生溶血病。Wang等［4］曾報道1位A型母親的血清中具有高滴度的IgG B抗體，其效價大于1∶1 024，導致B型新生兒發生溶血；Deng等［5］報道了1例更罕見的ABO-HDN，1位O型母親所生具有cisAB血型的嬰兒發生ABO新生兒溶血，在新生兒血清中同時檢測出IgG抗-A和抗-B兩種抗體，該嬰兒具有高水平的膽紅素血癥以及嚴重的貧血。因此ABO-HDN不局限于O型母親所生血型不合嬰兒，A型／B型母親所生血型不合嬰兒也可發生，其研究顯得越來越重要。

據統計，孕婦與胎兒發生ABO血型不合的概率為20%～25%，而其中發生溶血病的概率為10%左右。西安地區3 876例新生兒溶血病產后檢測資料的分析結果顯示，由A、AB血型不合引起的HDN占被檢樣本的0.08%，由B、AB血型不合引起的HDN占被檢樣本的0.1%，而由O、A血型不合引起的HDN占被檢樣本的20.12%，由 O、B血型不合引起的 HDN占被檢樣本19.74%，后兩種血型不合共占39.86%［6］。因此對ABO-HDN進行早期、準確診斷有重要臨床意義。

2 ABO-HDN實驗室檢測方法

血型血清學診斷是確診HDN的主要依據。其基本程序為第一步血型鑒定，第二步進行三項試驗，第三步從三項檢查結果對ABO-HDN進行實驗室診斷。

2.1 新生兒及父母血型鑒定方法 這是檢查HDN的第一步，以便考慮以后進一步檢查的程序。血型鑒定的方法很多，常用試管法，被認為是最可信賴的方法。隨著實驗技術的不斷發展，單克隆凝膠血型卡已廣泛應用于臨床，全自動血庫系統血型鑒定也逐步在臨床推廣應用［7］。

2.2 檢測導致新生兒紅細胞破壞的IgG抗-A（B）的方法

2.2.1 臨床上對HDN的實驗室診斷主要依靠HDN血型血清學檢查，最有力的證據是證實新生兒紅細胞被來自母親的IgG抗體致敏。常用的檢測方法包括紅細胞致敏抗體放散試驗、血清游離抗體試驗、紅細胞直接抗球蛋白試驗，被稱為HDN“三項試驗”。

2.2.2 新生兒溶血病紅細胞致敏抗體放散技術 在HDN“三項試驗”中，患兒紅細胞致敏抗體放散試驗敏感度最高，是判定新生兒溶血病最為重要的依據。熱放散法是ABO-HDN診斷最常用、最經典的試驗，它是通過熱釋放的方法將致敏在紅細胞表面的抗體放散到鹽水（或AB型血清）中，再用已知的抗原檢測鹽水中的相應抗體。然而，因其為物理方法，熱放散試驗效果受諸多因素的影響，搖動的頻率與力度、放散時間和溫度等均難以控制［8］。多年來人們對實驗室檢測方法進行不斷地探索，以尋找更為敏感、簡捷的放散方法，如2004年孫愛農等［9］研究發現改良氯仿放散法適合檢測由IgG抗-A或抗-B導致的ABO-HDN，且敏感性并不比傳統熱放散試驗低；2000年周曉華等［10］報道微波放散法可以作為紅細胞抗體放散的一種方法。但由于客觀原因，均未能在臨床上推廣應用。近年來酸放散試驗逐漸應用于HDN的實驗室診斷［11］，且越來越受到人們的重視，已被英國血液學標準委員會列為紅細胞血液免疫學檢測常規方法。

2.2.3 患兒紅細胞釋放抗體及血清游離抗體檢測方法 新生兒溶血病的嚴重程度主要與抗體種類、效價高低以及紅細胞被致敏程度有關。游離實驗是檢測新生兒血清中是否存在與其紅細胞不配合的ABO以外抗體和（或）IgG抗-A（B），可提示病情嚴重程度［12］。使用酶試驗檢測引發HDN的抗體，被認為工序繁瑣，對技術人員操作要求高，難度大，耗時久，且在操作過程中易出現假陰性結果［13］。也有研究者利用不完全抗體快速反應試劑（主要含凝聚胺、聚乙二醇、枸櫞酸鈉）進行HDN的實驗室檢查診斷［14］。有人將凝聚胺技術應用于HDN抗體檢測，認為凝聚胺法的敏感性能達到要求，且快速簡便［15］。近幾年微柱凝膠技術（MGCT）被引進HDN血型血清學實驗，對臨床標本檢測的敏感性大大提高［16－20］。

2.2.4 患兒紅細胞直接抗球蛋白試驗 直接抗球蛋白試驗陽性在新生兒溶血病診斷中有著非常重要的作用，陽性結果提示患兒體內紅細胞可能被抗體致敏。因此直接抗球蛋白試驗敏感性的提高有益于HDN初次確診率的提高。ABO型溶血病因紅細胞上抗體結合少，故直接法常顯陰性，須作改良直接法、抗體釋放試驗及游離抗體試驗［21］。

2.3 檢測母體針對新生兒的免疫性抗體 母親標本做與患兒血型抗原相對應IgG抗-A（B）效價的測定。新生兒 ABOHDN的發病率隨其母親體內IgG抗體效價的升高而升高，且與母親體內IgG1呈正相關［22］。有研究表明，HDN的發病率隨母體內抗-A（B）水平的升高而遞增，但仍有一些高抗體水平的個體并無HDN，而一些低抗體水平的個體發生了中度至重度的HDN［22－24］。這可能與抗體的IgG亞型有關，有學者認為主要是IgG1抗體引起嚴重的HDN，而另一些學者研究顯示：嚴重的HDN的發生與IgG1和IgG3存在相關性［25－27］。盡管如此，有關IgG亞型的定量檢測目前仍處于試驗階段，要應用于臨床尚待進一步的研究。雖然有關IgG抗體滴度與HDN嚴重程度之間的相關程度尚未確定，但目前仍作為臨床對新生兒溶血病的實驗室診斷依據之一。

3 結束語

HDN是由于母－胎間血型不合而引起的免疫性溶血性疾病，是兒科最常見的急性溶血性疾病之一，一直備受婦幼醫療學界的重視，盡管產前、產后、都有有效的治療手段，但準確、及時的實驗室檢查檢測，做到早發現、早防治仍將是值得探討和研究的熱點。

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