趨化因子受體7和血管內皮生長因子C在前列腺癌中的表達

袁 振 蔣雷鳴 王 松 (桂林醫學院附屬醫院泌尿外科，廣西 桂林 541001)

腫瘤的生長、轉移受多種因素影響，有研究〔1〕發現多種腫瘤細胞可表達趨化因子受體(CCR)7，而其配體CCL19/CCL21則高表達于癌細胞轉移相關部位，且他們與多種腫瘤的遷移、侵襲和轉移密切相關。血管內皮生長因子C(VEGF-C)被認為是特異性很強的新生淋巴管刺激因子，在腫瘤微環境中，腫瘤細胞、基質成纖維細胞可分泌VEGF-C，其通過激活受體促進內皮細胞增生，亦可增強淋巴管的通透性，有利于逃逸的腫瘤細胞通過淋巴管道發生轉移〔2〕。但CCR7和VEGF-C在前列腺腫瘤中的研究甚少，兩者在前列腺腫瘤淋巴轉移中是否具有協同作用也罕見報道，本實驗采用快捷免疫組化方法檢測前列腺癌組織中CCR7和VEGF-C蛋白的表達情況，探討其與前列腺癌臨床病理因素和淋巴轉移的關系。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 標本取自桂林醫學院附屬醫院2007～2009年手術切除并經病理檢查確診且術前未經任何抗癌和激素內分泌治療的前列腺癌組織蠟塊45例，年齡56～85歲，平均72歲。按修訂的Gleason評分系統(2004年)進行病理分期:2～4分為高分化癌，10例;5～7分為中分化癌，16例;8～10分為低分化癌，19例。按TNM分期(2002年)標準進行臨床分期:T1～T225例，T3～T420例;經臨床客觀檢查、影像檢查及手術資料判斷其中有淋巴結轉移15例，無淋巴結轉移30例。對照組15例石蠟標本均取自前列腺電切術且經病理證實為良性前列腺增生。

1.2 主要試劑及方法 兔抗人CCR7多克隆抗體是加拿大PLLABS公司產品(購自深圳華拓生物技術公司 PL031305R，rabbit IgG)。兔抗人VEGF-C多克隆抗體(ZA-0266)購于北京中杉金橋生物技術有限公司。DAB顯色劑購于福州邁新生物技術有限公司。嚴格按照二步快捷免疫組化法試劑盒使用說明書進行操作，行CCR7和VEGF-C免疫組化染色，DAB顯色。以PBS代替一抗行陰性染色，用已知陽性切片做陽性對照。

1.3 結果判定 根據染色的深度及陽性細胞的數量分別記分，無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細胞數＜5%為0分，5% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51% ～75%為3分，＞75%為4分。二項結果相加，＜2分陰性，2～3分弱陽性，4～5分中等陽性，6～7分強陽性。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件進行 χ2檢驗;CCR7和VEGF-C相關性采用Spearman秩相關性分析。

2 結果

2.1 CCR7和VEGF-C在不同前列腺組織中的表達 CCR7和VEGF-C蛋白在前列腺癌組織中陽性表達率分別為64.45%和68.89%，CCR7和 VEGF-C蛋白主要定位于細胞膜與胞質。CCR7和VEGF-C蛋白在良性前列腺增生組織中表達率分別為13.33%、26.67%，癌組織與正常組織比較差異顯著(P＜0.01)。在高、中組和低分化組中CCR7和VEGF-C蛋白陽性表達率分別為50.00%和84.21%，53.85%和89.47%，組間比較差異顯著(P＜0.05);在不同TNM分期中，T1～T2組的CCR7和VEGF-C蛋白陽性表達率分別為44.00%和52.00%，明顯低于T3～T4組的90.00%和90.00%，差異顯著(P＜0.01);轉移組的CCR7和VEGF-C蛋白陽性表達率分別為93.33%和100%，明顯高于無轉移組50.00%和53.33%，同樣差異顯著(P ＜0.01)。

2.2 CCR7和VEGF-C在前列腺癌中表達的相關性 CCR7和VEGF-C蛋白在前列腺癌中同時表達陽性57.78%，同時陰性24.45%，二者正相關(rs=0.616，P ＜0.01)。

3 討論

CCR7/CCL21主要與腫瘤向淋巴系統轉移相關，而CXCR4/CXCL12則主要與腫瘤向肺、肝臟、骨髓和腦等遠端器官轉移相關〔3，4〕。更多研究進一步證實〔5，6〕，多種腫瘤細胞均可表達趨化因子受體CCR7，且CCR7陽性的腫瘤細胞優先轉移至其配體CCL21和/或CCL19富集的淋巴結內從而促進腫瘤的轉移。近年來，關于黑色素瘤、頭頸部腫瘤、乳腺癌及胃癌的研究，都表明了CCR7在促進腫瘤特異性地向淋巴結轉移過程中的重要作用。在小鼠移植瘤實驗中發現，鼠黑色素瘤高表達CCR7，且能明顯提高其向區域淋巴結轉移的速度和效率，而且通過其單克隆抗體可阻斷CCL21的作用，能阻止淋巴結轉移的發生，這表明CCL21/CCR7的確可介導淋巴結轉移〔7，8〕。本研究說明CCR7在前列腺癌淋巴轉移中起關鍵作用;同時CCR7表達還與腫瘤病理分化程度及臨床分期密切相關，且隨腫瘤惡性程度增加CCR7表達有逐漸增強趨勢。

新的淋巴管生成是腫瘤淋巴道轉移的始動因素〔9〕。淋巴管生長因子VEGF-C作為VEGF家族成員之一，是促進淋巴道新生的關鍵因子。在成人，VEGF-C通過結合并激活淋巴內皮細胞表面的受體VEGFR-3，能促進淋巴內皮細胞的增殖、存活與遷移〔10〕。在動物模型中發現，VEGF-C的過表達可誘導腫瘤新生淋巴管生成，促進淋巴結轉移。VEGF-C通過旁分泌的形式結合表達于微淋巴管內皮的特異性受體VEGFR-3，導致受體酪氨酸磷酸化，誘導微淋巴管的生成并影響淋巴管內皮的通透性，從而促進腫瘤轉移〔11〕。還有文獻報道VEGF-C還可以促進腫瘤新生血管的形成，腫瘤血管生成促使腫瘤的體積增加，腫瘤邊緣部位的腫瘤細胞易通過靜脈-淋巴管吻合處從血循環中進入淋巴管，并且淋巴結轉移的概率隨血循環中腫瘤細胞的增加而增高，因此腫瘤血管生成對淋巴結轉移具有間接的促進作用〔12〕。Valtola等〔13〕對乳腺癌的研究結果也證實，VEGF-C 陽性表達者的淋巴轉移率和死亡率均高于陰性表達者。本研究說明VEGF-C在前列腺癌淋巴轉移中起關鍵作用;VEGF-C表達還與腫瘤病理分化程度及臨床分期密切相關，且隨腫瘤的發生、發展VEGF-C表達有逐漸增強之勢;VEGF-C在取自尸檢的4例正常前列腺組織均也呈陰性表達。總之，VEGF-C在前列腺癌的發生、進展和轉移中起著重要作用，因此檢測其表達對腫瘤進展程度、有無淋巴轉移有一定臨床意義。

CCR7和VEGF-C在前列腺癌的疾病進程中有一定協同作用，Cassella等〔14〕研究認為，VEGF-C激活的淋巴管可促進淋巴管內皮細胞產生更多的趨化因子CCL21，這樣更方便CCR7表達陽性的腫瘤細胞進入淋巴管內。本研究提示在前列腺癌的疾病進程中CCR7與VEGF-C的表達正相關，兩者之間具有某種協同促進作用，但具體機制還不十分清楚。有研究認為〔15〕靶器官趨化因子及腫瘤細胞中受體的表達在決定腫瘤細胞轉移部位上起著關鍵作用。腫瘤細胞可能發生了基因突變或翻譯異常致表達CCR7，并通過趨化因子調節淋巴細胞歸巢的機制而形成轉移。腫瘤組織中VEGF-C表達增高，促進淋巴管生成和通透性增強，淋巴內皮表達的趨化因子也相應增多。CCR7陽性的腫瘤細胞受到來自淋巴管內皮和淋巴結中趨化因子的吸引，最終侵入淋巴管而發生轉移。

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