人胃腺癌組織中MMP-9及其與臨床病理因素的關(guān)系的研究

何健 漆興芝 樊松 李麗華

在我國，胃癌化療效果不佳，晚期胃癌化療一線有效率在30%左右，目前為止還沒有標準的一線、二線化療方案，近幾年分子靶向藥物在肺癌、乳腺癌、淋巴瘤等腫瘤方面的成功，為胃癌的治療提供了新的思路。特異性強的分子靶向治療是近年來用于胃癌治療的新方法。胃癌分子標記物，對于早期發(fā)現(xiàn)胃癌，提高胃癌的療效和延長患者生存期有重要的臨床意義。人類基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)基因位于染色體20q12～q13，通常情況下，它在正常胃組織中表達量極少。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2011年2月至2012年7月在本院行胃腺癌手術(shù)的59對患者的術(shù)后蠟塊和臨床病理資料，每例均有距胃腫瘤組織至少3 cm以上的正常胃組織作為對比。每位患者均未行術(shù)前介入治療及放、化療。

1.2 方法 采用MaxVisionTM2/HRP法檢測癌及正常胃組織中的 MMP9。切片先脫蠟、水化，再加熱，然后流水冷卻。加過氧化物酶阻斷試劑，再加一抗置濕盒內(nèi)，加 MaxVisionTM2/HRP試劑，室溫下孵育15分。顯色、蘇木素復染1 min，樹膠封固。采用美國Sigma-Aldrich公司提供的陽性病理切片作為陽性對照。

1.3 結(jié)果判定 雙盲下，由本院病理科的2名副主任醫(yī)師行閱片判斷。在光學顯微鏡下(×400)10個視野計數(shù)，每視野計數(shù)100個細胞。細胞核或胞漿內(nèi)出現(xiàn)淡黃色、黃棕色、褐棕色顆粒判為陽性細胞。根依據(jù)陽性細胞著色的強弱和陽性百分比率兩個方面進行判別：(1)無染色為0分;淺黃色為1分;黃棕色為2分;褐棕色為3分(2)無陽性為0分;陽性細胞百分比率≤25% 為1分;陽性細胞百分比率26%～50% 為2分;陽性細胞百分比率51% ～75% 為3分;陽性細胞百分比率≥76% 為4分。兩種判斷評分相加后，按0～1分判為(-)，2～3分判為(+)，4～5分判為(++)，6～7分判為(+++)的標準判斷結(jié)果。而(+)、(++)、(+++)均判斷為組織染色陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法 使用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，組間用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義，檢測水準取雙側(cè)。

2 結(jié)果

MMP-9在胃腺癌中有59例表達，陽性率為76%(45/59);在正常胃黏膜中有7例表達，陽性率為12%(7/59)，前者明顯高于后者，P＜0.001，兩者MMP9表達有明顯差異。組別陽性率及 p值，性別：男32/43例，女13/16例，P=0.738;年齡：＜60歲26/35，≥60歲19/24，P=0.762;腫瘤直徑：≥2 cm 31/37，＜2 cm 14/22，P=0.114;組織學分級：高/中分化9/18，低/未分化36/41，P=0.006;浸潤深度：早期10/18，進展期35/41，P=0.021;區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有34/39，無11/20，P=0.010 遠處轉(zhuǎn)移：有 18/19，無 27/40，P=0.024臨床分期：I/II期12/21，III/IV期 33/38，P=0.023。

3 討論

胃腺癌浸潤與轉(zhuǎn)移的惡性生物學行為，其實質(zhì)是癌細胞自原發(fā)灶脫落直接向周圍組織中浸潤擴展，或者是進入淋巴管或血管，通過血流或淋巴液，到達遠處靶組織中定植，再形成新的繼發(fā)灶。而這個過程的第一步便是破壞脈管的基膜和周圍基質(zhì)，所以胃血管基底膜及周圍基質(zhì)是否完整，是癌細胞浸潤的關(guān)鍵。

由Grossji1962年首次報道的基質(zhì)金屬蛋白酶家族(matrix metalloproteinases，MMPs)是組高度保守的蛋白水解酶家族，他能降解全身各種基底膜(basilar membrane，BM)和細胞外基質(zhì)(eartecnularmartix，ECM)，迄今為止發(fā)現(xiàn)和純化的基質(zhì)金屬蛋白酶有20多種，與人類有關(guān)的共有17個。基質(zhì)金屬蛋白酶參與生成血管、細胞的遷移、胚胎發(fā)育、愈合傷口、惡性腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移等多種病理及生理過程。根據(jù)酶與底物親和力及結(jié)構(gòu)域的不同，可將基質(zhì)金屬蛋白酶分為4組，各組作用于不同的基底膜、細胞外基質(zhì)和其他的金屬蛋白酶家族成員。基質(zhì)金屬蛋白酶9屬于第2組，又叫明膠酶B，人類基質(zhì)金屬蛋白酶9基因位于染色體20q12～q13，是基質(zhì)金屬蛋白酶中分子量最大的蛋白酶，其分子量大約是92KD。

在腫瘤細胞浸潤組織屏障向遠離原發(fā)瘤部位移動的過程中，需要降解細胞外的基質(zhì)來使腫瘤細胞轉(zhuǎn)移。MMP9能有效分解基底膜的主要成分IV型蛋白膠原。有研究顯示MMP9在宮頸癌［1］、腎細胞癌［2］等惡性腫瘤中過表達。它在正常胃組織中表達量極少，有少數(shù)研究報道胃腺癌組織中MMP9表達增高。

在本研究中：胃腺癌中MMP9表達的陽性率明顯高于正常胃黏膜中的表達，陽性率為76%比12%(P＜0.001)，兩者的MMP9表達有顯著差異。胃腺癌中的MMP9表達的增多與患者性別、年齡和腫瘤直徑無相關(guān)(P＞0.05)，而與浸潤深度、組織學分級、有無遠處轉(zhuǎn)移、有無區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有相關(guān)(P＜0.05)，組織學分級低的、浸潤黏膜下的、有遠處轉(zhuǎn)移或者區(qū)域淋巴結(jié)的、分期晚的患者，MMP9陽性率更高。這些結(jié)果與其他文獻報道的相近。

這些結(jié)果表明：胃腺癌中MMP9增多是促進胃腺癌產(chǎn)生、浸潤、轉(zhuǎn)移的因素之一，且這種促進作用部分是通過MMP9降解細胞外基質(zhì)與膠原來實現(xiàn)的。

［1］ Boyer J，Maxwell PJ，Longley DB，et al.5-Fluorouraeil：identification of novel downstream mediators of tumor response.Anticaneer Res，2004，24(2A)：417-423.

［2］ Liu Y，Xiao Z，Li M，et al.Quantitative proteome analysis reveals annexin A3 as a novel biomarker in lung adenocarcinoma.Pathol，2009，106：570-579.