中藥復方和復方制劑治療肺癌作用機制的實驗研究進展

孫超龍，謝慧珺

(河南中醫學院，河南 鄭州450008)

原發性支氣管肺癌(primary bronchogenic carcinoma)，簡稱肺癌(lung cancer)，為起源于支氣管黏膜或腺體的惡性腫瘤［1］。目前，肺癌的發病率和死亡率不斷上升［2］，我國的一項回顧調查資料［3］顯示:肺癌死亡率至2007年升至30.84/10萬，已取代肝癌成為中國首位惡性腫瘤死亡原因。在治療上，西醫針對于早期肺癌以手術為主，針對于中晚期肺癌，以放、化療為主。然而，大多數肺癌患者確診時已屬于中、晚期，手術的機會大為減少，而且單純放、化療毒的副作用相當大，給患者帶來很多痛苦［4］。大量的臨床實踐［5］證明:中藥復方和復方制劑有良好的抗肺癌作用，可以延長中晚期肺癌患者的帶瘤生長時間，提高其生存質量，減少放、化療所帶來的副作用。本文對近年來中藥復方和復方制劑治療肺癌機理的實驗研究進行概述，以期為今后的進一步研究提供依據。

1 細胞毒作用

細胞毒作用是指對細胞的直接殺傷作用，中藥復方和復方制劑可以作用于癌細胞生長的不同階段，使癌細胞停止于增殖周期中的某一環節，引起死亡或破壞癌細胞膜引起細胞自溶［6］。鄭璐玉等［7］篩選出麥門冬湯合千金葦莖湯的8個有效部位，將其作用于非小細胞肺癌H460和正常人胚肺成纖維細胞HFL－1，結果發現6個部位對NCI－H460細胞有顯著的毒作用。鄒璽等［8］采用3種方法對克瘤丸進行提取，以MTT法觀察不同濃度克瘤丸作用下人肺癌細胞株A549的生長情況，結果表明:當克瘤丸組合提起劑濃度在5 mg/mL時對肺癌細胞有顯著的殺傷作用。

2 影響細胞生長周期

腫瘤的發生與細胞周期調控失衡有密切關系。崔德利等［9］選取六君二陳解毒湯及其拆方六君二陳湯、半夏陳皮湯和清熱解毒湯對Lewis肺癌荷瘤小鼠進行干預治療，運用流式細胞儀測定諸方對腫瘤細胞周期和凋亡的影響。結果表明六君二陳解毒湯及其拆方皆可干預Lewis肺癌移植瘤腫瘤細胞周期，使阻滯在G0/G1期的細胞比例增加，進入S期的細胞減少，從而抑制Lewis肺癌細胞的增殖。曹勇等［10］采用流式細胞術觀察健脾補腎解毒方不同劑量藥物血清對人肺腺癌A549細胞周期的影響，結果發現健脾補腎解毒方含藥血清能提高G0/G1期細胞比例，降低S期細胞比例，抑制A549細胞的增殖周期。閆瑢玓等［11］制備小鼠Lewis肺癌模型，觀察肺抑瘤合劑對肺癌的抑制作用及其對肺癌組織細胞cyclinD1表達的影響，結果表明肺抑瘤合劑可通過降低腫瘤細胞cyclinD1的表達使腫瘤細胞停止于G1期，從而起到抗腫瘤的作用。

3 調控細胞增殖與凋亡相關基因的表達

目前的實驗研究［12］表明:中藥復方及復方制劑可通過調控Bcl-2/Bax基因和腫瘤轉移相關基因的表達抑制肺癌的增值和轉移。梁朝暉［13］等運用細胞凋亡原位末斷標記及免疫組化法等分析中藥扶正祛邪復方對小鼠Lewis肺癌細胞周期及凋亡的影響，發現中藥復方可下調bcl-2的表達使肺癌細胞凋亡。王三虎［14］等制備小鼠Lewis肺癌模型，以免疫組化法檢測潤肺散結膠囊(RSC)對肺癌組織中Bcl-2和Bax蛋白表達的影響，結果表明RSC可通過影響肺瘤細胞中Bcl-2蛋白的表達促進細胞凋亡。鄭翠娥等［15］用免疫組化法測定C57BLP6純系小鼠灌服肺抑瘤合劑后p16p53、cyclin的表達，發現表明肺抑瘤合劑配合化療能有效抑制腫瘤細胞cyclinDl、p53的表達，增強p16的表達。賈彥燾等［16］運用MTT法測定肺一丸對La-795肺腺癌細胞增值的抑制作用，采用PCR-ELISA法測定細胞端粒酶活性，結果表明肺一丸抑制腫瘤細胞增殖的機制之一可能是其降低了腫瘤細胞端粒酶的活性。趙曉珍等［17］采用Real-time PCR及Western blot方法檢測肺巖寧血清對 E-Cadherin、N-cadherin、Fibronectin、Vimentin等表達的影響，結果表明，肺巖寧方可通過上調E-Cadherin、下調N-cadherin、Fibronectin和Vimentin的表達達到抑制肺癌轉移的作用。

4 影響細胞微環境

基質金屬蛋白酶(MMPs)的表達和活性的增高與腫瘤的侵襲和轉移密切相關，并影響腫瘤生長的多個環節［18］。某些黏附分子(如E-cad)和某些黏附因子(如CD44、CD54)的表達在腫瘤細胞在侵襲轉移過程中也起著重要的作用［19］。中藥復方和復方制劑可以通過抑制MMPs的表達和活性、干預細胞粘附因子(CAM)改變細胞微環境，從而抑制惡性腫瘤的生長和轉移。王治寬等［20］用免疫組織化學法檢測中藥參七湯對基質金屬蛋白酶9(MMP-9)影響，結果發現中藥參七湯能通過下調肺癌小鼠肺組織MMP-9的表達，減少腫瘤的轉移和復發。蔣士卿等［21］研究發現益肺清化膏可有效地提高E-cad的表達，降低CD44、CD44v6的表達水平，從而增加腫瘤細胞間的粘附能力，降低腫瘤細胞脫落進入周圍組織和血管的幾率，影響腫瘤細胞的遷移和運動。孫宏新等［22］采用免疫組化法檢測消瘤保肺丸作用下Lewis肺癌細胞表達E－cad、CD44V6的情況，結果發現消瘤保肺丸可通過提高E-cad和降低CD44V6的表達水平達到抗腫瘤轉移的目標。

5 抑制腫瘤血管形成

腫瘤血管生成是腫瘤細胞生長和轉移的基礎，抗腫瘤血管生成的治療策略是對腫瘤血管調控因子及其作用環節進行干預。中藥復方和復方制劑可通過抑制VEGF、COX-2等血管生長因子達到抑制腫瘤生長和轉移的目的［19］。韓志鵬［23］等通過檢測荷S180瘤小鼠灌服中藥復方抑瘤飲后不同時間點腫瘤組織內VEGF、VEGFR-2和ES等的動態變化，發現抑瘤飲可以通過下調VEGF、VEGFR-2和上調ES表達抑制腫瘤組織內血管生成而抗腫瘤。剛宏林等［24］運用S-P免疫組化法檢測靈芪膠囊對Lewis肺癌荷瘤小鼠bFGF、COX-2表達的影響，結果發現靈芪膠囊可通過下調bFGF和COX-2減少血管內皮細胞的增殖影響腫瘤生長和浸潤。王中奇等［25］建立C57BL/6小鼠肺癌模型觀察肺巖寧方及其組分對小鼠Lewis腫瘤MVD與MMP-2等表達的影響，發現肺巖寧方中的抗癌和補腎中藥有抑制血管生成的作用。王瑞平［26］等研究發現，克瘤丸能抑制Lewis肺癌小鼠的腫瘤生長及肺轉移，下調Lewis肺癌小鼠瘤體MVD、VEGF的表達，進而抑制腫瘤生長和轉移。

6 調節免疫狀態

目前，對中藥復方和復方制劑抗腫瘤免疫的研究，主要有免疫細胞活性的變化、免疫分子的表達和腫瘤抗原的表達等方面［19］。卞方［27］等觀察不同劑量補腎益肺解毒方對肺癌大鼠脾指數及肺指數的影響，發現中、高劑量組與肺癌對照組相比，脾指數明顯提高，肺指數降低，表明補腎益肺解毒方能增強機體的免疫功能。潘玉真［28］等通過檢測Lewis肺癌小鼠脾上清液中IFN-γ、IL-10的含量，脾臟NK細胞活性和脾T淋巴細胞亞群，發現柴胡龍牡湯可提高IFN-γ的水平，降低IL-10的優勢表達，增強NK細胞活性，提高CD4+水平，顯著升高CD4+/CD8+比值，改善機體細胞免疫功能。梁靚靚等［29］觀察小柴胡湯和順鉑等藥物對Lewis肺癌小鼠脾臟指數和胸腺指數的影響，結果顯示小柴胡湯對免疫器官無損害作用，又能提高宿主免疫功能。張樹涌等［30］采用ELISA雙抗體夾心法，觀察不同劑量復方桂術膠囊作用于肺癌荷瘤小鼠后血清中TNF-α及IFN-γ變化，結果發現復方桂術膠囊既影響荷瘤小鼠外周血清TNF-α及IFN-γ細胞因子水平，又能抑制小鼠肺癌，表明復方桂術膠囊對動物肺癌的抑制作用與增強荷瘤小鼠細胞因子TNF-α及IFN-γ的免疫作用有關。

7 問題與展望

國內開展的中藥復方和復方制劑治療肺癌機理的實驗研究，深入地探索了中藥多靶點、多途徑、多層次作用于肺癌細胞的機理，為進一步研究中藥治療腫瘤的機理和指導臨床用藥提供了依據，也將對中藥復方的應用和推廣起到一定的積極作用。由于中藥復方和復方制劑有效成分復雜，很難界定發揮作用的具體成分，且影響因素的可控性和實驗重復性差;國內大量臨床和藥理實驗研究中所涉及的治法和方藥，缺少系統性和一致性。因此，利用計算機模擬技術和分子對接法對顯效中藥的多靶點抗腫瘤機制進行分析，并針對肺癌的臨床常見證型，系統地探索出一系列療效顯著的腫瘤治法和方藥，構建一個規范地利用中醫藥治療肺癌的理論體系，是我們推進中醫藥治療腫瘤事業邁向科學化、系統化和規范化的有效途徑之一。

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