浙江中華蜜蜂微衛星遺傳多樣性分析

曹聯飛 蘇曉玲 趙東緒 華啟云 胡福良

（1，浙江省農業科學院 畜牧獸醫研究所，杭州 310021；2，金華市農業科學研究院，金華 321000；3，浙江大學動物科學學院，杭州 310058）

浙江是中華蜜蜂（Apis cerana cerana，中蜂）的傳統飼養區，20世紀80年代調查約有10萬群[1]。然而隨著西方蜜蜂（Apis mellifera）的大量引進，浙江中蜂數量銳減。近幾年，中蜂養殖效益大幅提高，中蜂授粉也逐漸興起，浙江中蜂飼養數量逐漸增加。為了解種群數量波動造成的遺傳多樣性變化，本研究對浙江中蜂微衛星遺傳多樣性進行了初步分析。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

浙江中蜂樣本采自浙江省杭州、金華、寧波、紹興、湖州、衢州、溫州、臺州、麗水、舟山等地區。其中金華3個采樣點，其它地區各1個采樣點。每個采樣點5群，共計60群。

1.2 實驗方法

1.2.1 DNA提取

取酒精浸泡保存的蜜蜂樣本，每群取1只，剪取蜜蜂胸部，按照細胞/組織基因組DNA提取試劑盒的說明和步驟提取總DNA。

1.2.2 微衛星標記的選擇

參考NCBI網站及Solignac等[2]報道的微衛星信息，選用A14、A88、A76、A24和B124共5個微衛星位點。反向引物使用FAM或者HEX熒光標記。引物序列及PCR反應退火溫度、Mg2+濃度見表1。

1.2.3 PCR擴增

PCR反應體系為10μL，其中10×buffer 1μL，25mmol/L MgCl20.48~0.68μL，10mmol/L dNTP 1μL，10nmol/L引物各0.4μL，DNA模板1μL，Taq酶0.1μL，純水補齊。PCR反應程序為：94℃ 4min；94℃ 0.5min，55~58℃ 0.5min，72℃0.5min，35個循環；72℃ 10min。

1.2.4 微衛星檢測

各個微衛星位點的PCR產物送上海生工生物工程有限公司，由ABI 3730XL測序儀分析。

1.2.5 數據分析

使用GeneMarker軟件讀取微衛星位點信息。

利用Microsatellite-Toolkit軟件[3]計算各微衛星位點的等位基因數目、多態信息含量（PIC）、期望雜合度（He） 和觀察雜合度（Ho）。

2 結果與分析

浙江中蜂微衛星遺傳多樣性指標見表2。

表2 浙江中蜂微衛星遺傳多樣性指標

浙江中蜂在A14、A24、A76、A88、B124位點分別檢測到2、3、5、2、9個等位基因，共檢測到21個等位基因，平均每個微衛星位點4.2個等位基因。B124位點的PIC最高，為高度多態位點；A24和A76位點PIC在0.25以上，為中度多態位點。He的變化趨勢與PIC一致，B124位點最高，A24和A76位點中等。

浙江中蜂平均期望雜合度為0.3179，平均多態信息含量為0.2835，平均觀察雜合度為0.2667。

3 討論

多態信息含量是衡量基因變異程度較好的指標，當PIC>0.5時，該座位為高度多態性座位；0.25

基因雜合度也稱為基因多樣度，一般認為它是衡量群體遺傳變異的一個最適參數。朱翔杰等[5]研究顯示福建中華蜜蜂大部分地區的平均期望雜合度為0.5171。吉挺等[6]研究顯示江蘇中華蜜蜂群體的平均期望雜合度為0.4424。本研究顯示浙江中華蜜蜂平均期望雜合度僅為0.3179，遠低于福建和江蘇中華蜜蜂。說明浙江中華蜜蜂的遺傳多樣性較低，有必要對其采取更有效的保護措施。然而本研究的樣本數量較少，還有待于進一步系統深入研究。

近年來，利用微衛星標記進行中華蜜蜂的遺傳多樣性研究逐漸增多，然而已有研究利用的均是西方蜜蜂中報道的微衛星引物，某些引物在中華蜜蜂中多態信息含量較少，影響了研究結果的可靠性。因此，開發中華蜜蜂自身的微衛星標記及引物勢在必行。此外，在不同的研究中，微衛星引物使用的統一性也有待解決，以便于未來有關數據的比較分析。

[1] 許少玉, 楊冠煌. 中蜂的分布和變異(三)—粵、閩、浙三省中蜂狀況[J]. 中國養蜂. 1982, 33(6): 13~14.

[2] Solignac M, Vautrin D, Loiseau A, et al. Five hundred and fifty microsatellite markers for the study of the honeybee(Apis mellifera L)genome[J]. Molecular Ecology Notes, 2003, 3: 307~311.

[3] Park SDE. Trypanotolerance in West African Cattle and the Population Genetic Effects of Selection[D]. University of Dublin,2001.

[4] Botstein D, White R, Skolnick M. Construction of a genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphisms[J].American Journal of Human Genetics, 1980, 32: 314~331.

[5] 朱翔杰, 周冰峰, 吳顯達, 等. 福建中華蜜蜂微衛星標記的遺傳多樣性分析[J]. 福建農林大學學報(自然科學版). 2011, 40(7):407~411.

[6] 吉挺, 陳晶, 殷靈, 等. 江蘇省野生及家養中華蜜蜂微衛星DNA遺傳多樣性分析[J]. 中國畜牧獸醫. 2007, 34(12): 39~41.