紫花地丁水提物急性毒性試驗(yàn)及其抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

摘要：采用二甲苯致小鼠耳腫脹法和雞蛋清致小鼠足腫脹法研究紫花地丁（Viola philippica）水提物高、中、低劑量（9.0、6.0、3.0 g/kg）抗炎作用，采用熱板致痛法和醋酸致扭體反應(yīng)法研究其鎮(zhèn)痛作用，并測定紫花地丁水提物的小鼠最大耐受量（MTD）。結(jié)果表明，紫花地丁水提物對小鼠灌胃給藥MTD為480 g/（kg·d）。與空白組比較，紫花地丁水提物各劑量組對二甲苯致小鼠耳腫脹及雞蛋清致小鼠足腫脹均有顯著的抑制作用（P<0.05～P<0.01），并能顯著減少醋酸致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)（P<0.05～P<0.01），顯著提高熱板致痛小鼠痛閾值（P<0.05）。表明紫花地丁水提物毒性較低，具有較強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛作用。

關(guān)鍵詞：紫花地丁（Viola philippica）；水提物；急性毒性；抗炎；鎮(zhèn)痛

中圖分類號：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）02-0390-03

紫花地丁是堇菜科植物紫花地丁（Viola philippica）的干燥全草，性寒味微苦，具有清熱解毒、涼血消腫、消癰散結(jié)之功效，臨床適用于疔瘡腫毒、紅腫熱痛、毒蛇咬傷、癰疽惡瘡、喉痹腫痛等病癥的治療[1]。目前對紫花地丁的研究主要集中在化學(xué)成分方面，而對其與功效主治相關(guān)的藥理作用方面的研究報(bào)道較少。該研究以紫花地丁水提物為研究對象，運(yùn)用現(xiàn)代藥理學(xué)方法對紫花地丁水提物急性毒性及抗炎鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行了研究，以期為紫花地丁的臨床應(yīng)用提供一定依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 紫花地丁（長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房）；布洛芬緩釋膠囊（中美天津史克制藥有限公司，批號：11090665）；二甲苯（汕頭市光華化學(xué)廠，批號：20100615）；冰醋酸（沈陽市華東試劑廠，批號：20100908）。

1.1.2 動物 ICR小鼠由長春高新醫(yī)學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.1.3 儀器 MP21001型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；RB-200型智能熱板儀及PV-200型足趾容積測量儀（成都泰盟科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 紫花地丁水提物的制備 將紫花地丁粉碎成粗粉，取粗粉100 g使用紗布包裹，用蒸餾水浸泡1 h后，武火煮沸繼以文火煎煮1 h，過濾后同法再煎煮一次，合并兩次濾液，并濃縮至100 mL，即1 mL提取液含有1 g生藥，置于4 ℃保存。

1.2.2 急性毒性試驗(yàn) 預(yù)試驗(yàn)中無法測出0%及100%動物死亡劑量來測定紫花地丁水提物的半數(shù)致死量（LD50），故而測定小鼠的最大耐受量（MTD）。取小鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為空白對照組和紫花地丁水提物組，每組20只。各鼠均禁食16 h，期間自由飲水，紫花地丁水提物組24 h內(nèi)以最大濃度（以生藥量計(jì)濃度為6 g/mL），最大給藥體積（0.4 mL/10g）灌胃給藥2次，兩次給藥間隔期間禁食，但自由飲水；對照組給予同體積蒸餾水。連續(xù)觀察7 d，詳細(xì)記錄兩組動物體征變化、體重及攝食量變化及死亡情況[2]。

1.2.3 紫花地丁水提物對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響 取小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，即空白對照（蒸餾水）組，布洛芬對照組（布洛芬濃度為0.08 g/kg），9.0、6.0、3.0 g/kg的紫花地丁水提物試驗(yàn)組，灌胃給藥連續(xù)7 d。末次給藥30 min后，于小鼠右耳均勻涂抹二甲苯50 μL/只，左耳不涂作為對照，致炎作用30 min后處死小鼠，剪下雙耳耳廓，用直徑8 mm的打孔器在雙耳同一位置打下耳片，并稱其質(zhì)量，計(jì)算腫脹度和腫脹抑制率。腫脹度=右耳片質(zhì)量-左耳片質(zhì)量；腫脹抑制率=[（空白對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度）/空白對照組平均腫脹度]×100%[3]。

1.2.4 紫花地丁水提物對雞蛋清致小鼠足腫脹的影響 分組及給藥同“1.2.3”，末次給藥前測量并記錄各鼠右后足容積，末次給藥30 min后，于各鼠右后足趾部皮下注射10 %鮮雞蛋清溶液0.1 mL，并于致炎后的0.5、1.0、1.5、2.0 h分別測量并記錄各鼠右后足容積1次，并計(jì)算腫脹率。腫脹率=（致炎后足容積-致炎前足容積）/致炎前足容積×100%[4]。

1.2.5 紫花地丁水提物對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 分組及給藥同“1.2.3”，末次給藥30 min后，腹腔注射 0.6%醋酸溶液0.2 mL/只，觀察并記錄20 min內(nèi)各鼠扭體反應(yīng)（伸展后肢、腹部內(nèi)凹和臀抬高）次數(shù)，并計(jì)算扭體反應(yīng)抑制率。扭體反應(yīng)抑制率=（空白對照組平均扭體次數(shù)-給藥組平均扭體次數(shù)）/空白對照組平均扭體次數(shù)×100%[3]。

1.2.6 紫花地丁水提物對小鼠熱板致痛反應(yīng)的影響 將雌性小鼠放于（55±0.5） ℃熱板儀上，將其出現(xiàn)舔后足反應(yīng)所需時間記為痛閾值，挑選痛閾值在5～30 s內(nèi)的小鼠50只，隨機(jī)分組，分組及給藥同“1.2.3”，各鼠于用藥前及末次給藥30 min后分別測定并記錄各鼠的痛閾值[4，5]。在測定中，痛閾值超過60 s的記為60 s。

1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有數(shù)據(jù)均用x±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 紫花地丁水提物急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

給藥后部分小鼠出現(xiàn)倦縮或自主活動減少現(xiàn)象，24 h后活動恢復(fù)正常。連續(xù)觀察7 d，無動物死亡情況發(fā)生，所有動物呼吸、皮毛、攝食量、體重、大小便等均未見異常。7 d后處死動物，進(jìn)行解剖，肉眼觀察未發(fā)現(xiàn)心、肝、肺、腎、脾、子宮、睪丸等器官異常變化。紫花地丁水提物對小鼠的灌胃給藥MTD為480 g/（kg·d）（以生藥量計(jì)）。

2.2 紫花地丁水提物對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

紫花地丁水提物對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響見表1。由表1可知，與空白對照組比較，不同劑量紫花地丁水提物組以及布洛芬組對二甲苯所致小鼠耳腫脹均有顯著的抑制作用，具有顯著性差異。紫花地丁水提物抗炎作用表現(xiàn)出劑量依賴性，高劑量組抗炎作用強(qiáng)于中、低劑量組，且與布洛芬組抗炎作用相當(dāng)。

2.3 紫花地丁水提物對雞蛋清致小鼠足腫脹的影響

紫花地丁水提物對雞蛋清致小鼠足腫脹的影響見表2。由表2可知，與空白對照組比較，不同劑量紫花地丁水提物組及布洛芬組對雞蛋清致小鼠足腫脹均有顯著的抑制作用，且抗炎作用持續(xù)時間較長，具有顯著性差異。紫花地丁水提物抗炎作用呈劑量依賴性，高劑量組抗炎作用強(qiáng)于中、低劑量組，且與布洛芬組抗炎作用相當(dāng)。

2.4 紫花地丁水提物對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

紫花地丁水提物對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響見表3。由表3可知，與空白對照組比較，不同劑量紫花地丁水提物組及布洛芬組均可顯著減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)和次數(shù)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05～P<0.01）。紫花地丁水提物鎮(zhèn)痛作用呈劑量依賴性，高劑量組鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)于中、低劑量組，且與布洛芬組鎮(zhèn)痛相當(dāng)。

2.5 紫花地丁水提物對小鼠熱板致痛反應(yīng)的影響

紫花地丁水提物對小鼠熱板致痛反應(yīng)的影響見表4。由表4可知，與空白對照組比較，不同劑量紫花地丁水提物組及布洛芬組均可顯著提高熱板致小鼠疼痛反應(yīng)的痛閾值，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。紫花地丁水提物鎮(zhèn)痛作用呈劑量依賴性，高劑量組鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)于中、低劑量組，且與布洛芬組鎮(zhèn)痛作用相當(dāng)。

3 小結(jié)

不同劑量紫花地丁水提物對二甲苯致小鼠耳腫脹及雞蛋清誘導(dǎo)小鼠足腫脹均有顯著的抑制作用，且抗炎作用呈劑量依賴性，高劑量組抗炎作用強(qiáng)于中、低劑量組。利用熱板實(shí)驗(yàn)和扭體實(shí)驗(yàn)，是來篩選鎮(zhèn)痛藥的經(jīng)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法。不同劑量紫花地丁水提物對熱板致小鼠產(chǎn)生的疼痛及醋酸所致小鼠慢性持續(xù)性疼痛均有顯著的抑制作用，可顯著提高痛閾值，且鎮(zhèn)痛作用呈劑量依賴性，高劑量組鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)于中、低劑量組。紫花地丁水提物具有顯著的抗炎鎮(zhèn)痛作用，研究結(jié)果與紫花地丁具有清熱解毒、涼血消腫止痛等功效有關(guān)，為紫花地丁的臨床應(yīng)用及藥用開發(fā)利用提供了藥理學(xué)依據(jù)，但其抗炎鎮(zhèn)痛作用機(jī)制及具體藥效成分尚有待進(jìn)一步研究。

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