水杉種子中總黃酮含量及其清除自由基能力分析

摘要：用紫外分光光度法，以蘆丁作對照，測定水杉（Metasequoia glyptostroboides）種子中的總黃酮含量，以BHT和維生素C作對照，比較其對DPPH自由基的清除能力。結果表明，水杉種子中總黃酮含量為34.7 mg/g，其清除DPPH自由基的能力隨質量濃度升高而增強，達到EC=145.6 μg/mL，低濃度時低于BHT，隨著濃度增高，高于相同質量濃度的BHT，低于維生素C，但在400 μg/mL時，與維生素C持平。水杉種子中黃酮有較高利用價值，作為天然抗氧化劑有良好的應用價值。

關鍵詞：水杉（Metasequoia glyptostroboides）種子；總黃酮；抗氧化；自由基

中圖分類號：O657.32；R285 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）02-0423-02

水杉（Metasequoia glyptostroboides）為裸子植物門杉科水杉屬，是世界珍稀孑遺物種。據《中國中藥資源志要》[1]記載，其葉、種子有清熱解毒、消炎止痛功效，常用于治療癰瘡腫痛，蘚瘡等癥，《名醫別錄》列為中品，謂煮湯洗，可治臁瘡，《本草綱目拾遺》載杉木油治一切頑癬[2]。水杉中化學成分較為復雜，包括黃酮類、萜類、木脂素、類胡蘿卜素、甾醇等[3]。水杉中的黃酮具有抗心肌肥厚和心律失常的藥理作用[4]，其葉中的總黃酮具有抗氧化功能[3]，早期研究表明，腫瘤、冠心病和衰老均與自由基引起的膜脂質氧化性損傷有關。目前已有的研究主要集中在水杉葉方面，而對水杉種子的研究較少。本試驗對水杉種子中黃酮的自由基清除能力進行分析，為其進一步的開發應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

供試水杉種子于2011年11月采自信陽農業高等專科學校校園內。

TU-1810紫外可見分光光度計購自北京普析通用儀器有限公司，蘆丁標準品（批號10080-200707）購自中國藥品生物鑒定所。

1.2 方法

1.2.1 總黃酮的提取 稱取1.0 g水杉種子粉末于25 mL三角瓶中，加60%（V/V，下同）乙醇10 mL，超聲萃取30 min，靜置，冷卻至室溫，過濾，藥渣再加60%乙醇10 mL超聲萃取30 min，過濾，藥渣用60%乙醇5 mL清洗1次，過濾，合并濾液，定容至25 mL，得樣品液。

1.2.2 標準溶液的制備 精確稱取10.30 mg蘆丁，以60%乙醇溶解并定容至10 mL，配成濃度為1.03 mg/mL的標準溶液。

1.2.3 含量測定 分別移取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0和1.2 mL蘆丁對照品溶液于25 mL容量瓶中，加 60%乙醇4 mL，搖勻，靜置6 min，加5%（m/V，下同）NaNO2 0.4 mL，搖勻，靜置6 min， 加10% Al（NO3）3 0.4 mL， 搖勻，靜置6 min，再加入4% NaOH 4 mL，搖勻，用60%乙醇定容到刻度，放置15 min。同時作空白對照，分別在510 nm處測定吸光度，以對照品濃度C（mg/mL）為橫坐標、吸光度A為縱坐標，繪制標準曲線，得A=0.079 5C-0.001 6，R2=0.996 8

1.2.4 DPPH自由基清除作用 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2，2-diphenyl-1-（2，4，6-trinitrophenyl）hydrazyl，DPPH）是一種穩定的自由基，在517 nm處有一強吸收峰，DPPH自由基與自由基清除劑的電子配對后吸收峰逐漸消失，并與其接受的電子數成定量關系，可用分光光度法對其抗氧化性進行定量分析[5，6]，用二丁基羥基甲苯（butylated hydroxytoluene，BHT）和維生素C作對照。分別吸取樣品液2.0 mL，加入DPPH溶液 （0.2 μg/mL）2.0 mL，搖勻、靜置30 min，以溶劑（70%乙醇）為空白，測定試液在517 nm處吸光度D1；同時測定樣品液2.0 mL與70%乙醇2.0 mL的混合液在517 nm處吸光度D2；再測定DPPH溶液2.0 mL與70%乙醇2.0 mL的混合液在517 nm的吸光度D0。每組測定3次，按下式計算樣品的清除率：清除率=[1-（D1-D2）]/D0×100%。

2 結果與分析

2.1 總黃酮含量

精確吸取樣品提取液0.01 mL于5 mL容量瓶中，定容后，測得吸收度，重復3次，計算總黃酮含量（以蘆丁計）為34.7 mg/g。

2.2 DPPH自由基清除能力分析

由圖2可知，水杉種子總黃酮提取液清除DPPH的能力隨其濃度升高而增強。總黃酮濃度低于100 μg/mL時，低于BHT的清除能力，隨著濃度增高，其清除能力高于同水平的BHT，而低于維生素C，當濃度為400 μg/mL時，其清除能力與維生素C相當，且該結果與文獻報道[6，7]基本一致。水杉種子總黃酮清除能力EC=145.6 μg/mL與BHT清除能力EC=149.2 μg/mL接近。

3 討論

本試驗測定的水杉種子總黃酮含量為34.7 mg/g，高于水杉葉的總黃酮含量[3，8]，因此水杉種子中總黃酮的利用價值高于水杉葉。水杉種子中的總黃酮比BHT抗氧化能力稍強，與維生素C的抗氧化能力相當，而大量的油溶性抗氧化劑如BHT不僅可導致動物肝臟腫大，還會增加微粒體酶的活性，具有一定的負作用[9]，因此水杉種子總黃酮作為天然抗氧化劑具有良好的開發和應用前景。

參考文獻：

[1] 中國藥材公司.中國中藥資源志要[M].北京：科學出版社，1994.

[2] 姜明凱，厲建燕，孟昭禮，等.水杉葉甲醇提取物的農用抑菌活性研究[J].現代農業科技，2007（10）：55-56.

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[5] 胡喜蘭，韓照樣，陶 瑩，等.DPPH·法測定17種植物抗氧化活性[J]. 食品科技，2006，31（10）：264-268.

[6] 魯曉翔，唐津忠.紫背天葵中總黃酮的提取及其抗氧化性研究[J].食品科學，2007，28（4）：145-148.

[7] 羅開梅，黃軼群，曹 芳，等.萵苣總黃酮抗氧化活性研究[J].江蘇農業科學，2011，39（6）：507-509.

[8] 王 暐，王有為.不同季節水杉葉總黃酮含量變化的研究[J].武漢植物學研究，2003，21（5）：449-451.

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