狐貍尾蘭原球莖快速繁殖問題探討

【摘 要】[目的]為狐貍尾蘭的組培快繁提供依據。[方法]以狐貍尾蘭種子作外植體，研究了不同誘導培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基在狐貍尾蘭組培快繁中的效果。[結果]誘導類原球莖體以MS附加6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L的激素配比較好，分化時間短。增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA0-3.0g/L+NAA0-0.2mg/L，以MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L效果最好，平均增殖系數為3-8，把生長健壯并具有2-3片真葉的單個小芽，轉接到生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA1.0mg/L上，經60d培養(yǎng)，即可獲得生長健壯的完整植株。狐貍尾蘭試管苗的移栽基質以粗椰糠∶河沙=1∶1的比例混合較好，濕度80%-90%，移栽成活率達90%以上。[結論]狐貍尾蘭種子在溫度(25±2)℃，光照強度1500-2000lx，光照時間12h/d的條件下，最適誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；最適增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L，生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA1.0mg/L。

【關鍵詞】狐貍尾蘭；原球莖；快速繁殖

蘭科狐貍尾蘭是多年生草本植物，為典型的熱帶附生蘭，也是海南野生蘭花優(yōu)良種質資源之一，狐貍尾蘭葉片肥厚、翠綠，花朵清麗，香味四溢，花期長，而且其生長適應性強，栽培容易，花期為我國傳統(tǒng)春節(jié)前后，是極好的新春賀歲花卉，頗受廣大群眾青睞。然而，由于其生長環(huán)境熱帶森林過量采伐，其適生環(huán)境嚴重惡化，加上人們?yōu)榱俗非笱矍袄妫^度采集出售，致使野生狐貍尾蘭數量銳減，嚴重影響了狐貍尾蘭生態(tài)群的構成，幾近瀕危。由于其種子在自然條件下不易萌發(fā)，常規(guī)繁殖多采用分株方法，但是此法繁殖系數低，繁殖速度慢，遠不能滿足市場需求，而采用組培快繁技術可以在短期內獲得大量優(yōu)質種苗，滿足人們的需求。因此，利用狐貍尾蘭未成熟種子作外植體，應用組織培養(yǎng)等生物技術對狐貍尾蘭類原球莖體誘導、增殖和催根進行研究，對組培苗的壯苗、生根培養(yǎng)和移栽等技術進行了探討。通過對狐貍尾蘭的快繁技術系統(tǒng)化研究，旨在為狐貍尾蘭工廠化育苗提供科學依據。

1.材料與方法

1.1材料

取狐貍尾蘭7-8成熟果實的種子。

1.2方法

1.2.1無菌材料的獲得

先用自來水沖洗狐貍尾蘭果實表面，然后在超凈工作臺上用70%酒精表面消毒果實2min，無菌水沖洗1次，再用無菌濾紙吸干水分，然后用解剖刀切開莢果，取出細小種子，輕輕將種子均勻散落到固體培養(yǎng)基上，每瓶接種量為100-300粒種子不等。

1.2.2類原球莖體誘導

把狐貍尾蘭的種子分別接種于VW+6-BA0-1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L、MS+6-BA 0-1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L的誘導培養(yǎng)基中，誘導原球莖(類原球莖體)的形成。

1.2.3類原球莖體增殖培養(yǎng)

類原球莖體萌發(fā)后，轉接到新鮮培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)約20d左右，頂部膨大并分化出子葉，同時在基部分化出1-2條粗狀的假根，在進行增殖培養(yǎng)時，可把基部的假根切掉，增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0-3.0mg/L+NAA0-0.2mg/L。

1.2.4生根培養(yǎng)

當小芽具有2-3片真葉，葉長1-2cm時，將生長健壯的小芽單株切下，轉接入1/2 MS+NAA 1.0mg/L的生根培養(yǎng)基中，誘導其生根。

2.結果與分析

2.1類原球莖體的萌發(fā)培養(yǎng)

將未成熟種子接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)約40d左右開始膨大，50-60d后開始分化出白色、結構疏松的前期原球莖胚狀體，繼續(xù)培養(yǎng)10d左右，胚狀體萌發(fā)形成綠色原球莖，上端有葉原基，下端有許多不定根，在VW+6-BA0-1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L和MS+6-BA0-1.0mg/L+NAA 0.1-0.2mg/L的培養(yǎng)基中均能誘導類原球莖體的萌發(fā)。試驗結果表明，誘導類原球莖體以MS附加6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L的激素配比較好，分化時間短，未成熟種子接種120d左右就能全部誘導原球莖(類原球莖體)的萌發(fā)。

2.2類原球莖體的增殖培養(yǎng)

類原球莖體萌發(fā)后，轉接到新鮮培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)約20d左右，頂部膨大并分化出子葉，同時在基部分化出1-2條粗狀的假根，繼續(xù)培養(yǎng)，可逐漸分化出真葉，培養(yǎng)50d左右，已經形成具有2-3片真葉的不定芽。之后每50d轉接入相同的新鮮培養(yǎng)基中進行繼代增殖培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0-3.0mg/L+NAA 0-0.2mg/L，其中以MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.1mg/L最好，平均增殖系數為3-8，且生長健壯。繼代增殖培養(yǎng)中不斷分化出小芽，切分轉入新鮮培養(yǎng)基中，可保持不斷增殖的狀態(tài)。在植物的組織培養(yǎng)過程中常常會發(fā)生體細胞無性系變異，利用體細胞無性系變異可以創(chuàng)造更多遺傳變異及擴大可利用的種質資源范圍，選育出新的物種或品系，為培養(yǎng)作物優(yōu)良品種開辟了新的途徑，這可以做為一種育種手段，但是對于商業(yè)生產來說卻是不利的。因此，必須在通過類原球莖體增殖培養(yǎng)時，特別是多代增殖培養(yǎng)時剔除褐變、玻璃化、細弱以及性狀、形態(tài)變異不正常的植株、組織。

2.3生根培養(yǎng)

把生長健壯并具有2-3片真葉的單個小芽，轉接到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA 1.0mg/L，經60d培養(yǎng)，即可獲得葉片長2cm，有2-3條粗壯的根，生長健壯的完整植株。或把在類原球莖萌發(fā)增殖時，就已經形成具有2-3片真葉的不定芽，并帶有已經發(fā)育的根的小苗，可直接轉接入的1/2MS+NAA 1.0mg/L的培養(yǎng)基中做生根培養(yǎng)。

2.4煉苗移栽

生根苗培養(yǎng)約60d后，根長到1-2cm時，可將瓶苗移入無直射陽光的地方煉苗5d；打開瓶蓋，繼續(xù)練苗2d；用鑷子輕輕將小苗從瓶中取出，用自來水洗凈根部附著的培養(yǎng)基，然后放置于室內半天以晾干水珠，即可移栽到事先準備好的砂床上，并適度遮陰。狐貍尾蘭試管苗移栽時，不宜太濕，否則易爛根，移栽基質多以粗椰糠與河沙按一定的比例混合，保濕又透氣，其中以粗椰糠∶河沙為1∶1的比例混合較好，濕度保持在80%-90%，移栽成活率達90%以上。

3.結論與討論

試驗以狐貍尾蘭種子作外植體，通過從種子→原球莖(類原球莖體)→叢生芽→完整植株的繁殖途徑進行繁殖，結果表明，狐貍尾蘭種子在溫度(25±2)℃，光照強度1500-2000lx，光照時間12h/d的條件下，最適培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L種子均能萌發(fā)且分化時間較短；增殖培養(yǎng)最適培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L，生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA1.0mg/L。

【參考文獻】

［１］丁慎言，尹俊梅.海南島野生蘭花圖鑒[M].北京:中國農業(yè)出版社，2005.

［２］劉青林，馬祎，鄭玉梅.花卉組織培養(yǎng)[M].北京:中國農業(yè)出版社，2003.