革蘭染色法在陰道分泌物真菌檢驗中的臨床應用分析

[摘要] 目的 研究革蘭染色法在陰道分泌物真菌檢驗中的臨床應用。 方法 2009年1月～2011年8月收集我院婦科門診及體檢患者陰道分泌物764例，均分為兩份分別采用生理鹽水法與革蘭染色法進行真菌檢驗并比較分析。 結果 對764例患者陰道分泌物分別進行真菌檢驗，革蘭染色法陽性率41.5%（317/764），直接鏡檢法28.9%（221/764），兩者比較差異有統計學意義（χ2=133.707，P = 0.000）。對兩種方法的關聯性進行McNember檢驗，結果為χ2=94.010，P =0.000，提示兩種方法檢出陽性率具有相關性。 結論 革蘭染色法在陰道分泌物真菌檢驗中具有更好的敏感性，檢出率高，值得臨床檢驗進一步推廣應用。

[關鍵詞] 陰道分泌物；革蘭染色；真菌感染

[中圖分類號] R446.5[文獻標識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）10-0099-02

The clinical application of Gram’s staining in fungal infection test of vaginal discharge

JIN Xiaohua

Clinical Laboratory of Dermatology Hospital of Yiwu in Zhejiang Province， Yiwu 322000， China

[Abstract] Objective To investigate efficacy of Gram’s staining in fungal infection test of vaginal discharge. MethodsFrom January 2009 to August 2011，the vaginal discharge of 764 cases were collected and tested for fungal infection by both Gram’s staining and direct wet slices. The positive rate of fungal infection and correlation of the two tests were analyzed by SPSS 17.0 for Windows. Results Compared to the direct wet slices， the positive rates of fungal infection by Gram’s staining resulted in significant difference (41.5% vs 28.9%， χ2=133.707，P = 0.000). McNember test for correlation between the two tests showed significant correlation (χ2=94.010，P = 0.000). Conclusion The Gram’s staining in fungal infection test of vaginal discharge has better sensivity，which deserves wide application.

[Key words] Vaginal discharge; Gram’s staining; Fungal infection

各種病原體引起的陰道炎和宮頸炎癥，表現為陰道分泌物異常、瘙癢、灼痛以及性生活障礙，會嚴重地危害著婦女的身心健康[1]。陰道分泌物涂片檢查是婦科檢查的一項初篩試驗，一般采用直接涂片法，因其方便快速，在臨床廣為應用[2]。但是直接涂片法有時很難發現分泌物的真菌感染，容易造成漏診，延誤患者的及時診療。雖然革蘭染色法步驟較為繁瑣、耗時較長，但是可對婦科陰道炎癥進行比較全面的篩查，為臨床診療提供病原學參考依據[3，4]，近年來越來越受到臨床工作者的青睞。本研究旨在對革蘭染色法與直接涂片法在陰道分泌物真菌檢驗中的臨床應用進行比較分析，以研究染色法在陰道分泌物真菌檢驗中的功效。

1 材料與方法

1.1 研究對象

經我院倫理委員會批準通過，獲得患者知情同意后，收集2009年1月～2011年8月于我院婦科就診者和體檢者陰道分泌物764份，均分為兩份，分別采用革蘭染色法與直接涂片法。

1.2 儀器與試劑

革蘭染色液（上海滬宇生物有限公司生產），光學顯微鏡（北京華測科學中心生產）。

1.3 方法

直接鏡檢法以無菌棉拭子用生理鹽水濕潤后，蘸取陰道分泌物小心均勻涂于載玻片上進行直接鏡檢。

革蘭染色法則取陰道分泌物均勻涂于載玻片，過火固定后，按照初染、媒染、脫色、復染的步驟進行染色完畢后，顯微鏡下油鏡檢查。具體方法如下：初染：在載玻片上滴草酸銨結晶紫數滴（以完全覆蓋標本為準，下同），靜置染色1 min后水沖洗；媒染：滴加碘液覆蓋涂面，染色1 min水洗，吸水紙吸去多余水分；脫色：滴加95%酒精數滴，并輕輕搖動載玻片進行脫色30 s后，水洗并吸干水分；復染：滴加蕃紅染色液（稀）10 s后，水沖洗，干燥后即可進行鏡檢。兩種方法均以鏡下發現真菌菌體或孢子為陽性。所有標本均由兩名熟練的技師操作鏡檢。

1.4 統計學處理

所有統計均在SPSS 17.0軟件中進行。計數資料比較采用χ2檢驗，兩種方法的關聯性進行McNember檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

本組764例患者陰道分泌物檢驗，革蘭染色法真菌陽性率41.5%（317/764），直接鏡檢法28.9%（221/764），二者比較差異有統計學意義（χ2=133.707，P = 0.000）。兩種方法的關聯性進行McNember檢驗，χ2=94.010，P = 0.000，提示兩種方法檢出陽性率具有相關性，可相互替代。

3 討論

女性陰道屬于一個復雜的微生態系統，其內寄生著多種微生物，不同微生物之間維持著相對動態平衡。隨著年齡、妊娠等的改變，婦女陰道菌群內部會發生著不同菌群比例改變。陰道有自凈作用，陰道正常pH值在4.0～4.5之間。健康婦女陰道正常菌群中的優勢菌主要是乳酸桿菌，占陰道微生物90%以上。由于抗生素長期使用、自身免疫力不足等因素的影響，乳酸桿菌大量死亡，將會引起菌群失調，真菌繁殖加快，導致真菌性陰道炎[5]。婦女陰道真菌感染性疾病發病率高，培養等方法檢測所需時間長，不利于對患者及時診治。直接涂片檢查時，由于陰道分泌物涂片的真菌含量非常少，而且會受鏡檢背景中混雜的白細胞、上皮細胞等有形成分的影響，檢出率較低。陰道分泌物直接涂片鏡檢找真菌孢子及菌絲簡單快速，適合于門診開展，但是此方法容易受主觀因素影響，假陽性和假陰性率都比較高，難以適應現在比較苛刻的醫療環境。真菌數量少或孢子形態變化大是導致假陰性的主要主觀因素，檢驗者難以正確辨別光滑念珠菌、熱帶念珠菌等變異性較多的真菌。而且隨抗菌藥物的廣泛使用，細菌多重耐藥及繼發的雙重感染給臨床治療帶來很大的困難，診斷不明確時憑經驗用藥、盲目加大劑量用藥，易導致已存在菌群失調加重、真菌感染進行性發展。

陰道真菌感染是婦科常見病、多發病，主要表現為陰道分泌物性狀改變。陰道分泌物涂片檢查是婦科疾病的常規檢查項目，可以直接反映陰道及宮頸感染病原體及炎癥程度[6]。傳統的直接涂片法方便、快捷，適宜于大規模篩檢，但是其敏感性較差，檢出率低，可能造成漏診、誤診，延誤患者病情，甚至出現不必要的醫療糾紛[7]。因此有很多學者建議將染色法檢驗列為陰道分泌物的診查常規，提高檢出率。革蘭染色法雖然步驟較為繁瑣，但是同時可以對多項目檢查，特別是淋球菌、加德納菌及其他條件致病菌檢測敏感性高[8]。推廣應用染色法，可為臨床提高更準確結果，降低了醫生濫用抗生素的可能，為醫生合理有效地診療提供必需的實驗室依據，可及時解決婦女的疾患，改善家庭關系，具有良好的社會、經濟效益[9]。同時因婦科疾病影響致使夫妻間性生活受到影響的情況得到有效改善。對直接鏡檢法陰性的婦科陰道分泌物可疑標本應再次進行革蘭染色法檢測，以免漏診。

本研究對764例患者陰道分泌物分別進行真菌檢驗，染色法陽性率41.5%（317/764），直接鏡檢法28.9%（221/764），二者相比較差異有統計學意義（χ2=133.707，P = 0.000）。兩種方法的關聯性進行McNember檢驗，χ2=94.010，P = 0.000，提示兩種方法檢出陽性率差異有統計學意義。我們的研究結果表明陰道分泌物真菌檢驗中，染色法陽性檢出率優于直接涂片法；而且相關性檢驗顯示兩種方法相關性良好，可以相互取代[10，11]。因此，我們可以認為染色法行陰道分泌物真菌檢驗可以取代直接涂片法，而且其檢驗的敏感性更佳。

綜上所述，染色法在陰道分泌物真菌檢驗中有其自身的優勢，值得臨床檢驗進一步推廣應用。

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（收稿日期：2011-12-14）