養血榮筋丸中橙皮苷含量測定

王慧

（哈藥集團中藥二廠質檢中心，黑龍江 哈爾濱 150078）

前言

養血榮筋丸由鐵絲威靈仙（酒炙）、伸筋草、補骨脂（鹽炒）、油松節、赤芍、黨參、何首烏（黑豆酒炙）、陳皮、雞血藤、透骨草等組成。養血榮筋丸具有養血榮筋、祛風通絡的作用。養血榮筋丸主要用于筋骨疼痛、關節不利、肢體麻木、肌肉萎縮、腫脹等。陳皮，別名：廣橘皮、新會皮、廣陳皮、橘皮、貴老等。陳皮常用于便溏泄瀉、脾虛飲食減少、胸腹脹滿、濕阻中焦、脘腹痞脹、消化不良、納呆便溏，痰濕壅肺之咳嗽氣喘等癥狀。陳皮具有抗炎、抗潰瘍、利膽、冠狀血管擴張、促進消化液的分泌、消除腸道積氣等作用。本文采用高效液相法測定養血榮筋丸中橙皮苷含量。本實驗采用高效液相色譜法對養血榮筋丸中的橙皮苷的進行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：Waters515高效液相色譜儀；N3000色譜工作站；Waters可變波長檢測器。賽多利斯BPZn-D分析天平；)；KQ5200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；十萬分之一電子分析天平 (德國塞多利斯)；PHS一3TC(0.01級)精密數顯酸度計(上海天達儀器有限公司)；PL5124 型純水機(PALL)；索氏提取器。

1.2 色譜柱：安捷倫 C18色譜柱（218 mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對照品：橙皮苷 購自中國藥品生物制品檢定所。

1.4 試劑：甲醇、乙腈為色譜純；水為純化水，其它試劑均為分析純。

1.5 試藥：養血榮筋丸（批號：100801，100802，100803）

2 測定方法確定

2.1 色譜條件

2.1.1 流動相的選擇：分別考察甲醇-水 (15∶85)，甲醇一醋酸一水(35:4：61)，甲醇-水(18∶92)不同比例的流動相，結果以甲醇一醋酸一水(35:4：61)為流動相為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇一醋酸一水(35:4：61)為流動相為流動相。

2.1.2 檢測波長的選擇：制備橙皮苷對照品稀釋液照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010版一部 附錄Ⅴ A），于190～900nm波長范圍內進行全波長光譜掃描，記錄吸收光譜。在283nm處有最大吸收峰，故選用283nm為檢測波長。

依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下。流動相：甲醇一醋酸一水(35:4：61)，檢測波長：283nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數按橙皮苷峰計算應不得低于2000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取橙皮苷對照品適量，置容量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液，即得。

2.3 提取方法確定

2.3.1 提取溶媒的選擇

在供試品溶液制備中，分別選用了乙醇、石油醚脫色后甲醇提取、甲醇進行加熱回流提取，結果表明石油醚脫色后甲醇提取分離效果、峰形及含量為最好，所以選擇石油醚脫色后甲醇進行熱回流提取。

2.3.2 提取時間的選擇

取供試品適量，用石油醚加熱回流提取分別提取2、3、4小時，棄石油醚，加適量甲醇，再加熱回流至提取液無色，放冷，過濾，揮干甲醇提取液，殘渣用50ml甲醇溶解，搖勻，濾過。供試品溶液的含量結果表明：三種提取時間結果無明顯差異，為保證脫色完全并縮短處理時間，采用石油醚加熱回流提取3小時后，棄石油醚，加適量甲醇，再加熱回流至提取液無色。

2.3.3 供試品溶液的制備

取裝量差異項下的供試品，剪碎，混勻，稱取24g，置具索氏提取中，加入石油醚適量，加熱回流提取3小時，棄石油醚，藥渣用適量甲醇熱回流提取至提取液無色，放冷，過濾，揮干甲醇提取液，殘渣用50ml甲醇溶解，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 專屬性試驗

依照處方取除陳皮以外的藥材，按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，照2.3.3項下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結果在橙皮苷出峰處陰性液無色譜峰，結果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 精密度試驗

精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇使溶解，制成濃度為0.4mg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD=0.91%，表明本方法精密度良好。

2.6 對照品的線性考察

精密稱取橙皮苷對照品15mg，置10ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取 0.4、0.6、1.2、1.6、2.0mL，置于5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積(Y)為縱坐標，對照品進樣量(X)為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程為：y=11351.89x-1213.86（r=0.99992）。結果表明，橙皮苷在 0.12～0.6mg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.7 重現性試驗

稱取同一批的養血榮筋丸樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結果RSD為1.01%，結果表明此方法的重現性良好。

2.8 準確度試驗

精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的橙皮苷對照品，上述方法進行測定，計算回收率，平均回收率為99.0%，RSD=0.95%。結果表明此方法的回收率良好。

2.9 樣品穩定性試驗

取同一批養血榮筋丸樣品，按2.3項下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第 0、2、4、6、8、10 小時，精密吸取供試品溶液10μl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定養血榮筋丸中橙皮苷的RSD=0.81%。結果表明供試品10小時內穩定。

2.10 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定養血榮筋丸三批樣品中橙皮苷的含量，結果三批樣品的含量分別為 5.2、5.3、5.2mg·g-1。

討論

本實驗表明此方法可用于養血榮筋丸中橙皮苷的含量測定。養血榮筋丸中橙皮苷的含量為每克不低于5.2mg.

[1]袁丹,王青,王啟隆,謝媛媛,潘英妮,畢開順;枳實及其提取物質量評價法的研究[J];中國藥學雜志;2005，15.

[2]國家藥典委員會.中國藥典[S].北京：二部，化學工業出版社，2010.