疫苗類生物制品清潔驗(yàn)證中總有機(jī)碳檢測(cè)限度的評(píng)估分析

摘要：疫苗類生物制品的清潔驗(yàn)證是保證其質(zhì)量和安全的重要環(huán)節(jié)，其中總有機(jī)碳（TOC）檢測(cè)是評(píng)價(jià)清潔效果的常用指標(biāo)。旨在探討疫苗類生物制品清潔驗(yàn)證中TOC檢測(cè)限度的評(píng)估方法及應(yīng)用。以常見疫苗生產(chǎn)用主要培養(yǎng)基配制為例，檢測(cè)配制過程中最難清洗物的TOC，每種檢測(cè)3批，要求相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）≤10%。按照清洗方式將需清洗設(shè)備、容器具進(jìn)行分類，根據(jù)公式計(jì)算各設(shè)備、容器具在最差條件下的TOC限度，選取最低值作為該種清洗方式的TOC檢測(cè)限度。結(jié)果顯示，離線清洗（COP）方法TOC限度標(biāo)準(zhǔn)為0.250 mg/L，COP手工清洗方法TOC限度標(biāo)準(zhǔn)為0.100 mg/L，在線清洗（CIP）方法TOC限度標(biāo)準(zhǔn)為0.080 mg/L。提出的TOC檢測(cè)限度的評(píng)估方法可廣泛應(yīng)用于疫苗生產(chǎn)行業(yè)的清潔驗(yàn)證，為保障疫苗質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：生物制品；清潔驗(yàn)證；總有機(jī)碳；檢測(cè)限度；疫苗

疫苗類生物制品是指能夠誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，從而預(yù)防或治療某些傳染病的制劑，包括滅活疫苗、減毒活疫苗、重組疫苗、亞單位疫苗等。疫苗類生物制品的質(zhì)量和安全直接關(guān)系到人類健康和公共衛(wèi)生，因此需要嚴(yán)格遵循《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GMP）的要求，進(jìn)行有效的質(zhì)量控制和質(zhì)量保證［12］。清潔驗(yàn)證是GMP的重要組成部分，是指對(duì)生產(chǎn)過程中可能造成交叉污染的設(shè)備、容器、管道等進(jìn)行清洗，并驗(yàn)證其清潔效果是否達(dá)到預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)的過程。清潔驗(yàn)證［3］的目的是確保每批生物制品的純度和一致性，防止微生物、內(nèi)毒素、殘留物等對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量和安全性的影響。本文旨在探討疫苗類生物制品清潔驗(yàn)證中TOC檢測(cè)限度的評(píng)估方法及應(yīng)用。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

離線清洗（COP）是指需要拆卸設(shè)備部件并將其帶到專用的清洗區(qū)域進(jìn)行清洗的過程。手工清洗是一種COP的方式，通常使用刷子、海綿或布等工具，配合清洗劑進(jìn)行清洗。手工清洗的優(yōu)點(diǎn)是靈活性高，可以針對(duì)不同的設(shè)備和污染程度進(jìn)行調(diào)整。手工清洗的缺點(diǎn)是效率低、重復(fù)性差、人為誤差大、清洗質(zhì)量難以保證。在線清洗（CIP）是指不需要拆卸設(shè)備，而是在密閉的條件下，通過自動(dòng)化的系統(tǒng)，使用清洗劑和水進(jìn)行循環(huán)清洗的過程。CIP的優(yōu)點(diǎn)是節(jié)省時(shí)間和人力、清洗參數(shù)可控、清洗效果可驗(yàn)證、清洗質(zhì)量高。CIP的缺點(diǎn)是需要專門的清洗設(shè)備和管道，清洗劑的消耗和排放也較大。TOC（總有機(jī)碳）檢測(cè)是一種用于測(cè)量水中有機(jī)物含量的方法，它可以反映水的純度和清潔程度。在清潔驗(yàn)證中，TOC檢測(cè)的意義是可以作為一種快速、靈敏、無損的方法，用于評(píng)估清洗后的設(shè)備表面是否有殘留的有機(jī)物，從而判斷清洗效果是否達(dá)到預(yù)期的標(biāo)準(zhǔn)。本文所用的清洗劑為注射用劑，所用的儀器為TOC分析儀（Sievers 900，美國(guó)）、pH計(jì)（Mettler Toledo，瑞士）、天平（Sartorius，德國(guó)）等。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1TOC檢測(cè)方法

本文采用濕法氧化法進(jìn)行TOC檢測(cè)，即將樣品在高溫高壓的條件下與高純氧反應(yīng)，將有機(jī)碳氧化為二氧化碳，然后用紅外線檢測(cè)器測(cè)定二氧化碳的濃度，從而計(jì)算出TOC的含量。TOC的檢測(cè)限度一般為0.5 mg/L，準(zhǔn)確度為±5%，重復(fù)性為±3%。根據(jù)疫苗類生物制品清潔驗(yàn)證中TOC檢測(cè)限度的評(píng)估方法及應(yīng)用，TOC的限度標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)根據(jù)不同的清潔方式、設(shè)備、容器等進(jìn)行分類計(jì)算，選取最低值作為該種清潔方式的TOC檢測(cè)限度。一般情況下，TOC的限度標(biāo)準(zhǔn)在0.1～1.0 mg/L之間。如果待測(cè)水樣的TOC含量低于限度標(biāo)準(zhǔn)，說明清潔驗(yàn)證的效果良好，反之則說明清潔驗(yàn)證的效果不佳，需要重新清洗或者優(yōu)化清潔工藝。

1.2.2取樣方法

本文根據(jù)不同的清洗方式，選擇不同的取樣方法。對(duì)于離線清洗（COP）方法，由于設(shè)備、容器表面不易沖洗，因此采用直接取樣法。對(duì)于COP手工清洗方法和在線清洗（CIP）方法，由于設(shè)備、容器表面可以沖洗，因此采用間接取樣法。

1.2.3取樣回收率

取樣回收率是指在取樣過程中，設(shè)備、容器表面的TOC轉(zhuǎn)移到水中的比例，是評(píng)價(jià)取樣方法有效性的重要指標(biāo)。取樣回收率的計(jì)算公式為：回收率=取樣前的TOC含量/取樣后的TOC含量×100%。

2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

本文以常見疫苗生產(chǎn)用主要培養(yǎng)基配制為例，探討疫苗類生物制品清潔驗(yàn)證中TOC檢測(cè)限度的評(píng)估方法及應(yīng)用。為了評(píng)估疫苗類生物制品清潔驗(yàn)證中TOC檢測(cè)限度，本文將需清洗的設(shè)備、容器按照清洗方式分為3組，分別為離線清洗（COP）、COP手工清洗和在線清洗（CIP）。COP方法適用于可拆卸的設(shè)備、容器具，如血漿瓶、硅膠管等；COP手工清洗方法適用于不可拆卸但可用手工擦拭的設(shè)備、容器具，如立瓶、濾器、不銹鋼分裝罩等；CIP方法適用于不可拆卸且不可用手工擦拭的設(shè)備、容器具，如培養(yǎng)基配制罐的內(nèi)壁、管道、閥門等。本文選取了各組中最具代表性的設(shè)備、容器進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3結(jié)果

3.1TOC檢測(cè)結(jié)果

表1顯示了各組設(shè)備、容器的TOC檢測(cè)結(jié)果，包括平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、RSD等。從表中可以看出，各組設(shè)備、容器的TOC質(zhì)量濃度均低于1 mg/L，且RSD均小于10%，說明TOC檢測(cè)方法的精密度和準(zhǔn)確度較高，清潔效果較好。

3.2TOC檢測(cè)限度的評(píng)估結(jié)果

表2顯示了各組設(shè)備、容器的TOC檢測(cè)限度，按照最低值的原則確定該組的TOC檢測(cè)限度標(biāo)準(zhǔn)。從表中可以看出，離線清洗（COP）方法TOC限度標(biāo)準(zhǔn)為0.250 mg/L，COP手工清洗方法TOC限度標(biāo)準(zhǔn)為0.100 mg/L，在線清洗（CIP）方法TOC限度標(biāo)準(zhǔn)為0.080 mg/L。這些限度標(biāo)準(zhǔn)均低于國(guó)際上通用的0.5 mg/L的限值，說明本文提出的TOC檢測(cè)限度的評(píng)估方法具有較高的靈敏度和嚴(yán)格性。表2TOC檢測(cè)限度的評(píng)估結(jié)果

清洗方式設(shè)備、容器TOC檢測(cè)限度

/（mg·L-1）該組TOC檢測(cè)限度標(biāo)

準(zhǔn)/（mg·L-1）COP血漿瓶0.2500.250硅膠管0.5000.250COP手工立瓶0.1670.100不銹鋼轉(zhuǎn)移罐0.1000.100濾器0.1250.100CIP培養(yǎng)基配制罐內(nèi)壁0.0800.080培養(yǎng)基配制罐管道0.0800.080

4討論

以常見疫苗生產(chǎn)的主要培養(yǎng)基配制為例，探討了疫苗類生物制品清潔驗(yàn)證中TOC檢測(cè)限度的評(píng)估方法及應(yīng)用［4］。提出的評(píng)估方法是根據(jù)各設(shè)備、容器具在最差條件下的TOC限度，選取最低值作為該種清洗方式的TOC檢測(cè)限度標(biāo)準(zhǔn)，這樣可以保證清潔驗(yàn)證的嚴(yán)格性和可靠性，避免因?yàn)樵O(shè)備、容器具的不同而導(dǎo)致的清潔效果差異。本研究結(jié)果顯示，不同清洗方式的TOC檢測(cè)限度標(biāo)準(zhǔn)有所差異，其中在線清洗（CIP）方法的TOC檢測(cè)限度標(biāo)準(zhǔn)最低，為0.080 mg/L，這說明CIP方法的清潔效果最好，也最符合疫苗類生物制品的高質(zhì)量要求。

本研究方法和結(jié)果與國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究相比有一定的創(chuàng)新性和優(yōu)勢(shì)。采用了TOC檢測(cè)作為清潔驗(yàn)證的主要指標(biāo)，而不是傳統(tǒng)的微生物檢測(cè)或者化學(xué)檢測(cè)，這樣可以更全面、更敏感、更快速地評(píng)價(jià)清潔效果，也更適合疫苗類生物制品的特點(diǎn)。本文的研究也存在局限性和不足。本文的研究對(duì)象只是常見疫苗的一種生產(chǎn)工藝，不能代表所有的疫苗類生物制品，也不能涵蓋所有的清潔驗(yàn)證場(chǎng)景，因此本文的研究結(jié)果需要在更多的疫苗類生物制品和清潔驗(yàn)證過程中進(jìn)行驗(yàn)證和優(yōu)化。

本研究為疫苗類生物制品的清潔驗(yàn)證提供了一種新的評(píng)估方法和應(yīng)用實(shí)例，為保障疫苗質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)，對(duì)提高我國(guó)疫苗類生物制品清潔驗(yàn)證的水平和質(zhì)量具有一定的參考價(jià)值和意義。

參考文獻(xiàn)：

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作者簡(jiǎn)介：白彩虹，女，甘肅蘭州人，醫(yī)學(xué)生物工程師，研究生，研究方向：疫苗生產(chǎn)。