依達拉奉對腦缺血再灌注損傷的保護作用

趙永福

河南林州市人民醫院 林州 456500

腦血管疾病的發病率和病死率在國內、外均名列前茅。在我國，其發病率是心肌梗死的5倍。腦質量僅為體質量的2%，但其耗氧量則占全身耗氧量的20%，其所需血供占心輸出量的15%。加之腦組織不能儲存能量，也不能進行糖的無氧酵解，因此其對氧和血供的要求特別高，當腦缺血發生時大量的神經細胞凋亡造成不可逆的損傷，為了能夠了解依達拉奉對神經細胞的保護作用，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 實驗目標為出生24h內SD 乳鼠，去雙側大腦皮質，以胰蛋白酶制成單細胞懸混液，加培養基調節細胞濃度為每升105級數后，在培養瓶內接種，孵育在二氧化碳培養箱，3d后經阿糖胞苷培養基進行換液，控制纖維細胞與神經膠質細胞的生長，第6天再次進行培養基換液，第7天取出蓋玻片，以說明書進行操作，完成鏡下觀察。

1.2 分組 分為正常對照組、藥物損傷組、低濃度異丙酚組（1mg／L）、中濃度異丙酚組（3 mg／L）、高濃度異丙酚組（5 mg／L）、依達拉奉組。6組中除正常對照組外，均在第7天去掉培養基，分別加入相應濃度的異丙酚培養基與濃度為100 μmol／L的依達拉奉培養基，再培養24h。

1.3 建立GLU 毒性模型［1］在第8天將原培養基去掉，除對照組外均加入濃度為200μmol／L 的Glu 培養基后30 min，以D-Hank溶液沖洗后，以10%胎牛血清培養基再次培養24h。

1.4 觀察指標 在培養第9天分別檢測各組的指標，包括神經細胞存活率、LDH 的漏出率、細胞凋亡率等，進行統計學分析［2］。

1.5 統計學方法 檢驗指標資料的數據采用SPSS 13.0統計學軟件分析，計量資料以（±s）表示，組間進行t檢驗，計數資料以χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

各組神經細胞存活率、LDH 漏出率、細胞凋亡率比較，見表1。依達拉奉組與正常對照組相比存活率無顯著下降，差異無統計學意義（P＞0.05），正常對照組相其他損傷組細胞存活率比較顯著下降（P＜0.05）。LDH 漏出率，藥物損傷組相比正常對照組顯著升高（P＜0.05），其他各組檢出率也顯著升高（P＜0.05），與藥物損傷組相比異丙酚中濃度組與依達拉奉組明顯較低（P＜0.05），其他2組降低不明顯（P＞0.05）。細胞凋亡率觀察藥物損傷組、低濃度異丙酚組、中濃度異丙酚組、高濃度異丙酚組與正常對照組比較均顯著較高（P＜0.05）。

表1 各組神經細胞存活率、LDH 漏出率、細胞凋亡率比較 （±s）

表1 各組神經細胞存活率、LDH 漏出率、細胞凋亡率比較 （±s）

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3 討論

當組織細胞受到損傷發生缺血缺氧4 min即可造成神經元的死亡。盡管機體存在一系列的代償調節機制，但這種調節機制有一定的限度，一旦超過限度，就可造成神經元損傷，細胞的凋亡與過氧化、自由基對細胞損傷有著直接作用。

人體內的活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）主要有超氧陰離子，羥自由基（OH-）、一氧化氮自由基（NO-）、烷自由基、烷氧基和烷過氧基、脂質過氧化物自由基等。在有氧呼吸過程中從線粒體呼吸鏈中可滲漏一些還原不完全的氧分子，以致產生大量的·O2-和H2O2，其產生來源有中性粒細胞、線粒體、Ca2＋超載［3］。過氧化氫（H2O2）和·O2由許多細胞氧化代謝反應產生，包括黃嘌呤氧化、NADPH 氧化、花生四烯酸經環氧化酶（COX-2）和脂氧化酶（lipoox-idase）代謝、單胺氧化酶（monoamine oxidase，MAO）和線粒體呼吸鏈，也能由兒茶酚胺的自氧化非酶通路形成。一氧化氮由一氧化氮合酶把精氨酸轉化成瓜氨酸后形成，·O2-并非直接誘導脂質過氧化［4］，但是與NO 反應形成超氧化氮（ONOO-），后者啟動脂質過氧化過程。

依達拉奉（3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮）為無色或近無色透明溶液的一種自由基清除劑，能抑制黃嘌呤氧化酶和次黃嘌呤氧化酶的活性，清除自由基，提高過氧化物歧化酶（SOD）活性，增強細胞總抗氧化能力，抑制細胞膜過氧化［5］，還能刺激前列環素的生成，減少炎癥介質白三烯的生成，可以顯著提高細胞穩定性，對神經細胞損傷起到保護作用，減少細胞凋亡率，增加細胞存活率。

［1］劉輝，王迪芬，付江泉，等.異丙酚和依達拉奉對腦缺血／再灌注損傷保護作用的研究比較［J］.中國危重病急救醫學，2008，20（11）：691-692.

［2］朱曉蕾，吳曉新，王中原，等.依達拉奉對小鼠急性腦缺血-再灌注損傷的保護作用［J］.江蘇醫藥，2011，37（7）：745-748.

［3］付江泉，王迪芬，劉輝，等.神經生長因子和依達拉奉對缺血／再灌注損傷腦保護作用的比較研究［J］.中國危重病急救醫學，2010，22（4）：226-229.

［4］吳務權.依達拉奉對腦缺血再灌注損傷的保護作用［J］.中國醫科大學學報，2005，36（6）：577.

［5］王永生.依達拉奉對腦缺血再灌注損傷保護作用機制的研究［J］.藥物與臨床，2011，18（24）：48.