人乳腺球蛋白及Ki-67在乳腺癌中的表達及臨床意義

侯永強，劉金彪，王新征，鄧 淼，王 寧，王明軍，黃亞楷，鄧 慶，王曉娟

乳腺癌是婦女常見的惡性腫瘤，世界衛生組織統計，全球每年約有120萬人發病，50萬人死亡。我國乳腺癌的發病率正逐年上升，并且有躍居女性惡性腫瘤首位的趨勢[1]。乳腺癌的發病是一個多因素長期作用、逐步發展的過程。人乳腺球蛋白是一個乳腺相關糖蛋白，它是一個分泌家族(包括子宮球蛋白和lipophilin)成員的遠親[2]。研究表明，該蛋白是檢測前哨淋巴結和外周血液中潛伏乳腺癌細胞的靈敏標記。如果在乳腺癌標本中檢測乳腺球蛋白的表達情況與微轉移有相關性，在今后的治療中就會更加有效。Ki-67是一種與細胞增殖特別相關的核抗原，可以通過Ki-67抗原的檢測，了解惡性腫瘤的細胞增殖活性，特別是對于乳腺癌病人。它是乳腺癌重要的增殖指標，對指導乳腺癌的臨床化療有一定的意義。聯合檢測hMAM和Ki-67在乳腺癌中的表達可能有助于評估乳腺癌的臨床分期，為制定合理的治療方案提供參考信息。

1 材料和方法

1.1標本選取2009～2010年于河南科技大學第一附屬醫院外科進行手術治療的152例乳腺癌組織作為實驗組。所有患者年齡在29～84歲之間，中位年齡52歲。絕經前女性90例，絕經后62例，腫瘤<2 cm者72例，2～5 cm者76例，>5 cm者4例。腋窩淋巴結無轉移者66例，腋窩淋巴結有轉移者86例。術前所有病人均未行化療或內分泌治療。同時隨機挑選30例乳腺良性病變組織作為對照組。

1.2操作步驟全部病例組織蠟塊采用連續切片，切片厚度為4 μm，取相鄰3張切片分別進行HE染色及免疫組化染色。免疫組化一抗為鼠抗人單克隆抗體、Maxvision試劑盒購自福建邁新公司。操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，用已知陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。

1.3結果判定由我院兩位高級職稱病理醫師盲法讀片，獨立觀察每張切片10個具有代表性的高倍視野。人乳腺球蛋白陽性判斷標準：陽性染色者在細胞膜和(或)漿有棕黃色顆粒沉著。Ki-67陽性判斷標準：陽性染色者在細胞核有棕黃色顆粒沉著。

1.4統計學處理研究資料采用SPSS 17.0統計軟件進行χ2檢驗，P<0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1人乳腺球蛋白的免疫組化結果人乳腺球蛋白定位于胞漿，呈棕黃色顆粒。人乳腺球蛋白在乳腺癌組、乳腺良性病變組的表達率分別為51.3%、0%。乳腺癌組和乳腺良性病變組差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組病人乳腺球蛋白表達陽性率比較

2.2人乳腺球蛋白在乳腺癌中的表達與臨床病理指標的關系人乳腺球蛋白的陽性表達與淋巴結轉移、無顯示、臨床分期有關，與年齡、月經情況、診斷時腫瘤大小無關。見表2。

表2 乳腺癌人乳腺球蛋白的表達與臨床病理因素的關系

2.3 Ki-67的免疫組化結果Ki-67定位于胞核，呈棕黃色顆粒。Ki-67在乳腺癌組、乳腺良性病變組的表達率分別為68.7%、0%。乳腺癌組和乳腺良性病變組差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組病人Ki-67表達陽性率比較

2.4 Ki-67在乳腺癌中的表達與臨床病理指標的關系Ki-67的陽性表達與臨床分期、腫瘤大小、淋巴結轉移未顯示有關，與患者的年齡、月經狀況無關。見表4。

3 討論

腫瘤的浸潤與轉移是一個多基因參與、多步驟的復雜過程，是眾多因子相互協調以及共同作用的結果，乳腺癌也不例外，威脅乳腺癌患者生命的主要原因是乳腺癌的復發和轉移[3]。雖然檢測乳腺癌微轉移的腫瘤標志物有很多，但目前仍缺乏乳腺癌的特異標志物。人乳腺球蛋白是近年發現的乳腺癌特異性腫瘤學標志物，具有較好的靈敏性、較高的特異性，對乳腺癌的早期診斷具有較高的臨床價值。它是1996年Watson等利用差式篩選和cDNA末端擴增(rapid amplification of cDNA ends，RACE)技術，從乳腺癌上皮細胞克隆出一個分子量10 kD的分泌型差異表達蛋白，并命名為人乳腺球蛋白[2]。它是一種乳腺特異蛋白，它的過量表達更傾向于乳腺上皮細胞的特異改變，所以它在微小的轉移研究中更具有特異性。但由于人乳腺球蛋白抗原決定簇的多態性，制備特異性較高的乳腺癌腫瘤疫苗仍有許多問題亟待解決[4]。

表4 兩組病人Ki-67表達陽性率比較

本研究采用免疫組化方法檢測乳腺良性疾病和乳腺癌組織中人乳腺球蛋白及Ki-67表達結果顯示乳腺癌組織中人乳腺球蛋白及Ki-67表達顯著高于乳腺良性疾病組織中的表達。人乳腺球蛋白的陽性表達與淋巴結轉移、組織學分級、臨床分期及c-erbB2表達有顯著關系，與年齡、月經情況、腫瘤大小無關。Ki-67的陽性表達與臨床分期、腫瘤大小、淋巴結轉移情況有關，與患者的年齡、月經狀況無關。

人乳腺球蛋白及Ki-67作為目前乳腺癌特異性最好的腫瘤標志物，對其功能的研究可進一步揭示乳腺癌的發生機制，指導臨床，為基因治療提供思路。在乳腺癌中hMAM和Ki-67的表達呈正相關，二者共同參與乳腺癌的浸潤轉移。聯合檢測hMAM和Ki-67在乳腺癌中的表達可能有助于評估乳腺癌的臨床分期，為制定合理的治療方案提供參考信息。

參考文獻：

[1] Colpitts TL，Billing Medel P，Friedman P，et a1.Mammaglobin is found in breast tissue as a complex with BU101[J].Biochem，2001，40(37)：11048-11059．

[2] Watson MA,Fleming TP.Mammaglobin, a mammary-specific member of the uteroglobin gene family,is overexpressed in human breast cancer[J].Res Cancer, 1996, 56(15):860-865.

[3] Allenspach EJ，Maillard I，Aster JC，et al．Notch signaling in cancer[J].Cancer Biol Ther，2002，1(5)：466-476．

[4] Jaramillo A，Majumder K，Manna PP，et a1．Identification of HLA-A3-restricted CD8+T cell epitopes derived from mammaglobin-A，a tumor-associated antigen of human breast cancer[J].Int J Cancer，2002，102(5)：499-506．