“腸病及肺”動物模型的建立研究思路探討＊

陳小兵，楊 宇，唐宇嬌，惠 毅，楊瞿嘉，周新穎

（成都中醫藥大學基礎醫學院，四川 成都610075）

中醫學說認為，人體為一整體，機體之間的的皮膚，經絡，臟腑，骨髓，存在著連接內外，表里溝通的關系，診療疾病中的“有諸內必形于外”即是這一思想的重要應用。《靈樞·本輸》言：“肺合大腸”，也就是后世的“肺與大腸相表里”。意指肺與大腸相互關聯，相互影響。從而維持人體的正常生命和功能活動有著重要的意義。肺合大腸兩者之間主要通過幾個方面聯系：（1）功能上相應，《中西匯通醫經精義》云：“肺為清金。大腸為燥金。肺藏魄。而大腸肛門。即為魄門……此大腸。所以為傳導肺氣之府也”。肺主宣發，通調水道，肺對體內的水液，氣機有宣散，控制等作用。《素問·靈蘭秘典論》云：“大腸者，傳導之官，變化出焉”，說明大腸對體內的糟粕起輸出作用，在糟粕中，也存在者水液，在輸出的過程中，也有氣機起著相應的作用，所以兩臟在功能上有一個共同的作用點，水液和氣機。（2）生理上相互聯系，主要表現在，《黃帝內經·靈樞·經脈》云：“肺手太陰之脈，起于中焦，下絡大腸”，“大腸手陽明之脈，……絡肺，下膈。”肺經和大腸經除經脈的直接連接外，還通過分出的絡脈和別出的經別相互連絡。（3）病理上相互傳變，既然兩者有著密切的聯系，那么在疾病中同樣可以通過這種聯系而互相影響，包括兩個方面，治療中也常常采用相互治療的法則①肺病及腸，腸病治肺。如《理論駢文》云：“風寒入肺皆令人咳，肺絡大腸又與大腸相表里，肺咳不已，往往大腸受之”。說明肺氣的閉郁，水液輸布的減弱，影響大腸的傳導失司。②腸病及肺，肺病治腸。《傷寒論》第235條：“陽明病，脈浮，無汗而喘者，發汗則愈，宜麻黃湯”。《血證論·臟腑病機論》云：“大腸司燥金，喜潤而惡燥，與肺相表里，故病多治肺之法治之。”

本文擬從“腸病及肺”入手，試圖建立“腸病及肺”的動物實驗模型，以期能較全面的模擬人體肺腸之間的聯系。從而為這一論述，提供依據，并能解決一些問題。

1 既往模型建立概述

中醫和西醫在理論和實踐上有很大的差異，研究和探索過程中制備的動物模型和西方醫學的研究也有不同。在中醫研究的動物模型中，不但要考慮病，還要考慮證，因此，評價動物模型要以病和證相結合，即最好與中醫的機理相符。本實驗腸病的動物模型中，第一，關鍵要考慮對肺的影響［1～3］，即腸病及肺，包括各個方面，如一般情況，如體重，精神，活動情況，病理表現能提供直接的證據，如腸病同時觀察結腸與肺的病理切片，同時觀察炎癥，免疫因子能全面了解腸病炎癥對肺的影響，肺腸微生物的觀察可以試圖觀察腸病與肺的內環境等。第二，腸病及肺的模型符合中醫肺腸相關的紐帶，即肺主宣發，主運化水液，大腸主傳導。

既往建立的實驗動物模型中概況起來主要有兩大類，一類為腸道的閉阻不通，如便秘和結扎直腸等模型，許紅等復制大鼠直腸半結扎模型，觀察心、肝、腎、肺和腸等器官的形態學改變，觀察肺泡灌洗液細胞分類計數變化以及大承氣湯的干預效果，結果證明了腸道病變可引起特異性的肺臟損害；通過治療腸道病變，肺部的損害隨之減輕，從而側面印證了中醫“肺合大腸”臟腑相關理論，肺－腸病理生理存在一定的相關性及互動調節現象［4］。葉建紅等通過建立便秘大鼠模型探討肺腸的微生態，結果表明模型組結腸和肺組織的菌群類型及數量都有不同程度的變化［5］。另一類大腸的傳導失司，如炎癥性腸病模型和脾陽虛的泄瀉模型等。如方亞利等以葡聚糖硫酸鈉（DSS）建立小鼠潰瘍性結腸炎模型，并檢測呼吸道分泌液中sIg A含量，結論顯示無統計學意義［6］。孫小云等［7］運用通腑湯觀察急性肺損傷（AII）大鼠腸組織中降鈣素基因相關肽（CGRP）的影響，結論顯示腸組織中CGRD降低明顯，有統計學意義。都從不同的方面探討了肺與大腸的相互關系。

2 模型的建立

2.1 造模方案 取體重（180～220）g健康SD大鼠，雄性，共70只。按體重隨機分成空白對照（30只），模型組（30只）和治療組（10只）。所有大鼠常規適應性飼養1周后，模型組及治療組大鼠均以2.4%水合氯1.0～1.2 mL／100 g腹腔注射麻醉后，在石蠟油潤滑下，經腸道輕緩插入輸液管至距肛8 c m處，將100 mg／kg TNBS（三硝基苯磺酸）加入等體積50%乙醇，注入大鼠結腸，然后注入約0.5 mL空氣，將大鼠尾部向上輕提45°放置1 min，然后保持平躺自然清醒。空白對照組大鼠按上述方法給予等量生理鹽水灌腸；分別在造模第2周、第5周、第8周，隨機抽取正常對照組和模型組大鼠各10只，隨機抽取空白對照組和模型組大鼠各10只，以2.4%水合氯醛1.0～1.2 mL／100 g腹腔注射麻醉并處死測定相應指標［8～10］。治療組于第5周選用三拗湯于TNBS造模后行灌胃治療，至第8周統一處死。

2.2 測定內容 一般情況，觀察大鼠的精神，進食，活動，體重等情況，取正常組和對照組結腸和肺部組織，制作病理切片HE染色后顯微鏡下觀察結腸和肺部組織病理變化。從免疫方面探討肺和大腸的相關性，采用雙抗體夾心ABC一ELLSA法，測定結腸和肺組織IL－1、TNF－α水平變化［6］。

3 模型討論

3.1 實驗動物模型 選取的要點是能反應大腸與肺之間的聯系［11］，前以論述肺與大腸相表里的關系紐帶主要是水液和氣機，孔小云等從水液代謝角度探討肺與大腸的關系［12］。本實驗擬從大腸傳導失司，來探討對肺的輸布，運化的作用的影響，采用TNBS建立潰瘍性結腸炎模型。其優點：（1）TNBS建立結腸炎模型以其，價格不高，重復性好，病理變化和人體相似，故應用廣泛，依據較高。（2）結腸炎模型引起的癥狀，主要為腹瀉，腸道病理損壞為特征。符合腸病的損壞導致腸道失司，氣化不利這一特征。符合能否反映對肺影響的這一特點。

3.2 模型大鼠處死時間的選擇 TNBS屬于半抗原，單獨在體內不能誘導免疫應答，只有在與組織蛋白等高分子物質結合后才能誘發免疫反應，造模時需用乙醇作為腸黏膜屏障的破壞劑［13～14］，使TNBS與腸黏膜角蛋白結合成全抗原，從而激發局部免疫反應。而對其機體的影響，王皓等報道稱，潰瘍性結腸炎動物模型病理變化在第1～3周為急性期改變，以中性粒細胞浸潤為主；第4～8周為慢性炎癥改變，浸潤細胞主要為淋巴細胞和漿細胞［15］。考慮到腸病及肺的傳變，假設在傳變的過程中需要時間，故選擇時間擬定在2.5.8周，這樣做的優點是能較全面反應TNBS在大鼠整個周期的影響，利于觀察肺腸之間的相關性，且能評估對肺部的影響程度。

3.3 關于IL－1、TNF－α的選取 UC的發病機制雖未完全明確，但是免疫因素在其中具有重要的意義，研究發現，UC病變黏膜局部巨噬細胞活化，釋放一系列細胞因（IL－1、IL－6、IL－8、TNF－α），活動性UC血清、結腸黏IL－1、TNF－α膜中TNF－α、IL－6、IL－8水平均明顯升高，其結腸黏膜中TNF－αIL－6及IL－8的mRNA表達明顯增加，這些細胞因子的表達和分泌均與疾病的炎癥程度呈正相關。IL－6、IL－8、IL－1和TNF－α等促炎癥細胞因子已是公認的能介導UC發病的細胞因子［16］。孫慧怡等［17］探討IBD患者血清TNF－α和IL－8水平與疾病活動度的關系，結果UC和CD活動期患者TNF－α和IL－8血清水平均高于緩解期患者及正常組，IBD患者血清TNF－α和IL－8水平升高，并參與了腸黏膜組織的炎癥損傷。

3.4 三拗湯 《太平惠民和劑局方》由麻黃，杏仁，甘草組成，主要運用于外感風寒，肺氣不宣證。鼻塞聲重，語音不出，咳嗽胸悶。臨床中運用只宣發肺氣來治療腸病的案例很少，多通過肺腸合治來達到治療效果，李亞玲［18］運用以桑白皮，黃芩等治療慢性潰瘍性結腸炎，雖然也有宣肺的功效，從實質來講，也屬清熱解毒之品，鄭舜華［19］采用補肺益腸法治療潰瘍性結腸炎，從病久及虛，病久及瘀的觀點入手，用黨參，黃芪，桑白皮，血竭等藥物進行了大鼠實驗，張永艷［20］運用宣肺健脾湯治療慢性潰瘍性結腸炎，均豐富了肺腸的相關研究。本實驗旨在考慮通過治肺對肺部水液氣機和宣散，在微觀上觀察對腸病的影響，在病理解剖上可能達不到客觀標準，但TNF－α和IL－8含量與模型組相比有差異則意義重大。

此外，本實驗尚有考慮不足之處，如實驗模型是否會隨著TNBS對模型損害的逐漸恢復而造成肺部指標隨之改變，從而影響實驗統計意義。免疫指標較少，不能較為完全的反應對免疫方面的影響，可酌情增加指標，或從神經肽方面如免疫組化的SP，VIP物質等進行相關性探索。

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