頂空毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定二氟尼柳原料藥中的殘留溶劑

方 凱胡鳴韻黃 俊李 萍

（1.巨化集團(tuán)公司制藥廠；2.巨化集團(tuán)技術(shù)中心：浙江 衢州 324004）

頂空毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定二氟尼柳原料藥中的殘留溶劑

方 凱1胡鳴韻1黃 俊1李 萍2

（1.巨化集團(tuán)公司制藥廠；2.巨化集團(tuán)技術(shù)中心：浙江 衢州 324004）

采用 Agilent DB-624 毛細(xì)管色譜柱（25 m×0.53 mm×3.0 μm），F(xiàn)ID 檢測(cè)器，N,N-二甲基甲酰胺為溶劑，進(jìn)行了頂空毛細(xì)管氣相色譜法同時(shí)測(cè)定二氟尼柳原料藥中二氯甲烷、苯及甲苯等3種殘留溶劑的分析方法試驗(yàn)。結(jié)果表明，3種殘留溶劑在各自的含量范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（相關(guān)系數(shù) 0.994 5～0.997 5），檢測(cè)限分別為 0.012 8、0.044 8、0.189 mg/L，平均添加回收率為90.6%～97.9%。所建方法簡(jiǎn)單、靈敏、可靠，適用于二氟尼柳原料藥中殘留溶劑的分析檢測(cè)。

氣相色譜法；頂空采樣；殘留溶劑；二氟尼柳

二氟尼柳，白色結(jié)晶，難溶于水，為水楊酸衍生物，具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎作用，主要用于輕、中度疼痛的鎮(zhèn)痛，如關(guān)節(jié)炎、腕、踝關(guān)節(jié)的扭傷、小手術(shù)、腫瘤等疼痛。與阿司匹林相比，二氟尼柳鎮(zhèn)痛消炎作用強(qiáng)且維持時(shí)間長(zhǎng)，抗炎鎮(zhèn)痛作用為其10倍，解熱作用為1.5倍，胃腸道刺激反應(yīng)少見，過(guò)量不會(huì)造成酸堿不平衡[1]。

該原料藥在制備過(guò)程中使用了二氯甲烷、苯及甲苯等有機(jī)溶劑，這些溶劑會(huì)對(duì)人體健康和環(huán)境造成危害，依據(jù)人用藥品注冊(cè)技術(shù)規(guī)范國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）提出的殘留溶劑指導(dǎo)原則，這些溶劑均被列為藥品必須限制的第1、2類有機(jī)溶劑[2]。為保證藥品質(zhì)量和用藥安全，控制其殘留量對(duì)保證藥品質(zhì)量和用藥安全有重要意義，在ICH指導(dǎo)原則中分別規(guī)定苯、甲苯及二氯甲烷的溶劑殘留限量質(zhì)量濃度分別為 2、890、600 mg/kg。

關(guān)于二氟尼柳殘留溶劑測(cè)定的研究鮮見文獻(xiàn)報(bào)道。作者根據(jù)ICH的指導(dǎo)原則和《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版的相關(guān)規(guī)定，采用頂空進(jìn)樣毛細(xì)管氣相色譜法對(duì)二氟尼柳原料藥中有機(jī)溶劑殘留量的檢測(cè)進(jìn)行了研究，以期用于實(shí)際生產(chǎn)中的質(zhì)量控制[3]。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與材料

Aglient 6890N氣相色譜儀 （含F(xiàn)ID檢測(cè)器），METTLER GB204電子天平，DK-3001F頂空進(jìn)樣器。

二氟尼柳， 工業(yè)品 （批號(hào) 100817、100818、100819、101007）；二氯甲烷，苯，甲苯，色譜試劑；N,N-二甲基甲酰胺（DMF），高效液相（HPLC）色譜試劑；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 色譜條件

色譜柱：Agilent DB-624石英毛細(xì)管色譜柱（25 m×0.53 mm×3.0 μm），柱溫 85 ℃；檢測(cè)器：FID，溫度230℃；進(jìn)樣器溫度200℃，進(jìn)樣量：1 mL；分流進(jìn)樣，體積比1:1；載氣：高純氮（質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.99%）、空氣、H2的體積流量分別為 6.0、450、45 mL/min；尾吹體積流量40 mL/min。頂空進(jìn)樣器：樣品、管路、閥箱溫度分別為 90、105、105 ℃；保溫時(shí)間 45 min，進(jìn)樣壓力0.06 MPa。

1.3 溶液的制備

1)對(duì)照儲(chǔ)備液。分別準(zhǔn)確稱取苯10 mg、甲苯222.5 mg、二氯甲烷150 mg，用DMF溶解定容，配制成質(zhì)量濃度分別為0.05、22.25、15.0 g/L的對(duì)照儲(chǔ)備液。

2)混合對(duì)照儲(chǔ)備溶液。準(zhǔn)確移取對(duì)照儲(chǔ)備液各10.0 mL置于100 mL容量瓶中，用DMF溶解并稀釋至刻度，配制成質(zhì)量濃度分別為0.005 0、2.225、1.500 g/L的苯、甲苯及二氯甲烷混合對(duì)照儲(chǔ)備溶液。

3)系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別準(zhǔn)確移取混合對(duì)照儲(chǔ)備液 2.50、4.00、5.00、6.00、7.50 mL， 置于 50 mL 量瓶中，用DMF稀釋至刻度，搖勻。準(zhǔn)確移取上述溶液2 mL置于20 mL頂空樣品瓶中，加入3 mL濃度1 mol/L的硫酸鉀溶液，加蓋密封，作為系列標(biāo)準(zhǔn)溶液（記為 C1～C5溶液）。

4)樣品溶液。分別準(zhǔn)確稱取二氟尼柳樣品約500 mg（精確至 0.1 mg，下同），置于 20 mL 頂空樣品瓶中，定量加入DMF 2.0 mL溶解，加入3 mL濃度1 mol/L的硫酸鉀溶液，加蓋密封，作為樣品溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取標(biāo)準(zhǔn)溶液C3、樣品溶液及溶劑空白分別按1.2節(jié)的方法進(jìn)行分析，色譜圖見圖1。

圖1表明，3種殘留溶劑分離良好，均達(dá)到基線分離，分離度均大于1.5，理論板數(shù)均不低于5 000，峰形、分離度均符合要求。

2.2 溶劑的選擇

對(duì)FID檢測(cè)器，水為最理想的溶劑。但由于二氟尼柳難溶于水，測(cè)定的殘留溶劑在水中溶解度也不好，而在DMF中樣品和殘留溶劑的溶解度都較好，對(duì)待測(cè)組分無(wú)干擾，因此選用DMF作為溶解樣品的溶劑。

2.3 頂空條件的選擇

2.3.1 溫度

頂空溫度應(yīng)根據(jù)溶劑的特性及供試品中殘留溶劑的沸點(diǎn)選擇，升溫有利于揮發(fā)性物質(zhì)的揮發(fā)，提高檢測(cè)靈敏度。通常以水為溶劑及測(cè)定低沸點(diǎn)殘留溶劑時(shí)，頂空溫度不宜超過(guò)85℃，測(cè)定沸點(diǎn)較高的殘留溶劑時(shí)，選擇較高的頂空溫度，但應(yīng)兼顧供試品的熱分解特性，盡量避免供試品產(chǎn)生的揮發(fā)性熱分解產(chǎn)物干擾測(cè)定結(jié)果。試驗(yàn)考察了不同的頂空溫度對(duì)樣品測(cè)定的影響，結(jié)果如表1所示。

表1 平衡溫度和峰面積的關(guān)系Tab 1 The relationship of the equilibrium temperature and the peak areas

由表1可看出，3種溶劑的峰面積隨著溫度的升高而增加，85℃后峰面積增加趨勢(shì)減緩，考慮樣品的穩(wěn)定性及檢測(cè)靈敏度，選擇90℃作為頂空溫度。

2.3.2 平衡時(shí)間

頂空平衡時(shí)間是要確保供試品溶液的氣-液兩相達(dá)到平衡，氣-液兩相平衡時(shí)間本質(zhì)上取決于被測(cè)組分分子從樣品基質(zhì)到氣相的擴(kuò)散速度。頂空平衡時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，過(guò)長(zhǎng)可能引起頂空瓶的氣密性變差或供試品分解等，導(dǎo)致定量的準(zhǔn)確性降低。試驗(yàn)考察了不同的頂空平衡時(shí)間對(duì)樣品測(cè)定的影響，結(jié)果見表2。

表2 平衡時(shí)間和峰面積的關(guān)系Tab 2 The relationship of the equilibrium times and the peak areas

由表2可看出，3種溶劑的峰面積隨著平衡時(shí)間增加而增加，30 min后峰面積增加趨勢(shì)減緩，比較不同溫度下的精密度，45 min平衡時(shí)間的精密度最好（RSD較小），因此選擇45 min作為頂空平衡時(shí)間。

2.3.3 硫酸鉀用量

“鹽析效應(yīng)”，即溶解的鹽離子對(duì)溶解于水溶液中物質(zhì)的活度有影響。利用此效應(yīng)添加鹽析劑可以增加活度系數(shù)，降低物質(zhì)的溶解度，提高液面上被測(cè)揮發(fā)痕量組分的含量。考察不同鹽析劑用量對(duì)測(cè)定的影響，結(jié)果表明，當(dāng)不加入鹽析劑時(shí)，痕量苯難以檢測(cè)到，檢測(cè)靈敏度隨加入量增加而提高，當(dāng)加入量大于3 mL時(shí)，樣品溶解性開始變差，因此選擇鹽析劑1 mol/L硫酸鉀溶液的加入量為3 mL。

2.4 線性關(guān)系、檢出限及定量限

將配制好的5個(gè)系列含量的混合對(duì)照溶液（C1～C5）分別按1.2節(jié)給出的色譜條件進(jìn)樣，以各溶劑平均峰面積A對(duì)其各自的質(zhì)量濃度ρ作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到3種溶劑的線性方程及其相關(guān)系數(shù)。將對(duì)照溶液C1依次進(jìn)行稀釋，并在給出的色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，以信噪比（S/N）為3時(shí)計(jì)算最低檢出限（LOD），以S/N為10時(shí)計(jì)算定量限（LOQ），結(jié)果見表3。

表3 3種溶劑的線性關(guān)系、檢出限（S/N=3）和定量限（S/N=10）Tab 3 Linear regression results ond the limits of detection(LOD)(S/N=3)and quantification(LOQ)(S/N=10)of the 3 solvents

表3結(jié)果表明，3種溶劑的含量與峰面積的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均在0.99以上。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液C32 mL，共6份，密封，搖勻。按1.2節(jié)色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算苯、甲苯、二氯甲烷的峰面積的RSD，結(jié)果見表4。

表4 方法精密度Tab 4 The precision of the method

由表4可見，苯、甲苯、二氯甲烷的峰面積的RSD分別為3.4%、3.5%、3.0%，表明方法精密度良好。

2.6 回收率

取已知各溶劑含量的樣品（批號(hào)100817）0.5 g，精密稱定，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，共9份，分別定量加入2.0 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液C1、C3、C5，各3份，加入3 mL濃度1 mol/L的硫酸鉀溶液，加蓋密封。按1.2節(jié)色譜條件進(jìn)行分析，按外標(biāo)法計(jì)算，苯、甲苯、二氯甲烷的平均回收率分別為90.6%、97.9%、93.2%，RSD分別為2.4%、7.5%、1.1%。

2.7 實(shí)際樣品檢測(cè)

采用實(shí)驗(yàn)所建立的方法對(duì)4個(gè)批次的供試樣品進(jìn)行了檢測(cè)，每個(gè)樣品各分析6次，平均結(jié)果如表5所示。

表5 二氟尼柳原料藥殘留溶劑的分析結(jié)果Tab 5 Analytical results of residual solvents in raw material drug of Diflunisal

3 結(jié)論

研究結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)所建立的殘留溶劑檢測(cè)方法對(duì)3種有機(jī)溶劑的分離性良好，操作簡(jiǎn)便，苯、甲苯、二氯甲烷的含量與峰面積的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均在0.99以上，檢測(cè)限分別為 0.012 8、0.044 8、0.189 mg/L，平均回收率分別為90.6%、97.9%、93.2%，RSD分別為2.4%、7.5%、1.1%。方法精密度、檢測(cè)限、回收率等均符合要求，適用于二氟尼柳原料藥中殘留有機(jī)溶劑的檢測(cè)，同時(shí)也可為從事多組分殘留溶劑檢測(cè)的分析工作者提供參考。

[1]竺心影.藥理學(xué)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,1995:124.

[2]周海鈞.藥品注冊(cè)的國(guó)際技術(shù)要求質(zhì)量部分[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:343.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:二部[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:附錄61-65.

Head-Space Sampling Capillary GC for Determing Residual Solvents in Raw Material Drug of Diflunisal

Fang Kai1,Hu Mingyun1,Huang Jun1,Li Ping2
(1.Juhua Group Corporation Pharmaceutical Factory;2.Juhua Group Technology Center:Quzhou,Zhejiang 324000)

A capillary GC method with head-space sampling was established for determing residual solvents such as dichloromethane,benzene and methylbenzene in raw material drug of Diflunisal.Agilent DB-624 capillary column(25 m×0.53 mm×3.0 μm)was used,FID as detector and DMF as the solvent．The result showed that linear responses were obtained for the 3 residual solvents in their respective concentration ranges(R=0.994 5～0.997 5,n=5).The average recoveries of three concentration levels were 90.6%～97.9%．The developed method simple,sensitive and accurate for the residual solvent analysis in raw material drug of Diflunisal．

gas chromatography(GC);head-space sampling;residual solvents;Diflunisal

TQ657.7+1

ADOI10.3969/j.issn.1006-6829.2012.02.003

2012-01-24；

2012-02-25