燒傷方對實驗性燙傷大鼠的實驗研究*

劉心亮 曾小粵 溫志鵬 熊益群 王重陽 徐紹鋼 穆桂萍

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬深圳醫(yī)院，廣東 深圳 518033）

燒傷作為一種常見的外傷，近年來其發(fā)生率逐漸上升［1-2］。燒傷治療中存在創(chuàng)面疼痛、進(jìn)行性壞死、易感染、瘢痕愈合四大難題。近年來，中藥在治療燒傷的作用日益受到人們的重視，我們通過動物實驗探討燒傷方在燙傷創(chuàng)面愈合、水腫抑制、中樞調(diào)控鎮(zhèn)痛以及機(jī)體抗氧化防衛(wèi)系統(tǒng)的作用。現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SD大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量（200±20）g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。

1.2 藥物與試劑 燒傷方由黃柏、苦參、蒼術(shù)、防風(fēng)、荊芥穗、雄黃、甘草等中藥水煎提純制成，含生藥量450 g/L，冷藏備用（深圳市中醫(yī)院制劑室制備）；京萬紅軟膏，由天津達(dá)仁堂制藥二廠生產(chǎn)。腦啡肽（ENK）試劑盒，由上海西唐生物科技有限公司提供；超氧化物歧化酶（SOD），由南京建成生物工程研究所提供。

1.3 主要儀器 日本島津UV-1700型紫外可見分光光度計；德國Hettich UNIVERSAL 32臺式高速冷凍離心機(jī)；美國BIOTEK ELX800型酶標(biāo)儀；日本島津AUY120電子分析天平。

1.4 分組與造模 60只SD大鼠隨機(jī)分3組：模型組、燒傷方組、京萬紅組，每組20只。全部大鼠在實驗期間均正常飲水，普通飲食，于試驗前24 h背部脫毛約2 cm2。各組用80℃恒溫水通過一玻璃圓筒分別燙傷大鼠背部脫毛處皮膚，造成Ⅱ度燙傷模型。

1.5 給藥方法 燒傷方組每日給大鼠燙傷部位外敷燒傷方4次，每次約2 mL，連續(xù)7 d；京萬紅組每日給大鼠燙傷部位外敷京萬紅軟膏4次，連續(xù)7 d；模型組每日給大鼠燙傷部位外敷生理鹽水4次，連續(xù)7 d。

1.6 標(biāo)本采集與檢測 末次給藥后隔日每組10只大鼠抽取全血、處死留取燙傷組織以及尾側(cè)亞核。（1）剩余的大鼠繼續(xù)觀察燙傷面成痂時間、創(chuàng)面愈合時間、創(chuàng)面修復(fù)情況。（2）留取燙傷部位皮膚8 mm×8 mm稱質(zhì)量。（3）取大鼠尾側(cè)亞核，稱質(zhì)量，置于1 mL 100℃生理鹽水中煮沸3 min，取出加入0.1 mol/L鹽酸0.5mL進(jìn)行勻漿，將勻漿液收集在1.5mL離心管中，加入0.1 mol/L的氫氧化鈉0.5 mL，混勻，4℃ 12000 r/min離心30 min，取上清液測定ENK含量，檢測方法嚴(yán)格按操作說明書進(jìn)行。（4）全血離心后用血漿檢測SOD，方法嚴(yán)格按操作說明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 燒傷方對燙傷大鼠創(chuàng)面結(jié)痂、愈合時間的影響 見表1。燒傷方組及京萬紅組創(chuàng)面結(jié)痂時間及愈合時間均短于模型組（P＜0.05或0.01），且燒傷方組優(yōu)于京萬紅組（P＜0.05）。

表1 各組大鼠創(chuàng)面結(jié)痂、愈合時間及皮膚質(zhì)量比較（）

表1 各組大鼠創(chuàng)面結(jié)痂、愈合時間及皮膚質(zhì)量比較（）

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與京萬紅組比較，△P＜0.05。下同。

組別 n 創(chuàng)面結(jié)痂時間（d） 創(chuàng)面愈合時間（d） 皮膚質(zhì)量（mg）模型組 10 0.93±0.16 16.1±1.45 105.86±8.83燒傷方組 10 0.51±0.11**△ 11.5±1.22**△ 75.23±10.42**京萬紅組 10 0.72±0.14* 13.6±1.38* 84.75±9.35*

2.2 燒傷方對燙傷大鼠水腫的抑制作用 見表1。燒傷方組和京萬紅組抑制水腫作用明顯，皮膚質(zhì)量輕于模型組（P＜0.01），并且燒傷方組優(yōu)于京萬紅組。

2.3 燒傷方對燙傷大鼠側(cè)亞核組織中ENK含量的影響 見表2。燒傷方組和京萬組側(cè)亞核組織中ENK含量都明顯升高（P＜0.05或0.01）；燒傷方組和京萬組相比較，ENK含量未見明顯差異（P＞0.05）。

表2 各組大鼠尾側(cè)亞核組織ENK含量及血漿SOD含量比較（）

表2 各組大鼠尾側(cè)亞核組織ENK含量及血漿SOD含量比較（）

組別 n ENK（mg/g） SOD（U/mL）模型組 10 1.18±0.32 148.02±11.48燒傷方組 10 2.03±0.47** 170.54±11.76**京萬紅組 10 1.95±0.41* 168.58±11.48*

2.4 燒傷方對實驗性燙傷大鼠機(jī)體抗氧化防衛(wèi)系統(tǒng)SOD的影響 見表2。燒傷方組和京萬組SOD含量較模型組都升高（P＜0.05或0.01）；燒傷方組和京萬組相比，SOD含量未見明顯差異（P＞0.05）。

3 討 論

燒傷，中醫(yī)學(xué)又稱為“火燒傷”、“燙火傷”、“燙火瘡”、“湯潑火”等。其病因是火（熱）毒，機(jī)體受熱力突然襲擊而致肌膚經(jīng)絡(luò)損傷，引起氣滯血瘀，故可見肌膚紅腫熱痛；津液輸布失常則出現(xiàn)滲出腫脹；熱盛則出現(xiàn)肌膚腐爛潰瘍等癥。這與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對燒傷和局部微循環(huán)的改變，即毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血、紅細(xì)胞聚集、血流瘀滯的病理是一致的。根據(jù)燒傷的病理變化，我們應(yīng)用具有清熱解毒、燥濕止痛功效的燒傷方［3］外敷燒燙傷創(chuàng)面，療效顯著。藥理研究證實，黃柏、苦參、雄黃、甘草有清熱解毒功效［4］；黃柏、苦參、防風(fēng)、蒼術(shù)、雄黃有燥濕功效［4］；苦參、防風(fēng)、荊芥穗具有抗炎、抑菌、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜作用［4］；調(diào)和諸藥，尚可解雄黃之毒。

實驗結(jié)果顯示，燒傷方組在創(chuàng)面成痂時間、創(chuàng)面愈合時間均優(yōu)于京萬紅組。我們認(rèn)為燒傷方最有效的作用是減少燒傷創(chuàng)面液體滲出，其機(jī)理主要是使燒傷區(qū)及周圍或深層組織的毛細(xì)管收縮，通透性降低。燒傷方還使創(chuàng)面成痂快，且痂皮易干燥、韌性較好，而干燥的痂一般不易發(fā)生感染［5］。藥理研究證實，黃柏具有很廣的抗菌范圍，并使血小板不易破碎，外用還可促進(jìn)皮下滲血的吸收［6］，黃柏、苦參、防風(fēng)、雄黃可預(yù)防真菌感染［6］；蒼術(shù)含蘿卜素，維生素 B1等［6］；甘草有解毒作用，又可抗炎、抗過敏，對黏膜、潰瘍面還有保護(hù)作用［6］；荊芥穗可促進(jìn)創(chuàng)面愈合［6］。上藥協(xié)同作用，能促進(jìn)創(chuàng)面表皮增生、瘸下愈合及肉芽生長的功效，從而縮短療程。

ENK與-β內(nèi)啡肽、強(qiáng)啡肽等合稱內(nèi)源性阿片肽。ENK廣泛存在于神經(jīng)系統(tǒng)的各級水平和部位，有學(xué)者用放射免疫分析法測定人腦各部位ENK含量，發(fā)現(xiàn)在尾核、蒼白球、中腦黑質(zhì)和殼核中含量較高［7］。ENK涉及到許多生理活動的調(diào)節(jié)，如參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)痛覺信息調(diào)制和外周的傳入神經(jīng)末梢疼痛調(diào)節(jié)作用［8］。內(nèi)源性ENK主要作用于δ受體參與構(gòu)成內(nèi)源性痛覺調(diào)制系統(tǒng)，發(fā)揮鎮(zhèn)痛功能［9］，而受體主要位于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中和調(diào)控疼痛相關(guān)的解剖部位。因此，這些部位也是免疫反應(yīng)性ENK水平最高的部位。中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)是內(nèi)源性痛覺調(diào)制系統(tǒng)的重要結(jié)構(gòu)，最新研究發(fā)現(xiàn)［10］，大鼠延髓背角ENK可能通過抑制含鈣結(jié)合蛋白的傷害性感受神經(jīng)元來調(diào)節(jié)燒傷部位疼痛信息的傳遞。大鼠腦室約200 ng的ENK即可產(chǎn)生明顯的鎮(zhèn)痛效應(yīng)［11］。ENK-干擾素融合蛋白具有外周鎮(zhèn)痛作用，ENK可以通過外周阿片類受體發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。

SOD是體內(nèi)催化歧化反應(yīng)的一種抗氧化保護(hù)酶，對機(jī)體的氧化和抗氧化平衡起著重要的作用，此酶能清除超氧陰離子自由基（O2-）保護(hù)細(xì)胞免受損傷［12］。試驗結(jié)果表明，與模型組比較，燒傷方組SOD升高（P＜0.05），說明燒傷方具有明顯的抗氧化能力，使大鼠的細(xì)胞膜免受損傷，增強(qiáng)了清除和抑制氧自由基的能力。因此，燒傷方如能應(yīng)用于臨床上由超氧陰離子自由基過多引起的各種類型的燒傷患者，將有很大的應(yīng)用前景。

燒傷方由中藥組成，無副作用，成本較低，制備簡單，能促進(jìn)燒燙傷創(chuàng)面愈合、抑制水腫、對中樞調(diào)控發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用，能提高機(jī)體抗氧化防衛(wèi)系統(tǒng)能力，值得臨床推廣。

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