惡性腫瘤患者外周血T淋巴細(xì)胞CD25的測定與臨床檢驗(yàn)學(xué)研究

趙衍江 劉曉華 喻茂杰 金 哲 鮑連勇

中國醫(yī)科大學(xué)遼陽中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧遼陽 111000

惡性腫瘤患者外周血T淋巴細(xì)胞CD25的測定與臨床檢驗(yàn)學(xué)研究

趙衍江 劉曉華 喻茂杰 金 哲 鮑連勇

中國醫(yī)科大學(xué)遼陽中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧遼陽 111000

目的 探討惡性腫瘤患者T淋巴細(xì)胞CD25+水平的臨床意義。 方法 用流式細(xì)胞儀檢測70名正常人和274例惡性腫瘤患者外周血CD4+CD25+和CD8+CD25+水平。 結(jié)果 惡性腫瘤患者外周血CD4+CD25+水平比正常人高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；惡性腫瘤患者外周血CD8+CD25+水平與正常人比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。其中，食管癌、肝癌和肺癌的CD4+CD25+水平與正常人比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；腸癌、胃癌和鼻咽癌的CD4+CD25+水平與正常人比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論 惡性腫瘤患者外周血CD4+CD25水平的增高可作為惡性腫瘤免疫診斷的參考指標(biāo)。

惡性腫瘤；CD4+CD25+；CD8+CD25+；流式細(xì)胞術(shù)

CD25+是低親和性IL-2受體（IL-2R）的α鏈，表達(dá)于激活的T淋巴細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞和巨噬單核細(xì)胞表面。近年來有報(bào)道腫瘤患者外周血血清中可溶性白細(xì)胞介素2受體（sil-2R）的水平升高可作為病情判斷、監(jiān)測的免疫指標(biāo)，但對外周血淋巴細(xì)胞膜白細(xì)胞介素2受體（mil-2R）的報(bào)告結(jié)果不一[1-4]。為了解惡性腫瘤患者外周血mil-2R（CD25）活性水平的臨床意義，本文對惡性腫瘤患者外周血T淋巴細(xì)胞CD25水平進(jìn)行了檢測分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2010年1月～2011年12月經(jīng)本院病理細(xì)胞學(xué)確診的住院腫瘤患者274例，其中，食管癌100例、肝癌84例、腸癌32例、胃癌18例、肺癌18例、鼻咽癌22例；另選擇70名健康體檢者作正常對照。

1.2 方法

應(yīng)用流式細(xì)胞儀（美國BD公司，型號FAScalibur）及美國PharMingen公司的單克隆試劑，用三色法測定外周血T淋巴細(xì)胞CD25百分?jǐn)?shù)水平。取正常人、患者外周血2 mL用肝素抗凝。取20 μL抗體加入12 mm×75 mm的塑料小管底部，每例做2管，1管IgG三色陰性對照，2管CD8-FITC/CD25FE/CD4-Cychrome；每管加入50 μL的抗凝全血，充分混勻后室溫放置20 min，每管再加入2ml溶血素，充分混合后室溫放置10～15 min，1 000轉(zhuǎn)離心5 min，棄上清，加2 mL PBS液清洗，再離心，棄上清，加1%多聚甲醛0.3 mL，上機(jī)進(jìn)行熒光檢測，流式細(xì)胞儀采集淋巴細(xì)胞窗內(nèi)5 000個細(xì)胞用Cell Quest軟件分析陽性標(biāo)記細(xì)胞百分率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件包SPSS 11.0分析統(tǒng)計(jì)檢測結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 正常人與惡性腫瘤患者CD4+CD25+和CD8+CD25+抗體的表達(dá)

正常人和惡性腫瘤患者之間的CD4+CD25+抗體的表達(dá)差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但CD8+CD25+抗體的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見表1。

表1 正常人與惡性腫瘤患者CD4+CD25+和CD8+CD25+抗體的表達(dá)（±s，%）

表1 正常人與惡性腫瘤患者CD4+CD25+和CD8+CD25+抗體的表達(dá)（±s，%）

組別 例數(shù)（n） CD4+CD25+均值 CD8+CD25+均值正常人惡性腫瘤患者P值70 274 22.17±4.94 33.45±9.13<0.05 1.87±1.32 2.60±1.97>0.05

2.2 幾種惡性腫瘤患者CD4+CD25+和CDa+CD25+抗體的表達(dá)

選取例數(shù)較多的幾種惡性腫瘤，分析它們CD4+CD25+和CD8+CD25+抗體的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，食管癌、肝癌和肺癌的CD4+CD25+抗體的表達(dá)與正常人比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；腸癌、胃癌和鼻咽癌的CD4+CD25+抗體的表達(dá)與正常人比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。以上幾種惡性腫瘤患者外周血CD8+CD25+抗體表達(dá)與正常人比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 詳見表 2。

表2 幾種惡性腫瘤患者CD4+CD25+和CD8+CD25+抗體的表達(dá)（%）

3 討論

Sakaguchi S等[5]于1995年發(fā)現(xiàn)未免疫小鼠外周循環(huán)中的CD4+T細(xì)胞約10%表達(dá)CD25+，將除去了CD25+的CD4+單陽性T細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)給T細(xì)胞缺陷小鼠，能導(dǎo)致宿主各種器官特異性的自身免疫疾病。而將CD4+CD25+和CD4+單陽性T細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移，則能防止自身免疫疾病發(fā)生，說明CD4+CD25+T細(xì)胞和維持自身免疫耐受有關(guān)[6-7]。惡性腫瘤的發(fā)生及其生長過程中，機(jī)體早期對腫瘤處于無反應(yīng)狀態(tài)，這種“免疫耐受”可能和 CD4+CD25+有關(guān)[8-10]。

從本實(shí)驗(yàn)檢測的274例惡性腫瘤患者外周血CD4+CD25+的數(shù)據(jù)可以看出其含量明顯高于正常人（表1），表明惡性腫瘤患者機(jī)體對腫瘤處于無反應(yīng)免疫耐受狀態(tài)和CD4+CD25+細(xì)胞群的增加有關(guān)，支持了上述觀點(diǎn)。腸癌、胃癌、鼻咽癌的均值均高于正常人，但是經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能是因?yàn)槔龜?shù)太少，有待今后進(jìn)一步觀察。惡性腫瘤患者外周血CD8+CD25+水平與正常人沒有顯著性差異。

綜上所述，惡性腫瘤患者外周血CD4+CD25+的測定可作為惡性腫瘤免疫診斷的參考指標(biāo)之一，對于臨床了解惡性腫瘤患者的免疫活化和免疫耐受狀態(tài)有一定的幫助。

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Measurement and clinical test studies of T lymphocyte CD25 in peripheral blood for patients with malignant tumor

ZHAO Yanjiang LIU Xiaohua YU MaoJie JIN Zhe BAO Lianyong
Department of Clinical Laboratory,Liaoyang Central Hospital of China Medical University,Liaoning Province,Liaoyang 111000,China

ObjectiveTo explore the clinical significance of the level of T lymphocyte CD25+for patients with malignant tumor.MethodsThe percentage level of CD4+CD25+and CD8+CD25+in peripheral blood in 70 cases of normal people and 274 patients with malignant tumor were tested by flow cytometry instrument.ResultsThe levels of CD4+CD25+in peripheral blood of patients with malignant tumor were higher than that of the normal people,there was significant difference (P<0.05);the levels of CD8+CD25+in peripheral blood of patients with malignant tumor had no significant difference compared with the normal people(P>0.05);the levels of CD4+CD25+in the esophageal cancer,liver cancer and lung cancer had significant difference compared with normal people(P<0.05);the levels of CD4+CD25+in the colorectal cancer,stomach cancer and of nasopharyngeal carcinoma had no significant difference compared with the normal people(P>0.05).ConclusionThe increase of the levels of CD4+CD25+in peripheral blood for patients with malignant tumor can be used as the reference index for the diagnosis of malignant tumor immune.

Malignant tumor;CD4+CD25+;CD8+CD25+;Flow cytometry test

R446.6

A

1674-4721（2012）11（b）-0099-02

趙衍江（1971-），男，副主任檢驗(yàn)師，本科學(xué)歷，醫(yī)學(xué)學(xué)士，1995年7月、2003年7月先后畢業(yè)于大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)系和大連醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)，現(xiàn)任中國醫(yī)科大學(xué)遼陽中心醫(yī)院檢驗(yàn)科副主任，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的臨床與研究工作。

2012-08-08 本文編輯：陳 俊）