惡性腫瘤患者外周血T淋巴細胞CD25的測定與臨床檢驗學研究

趙衍江 劉曉華 喻茂杰 金 哲 鮑連勇

中國醫科大學遼陽中心醫院檢驗科，遼寧遼陽 111000

惡性腫瘤患者外周血T淋巴細胞CD25的測定與臨床檢驗學研究

趙衍江 劉曉華 喻茂杰 金 哲 鮑連勇

中國醫科大學遼陽中心醫院檢驗科，遼寧遼陽 111000

目的 探討惡性腫瘤患者T淋巴細胞CD25+水平的臨床意義。 方法 用流式細胞儀檢測70名正常人和274例惡性腫瘤患者外周血CD4+CD25+和CD8+CD25+水平。 結果 惡性腫瘤患者外周血CD4+CD25+水平比正常人高，差異有統計學意義（P<0.05）；惡性腫瘤患者外周血CD8+CD25+水平與正常人比較，差異無統計學意義（P>0.05）。其中，食管癌、肝癌和肺癌的CD4+CD25+水平與正常人比較，差異有統計學意義（P<0.05）；腸癌、胃癌和鼻咽癌的CD4+CD25+水平與正常人比較，差異無統計學意義（P>0.05）。 結論 惡性腫瘤患者外周血CD4+CD25水平的增高可作為惡性腫瘤免疫診斷的參考指標。

惡性腫瘤；CD4+CD25+；CD8+CD25+；流式細胞術

CD25+是低親和性IL-2受體（IL-2R）的α鏈，表達于激活的T淋巴細胞、B細胞、NK細胞和巨噬單核細胞表面。近年來有報道腫瘤患者外周血血清中可溶性白細胞介素2受體（sil-2R）的水平升高可作為病情判斷、監測的免疫指標，但對外周血淋巴細胞膜白細胞介素2受體（mil-2R）的報告結果不一[1-4]。為了解惡性腫瘤患者外周血mil-2R（CD25）活性水平的臨床意義，本文對惡性腫瘤患者外周血T淋巴細胞CD25水平進行了檢測分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2010年1月～2011年12月經本院病理細胞學確診的住院腫瘤患者274例，其中，食管癌100例、肝癌84例、腸癌32例、胃癌18例、肺癌18例、鼻咽癌22例；另選擇70名健康體檢者作正常對照。

1.2 方法

應用流式細胞儀（美國BD公司，型號FAScalibur）及美國PharMingen公司的單克隆試劑，用三色法測定外周血T淋巴細胞CD25百分數水平。取正常人、患者外周血2 mL用肝素抗凝。取20 μL抗體加入12 mm×75 mm的塑料小管底部，每例做2管，1管IgG三色陰性對照，2管CD8-FITC/CD25FE/CD4-Cychrome；每管加入50 μL的抗凝全血，充分混勻后室溫放置20 min，每管再加入2ml溶血素，充分混合后室溫放置10～15 min，1 000轉離心5 min，棄上清，加2 mL PBS液清洗，再離心，棄上清，加1%多聚甲醛0.3 mL，上機進行熒光檢測，流式細胞儀采集淋巴細胞窗內5 000個細胞用Cell Quest軟件分析陽性標記細胞百分率。

1.3 統計學方法

采用統計軟件包SPSS 11.0分析統計檢測結果。

2 結果

2.1 正常人與惡性腫瘤患者CD4+CD25+和CD8+CD25+抗體的表達

正常人和惡性腫瘤患者之間的CD4+CD25+抗體的表達差異統計學意義（P<0.05），但CD8+CD25+抗體的表達差異無統計學意義（P>0.05）。詳見表1。

表1 正常人與惡性腫瘤患者CD4+CD25+和CD8+CD25+抗體的表達（±s，%）

表1 正常人與惡性腫瘤患者CD4+CD25+和CD8+CD25+抗體的表達（±s，%）

組別 例數（n） CD4+CD25+均值 CD8+CD25+均值正常人惡性腫瘤患者P值70 274 22.17±4.94 33.45±9.13<0.05 1.87±1.32 2.60±1.97>0.05

2.2 幾種惡性腫瘤患者CD4+CD25+和CDa+CD25+抗體的表達

選取例數較多的幾種惡性腫瘤，分析它們CD4+CD25+和CD8+CD25+抗體的表達情況，結果顯示，食管癌、肝癌和肺癌的CD4+CD25+抗體的表達與正常人比較，差異有統計學意義（P<0.05）；腸癌、胃癌和鼻咽癌的CD4+CD25+抗體的表達與正常人比較，差異無統計學意義（P>0.05）。以上幾種惡性腫瘤患者外周血CD8+CD25+抗體表達與正常人比較，差異無統計學意義（P>0.05）。 詳見表 2。

表2 幾種惡性腫瘤患者CD4+CD25+和CD8+CD25+抗體的表達（%）

3 討論

Sakaguchi S等[5]于1995年發現未免疫小鼠外周循環中的CD4+T細胞約10%表達CD25+，將除去了CD25+的CD4+單陽性T細胞過繼轉給T細胞缺陷小鼠，能導致宿主各種器官特異性的自身免疫疾病。而將CD4+CD25+和CD4+單陽性T細胞過繼轉移，則能防止自身免疫疾病發生，說明CD4+CD25+T細胞和維持自身免疫耐受有關[6-7]。惡性腫瘤的發生及其生長過程中，機體早期對腫瘤處于無反應狀態，這種“免疫耐受”可能和 CD4+CD25+有關[8-10]。

從本實驗檢測的274例惡性腫瘤患者外周血CD4+CD25+的數據可以看出其含量明顯高于正常人（表1），表明惡性腫瘤患者機體對腫瘤處于無反應免疫耐受狀態和CD4+CD25+細胞群的增加有關，支持了上述觀點。腸癌、胃癌、鼻咽癌的均值均高于正常人，但是經統計學處理其差異無統計學意義，可能是因為例數太少，有待今后進一步觀察。惡性腫瘤患者外周血CD8+CD25+水平與正常人沒有顯著性差異。

綜上所述，惡性腫瘤患者外周血CD4+CD25+的測定可作為惡性腫瘤免疫診斷的參考指標之一，對于臨床了解惡性腫瘤患者的免疫活化和免疫耐受狀態有一定的幫助。

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[5]Sakaguchi S，Sakaguchi N，Asano M，et al.Immunologic self-tolerance maintained by T cells expressing IL-2 receptor a-chains （CD25）.Breackdown of single mechanism of self-tolerance causes various autoimmune diseases[J].J Immunol，2007，172：1151-1164.

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Measurement and clinical test studies of T lymphocyte CD25 in peripheral blood for patients with malignant tumor

ZHAO Yanjiang LIU Xiaohua YU MaoJie JIN Zhe BAO Lianyong
Department of Clinical Laboratory,Liaoyang Central Hospital of China Medical University,Liaoning Province,Liaoyang 111000,China

ObjectiveTo explore the clinical significance of the level of T lymphocyte CD25+for patients with malignant tumor.MethodsThe percentage level of CD4+CD25+and CD8+CD25+in peripheral blood in 70 cases of normal people and 274 patients with malignant tumor were tested by flow cytometry instrument.ResultsThe levels of CD4+CD25+in peripheral blood of patients with malignant tumor were higher than that of the normal people,there was significant difference (P<0.05);the levels of CD8+CD25+in peripheral blood of patients with malignant tumor had no significant difference compared with the normal people(P>0.05);the levels of CD4+CD25+in the esophageal cancer,liver cancer and lung cancer had significant difference compared with normal people(P<0.05);the levels of CD4+CD25+in the colorectal cancer,stomach cancer and of nasopharyngeal carcinoma had no significant difference compared with the normal people(P>0.05).ConclusionThe increase of the levels of CD4+CD25+in peripheral blood for patients with malignant tumor can be used as the reference index for the diagnosis of malignant tumor immune.

Malignant tumor;CD4+CD25+;CD8+CD25+;Flow cytometry test

R446.6

A

1674-4721（2012）11（b）-0099-02

趙衍江（1971-），男，副主任檢驗師，本科學歷，醫學學士，1995年7月、2003年7月先后畢業于大連大學醫學院檢驗系和大連醫科大學臨床醫學專業，現任中國醫科大學遼陽中心醫院檢驗科副主任，主要從事醫學檢驗的臨床與研究工作。

2012-08-08 本文編輯：陳 俊）