胃黏膜活檢真菌檢測方法及臨床病理研究

張東生 王平凡▲ 薛迪強

1.蘭州市第二人民醫院病理科，甘肅蘭州 730046；2.蘭州市第二人民醫院消化科，甘肅蘭州 730046

胃黏膜活檢真菌檢測方法及臨床病理研究

張東生1王平凡1▲薛迪強2

1.蘭州市第二人民醫院病理科，甘肅蘭州 730046；2.蘭州市第二人民醫院消化科，甘肅蘭州 730046

臨床纖維胃鏡活檢標本經石蠟切片后，除進行常規的蘇木素-伊紅染色（HE染色）外，聯合應用PAS染色和Giemsa染色，真菌的檢出明顯增多。這兩種特殊染色方法對檢測胃黏膜活檢真菌感染情況有重要的臨床病理意義。

真菌；特殊染色；胃潰瘍；胃癌

胃內真菌感染是指胃內常見的念珠菌、毛霉菌、曲霉菌等感染引起的黏膜炎癥，其中最常見的是真菌性潰瘍和潰瘍型胃癌伴真菌感染。胃黏膜真菌感染并不少見，往往被忽視。近年來，胃黏膜真菌感染時有報道[1-3]，呈逐年上升趨勢。真菌性胃潰瘍酷似潰瘍型胃癌，潰瘍巨大，壞死層增厚，纖維胃鏡下很難對其鑒別診斷，臨床醫師經常誤診為胃癌[4-5]。病因控制和抗酸治療后，潰瘍久治不愈[6]，形成難治性胃潰瘍。究其原因，是消化科醫師和病理科醫師對難治性胃潰瘍病因重視不夠，忽視了真菌感染這一重要因素。本文探討胃黏膜常規石蠟切片、HE染色及特殊染色在真菌檢測中的意義和顯微鏡下真菌的形態。

1 真菌檢測方法及意義

1.1 切片HE染色光鏡觀察（常規染色）

胃黏膜真菌感染多在黏膜表面的滲出層或壞死層，背景污穢，難以辨認，尤其是毛霉菌和曲霉菌的菌絲往往被誤認為壞死脫落物質。只有念珠菌因其粗大的假菌絲和芽生孢子容易檢出。另外，活檢標本小、含真菌量少、一些真菌在HE染色切片中本身不易著色，這都是真菌漏檢的原因。因此，單單依靠HE染色診斷真菌感染是不夠的。

1.2 PAS染色光鏡觀察（特殊染色）

PAS染色法對真菌著色有一定特異性，切片中真菌鮮亮，是理想的真菌染色方法之一。真菌菌絲壁著紅色，菌絲不完整，呈節段性[7]。芽生孢子紅色，二端鈍圓，橫切面呈球形，有明顯折光性。

1.3 Giemsa染色光鏡觀察（特殊染色）

當HE、PAS染色后，病理醫師鏡檢仍不能確認是否有真菌感染時，Giemsa染色可以作為一種有效的補充染色。Giemsa染色對真菌著色清晰，菌絲和芽生孢子均呈藍色。

2 真菌組織切片形態

2.1 念珠菌

在組織切片中，念珠菌主要位于黏膜表面的滲出及壞死組織內，HE染色尚能辨認芽生孢子和假菌絲（圖1）。芽生孢子在10×40倍視野下可見兩種形態：一種是較大的孢子，球形或略呈卵圓形，體積相當于中性粒細胞分葉核的一個片段，直徑 3～5 μm，蘇木素濃染，染色細膩；另一種芽生孢子形態較小，圓形，紫紅色，直徑2～3 μm，中心可見淡染折光性強的空染區。在10×100倍光鏡下，芽生孢子清晰，厚膜，中心可見淡染小泡。假菌絲由芽管延長形成，細而直，像一根透明膠管，有分隔，少部分有分枝。HE染色切片呈淺藍色。孢子和假菌絲PAS染色呈鮮亮的玫瑰紅色 （圖2），Giemsa染色呈天藍色。

2.2 毛霉菌

HE染色切片中，毛霉菌比念珠菌粗大，長短不一，壁厚，直徑為 5～6 μm，多數情況下為 10～15 μm，菌絲無隔，如形成皺褶，易誤認為分隔，分支少而不規則。毛霉菌的特征性結構除無隔的大菌絲外，還能形成孢子囊，但HE染色切片很少見。毛霉菌HE染色呈淺藍色，比細胞核著色略淺，易辨認。PAS染色切片呈玫瑰紅色（圖3），Giemsa染色粗大菌絲藍染。

2.3 曲霉菌

HE染色切片，曲霉菌菌絲粗細均勻，直徑為2～7 μm，有隔，淡藍色，有時著色較淺，不易辨認。曲霉菌菌絲易變形，可呈小球或小囊狀，聚集成群生長，也可散在生長，呈深藍色，易被誤認為是球菌。PAS染色清晰可辨（圖4），菌絲呈紅色，小球或小囊呈紫紅色；Giemsa染色呈藍色。

3 胃黏膜真菌感染的意義

3.1 重視真菌感染

真菌廣泛存在于自然界，是主要的條件致病感染菌之一。機體抵抗力下降或胃黏膜屏障作用減弱時[8]，均可引起胃黏膜真菌感染。胃黏膜真菌感染尤以慢性消化性潰瘍多見，表面污濁，邊緣不整；纖維胃鏡下可見潰瘍擴大、加深，潰瘍面凹凸不平，表面污穢厚苔，周圍黏膜結節狀隆起，組織松脆易出血，為其典型特征，與潰瘍型胃癌的形態表現頗為相似[9]，X線甚至胃鏡肉眼檢查會誤認為癌，因而在胃黏膜活檢病理診斷時，須警惕真菌感染[10]。真菌感染的診斷目前仍然根據病理檢查，在病灶內找到真菌菌絲[11]。采用方法主要為HE、PAS、Giemsa染色。單獨依靠HE染色易造成漏診。對胃潰瘍病臨床醫師除考慮消化性胃潰瘍和胃癌外，應高度重視真菌性胃潰瘍的存在，減少誤診率。

3.2 胃潰瘍與真菌的關系

胃黏膜真菌感染是否與胃潰瘍有關，取決于胃黏膜上皮的完整性。胃黏膜始終處于細胞凋亡與增殖的動態平衡中。當真菌感染時，可能誘發胃黏膜上皮細胞過度增殖和凋亡，當凋亡的數目大于增殖的數目，增殖細胞又不能及時彌補凋亡細胞時，會導致潰瘍形成[12]。胃潰瘍形成后，缺損的黏膜層保護屏障不完整，局部免疫力下降，真菌進入胃內后，在潰瘍滲出及壞死物中生長、繁殖。此時，真菌的代謝產物和酶加速潰瘍的發展，使潰瘍進一步擴大、加深，增加了出血及胃穿孔的機會。臨床上難治性胃潰瘍并不少見。潘國宗等[13]對難治性消化性潰瘍的定義為：經用標準量的H2受體拮抗劑治療后，曲霉菌菌絲粗細均勻，體積較小，有隔，淡藍色，著色較淺；經胃鏡確定，胃潰瘍在12周末不愈合者。難治性胃潰瘍病因復雜，除幽門螺桿菌感染外，真菌感染也是其病因之一。真菌感染引發的胃潰瘍，一旦診斷明確，治療效果非常明顯，常用的藥物有克霉唑（三苯甲咪唑）、制霉菌素等，療程2～4周[14]，治療后經胃鏡復查及病理活檢診斷，潰瘍可完全愈合。

3.3 胃癌與真菌的相關性

從慢性胃炎到最終發展為胃癌的演變過程中，各種致病因子可能單獨或協同作用于不同的階段，微生物感染是其中一個重要因素[15]。幽門螺桿菌感染引起胃潰瘍、胃癌已普遍形成共識，真菌在胃潰瘍、胃癌的發生中同樣不能忽視。當真菌感染胃黏膜時，可能產生一些酶和毒素，造成胃黏膜上皮細胞過度增殖，通常被視為胃癌發生危險性增加的重要生物標記[16]。胃黏膜上皮細胞始終處于凋亡與增殖的動態平衡中，細胞過度凋亡同樣可造成上皮細胞癌變。因為過度凋亡可刺激細胞不斷增殖，許多致癌因子誘發癌腫的早期都能引起細胞凋亡增加[17]。因此，胃潰瘍真菌感染可增加胃癌的發生機會，故胃癌的發生與真菌感染有一定相關性。

4 小結

胃鏡活檢檢查對真菌性胃潰瘍和潰瘍型胃癌的鑒別診斷非常重要，是唯一的確診方法[18]。雖然真菌在病理組織切片HE染色中能夠被檢出，但其結果不夠理想，易造成漏診。所以，PAS染色、Giemsa染色是非常有用的補充方法，對真菌的診斷意義重大。另外，在分子生物學方面已有學者開始注意用PCR技術來輔助診斷真菌感染[19]。胃鏡涂片和真菌分離培養等技術也可嘗試。

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Fungal detection methods and clinical pathological study in gastric mucosa biopsy

ZHANG Dongsheng1WANG Pingfan1▲XUE Diqiang2
1.Department of Pathology,Second People′s Hospital of Lanzhou City in Gansu Province,Lanzhou 730000,China;2.Department of Gastroenterology,Second People′s Hospital of Lanzhou City in Gansu Province,Lanzhou 730000,China

Fungal detection of paraffin sections of biopsy specimen collected by fibergastroscope increased obviously by the combined application of PAS,Giemsa staining and conventional hematoxylin-eosin staining(HE stain).The two special staining methods have important clinical and pathology significance in detection of fungal infection in gastric mucosa biopsy.

Fungi;Special staining;Gastric ulcer;Gastric cancer

R446.8

A

1674-4721（2012）11（b）-0015-03

張東生（1959-），男，副主任醫師，甘肅省病理專業委員會副主任委員；研究方向：消化系統疾病的病理研究。

▲通訊作者

2012-08-20 本文編輯：陳 俊）