HPLC法測定蒙藥止吐六味散中甘草酸的含量

那順布和 包同力嘎

(內蒙古民族大學，內蒙古通遼028007)

常用蒙藥止吐六味散由甘草、大米、柿子、蔓荊子、小茴香、芫荽果組成的散劑。具有止吐功能;主要用于嘔吐，妊娠嘔吐等病癥。臨床療效良好。收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準·蒙藥分冊》〔1〕。其藥品標準草案仍缺含量測定項，為補充藥品標準草案，對君藥甘草以其含有效成分甘草酸為典型，采用高效液相色譜法對蒙藥止吐六味散進行含量測定研究，為該藥的深入研究提供試驗方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 :LC－10AT高效液相色譜儀(日本島津)，SPD—10AVP檢測器(日本島津)，N3000色譜工作站(浙江大學智能信息研究所);AUY120電子天平(max2208/82g d=0.1mg/0.01mg，日本島津);KQ －100 型超聲波清洗器(昆山);DiamonsilC18色譜柱(250mm ×4.6mm，5μm，迪馬公司)。

1.2 試藥:蒙藥止吐六味散由內蒙古蒙藥股份有限公司(批號120622)、內蒙古庫倫蒙藥廠(批號 120716)、烏蘭浩特中蒙制藥有限公司(批號120310)提供。甘草酸單銨鹽對照品(批號110731－200615，供含量測定用)，由中國藥品生物制品檢定所提供。甲醇為色譜純;水為高純水;其它所用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件〔2－6〕:色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Diamonsil C18 5μm 4.6mm ×250mm);流動相:甲醇－0.2mol/L醋酸銨溶液 －冰醋酸(67:33:1);檢測波長:250nm;流速:1.0ml/min;柱溫:30℃。在該色譜條件下，樣品中甘草酸可達基線分離，其它成分對測定無干擾，理論板數按甘草酸峰計算應不低于2000。

2.2 試驗溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備:取甘草酸單銨鹽對照品4.05mg，精密稱定，置10ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取0.5ml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含甘草酸單銨鹽0.2069mg，折合甘草酸0.2025mg)。

2.2.2 供試品溶液的制備:取樣品粉末約1.2g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入流動相50ml，超聲處理(功率250W，頻率40KHz)30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 缺甘草陰性對照品溶液的制備:取缺甘草陰性對照品粉末約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，照上述2.2.2項下方法制備，即得。

2.3 線性關系及其工作范圍的考察:精密吸取甘草酸對照品溶液 2.5、5.0、7.5、10.0、12.5μ，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積(A)。并以峰面積(Y)對甘草酸的進樣量(X)進行線性回歸，得回歸方程:y=37004 x+439.1，相關系數r=0.999 8。結果表明，甘草酸對照品進樣量在0.506 5～3.543 8μ范圍內，與峰面積具有良好的線性關系，相關性顯著。

2.4 精密度試驗:精密吸取同一份供試品溶液10μ，在上述色譜條件下依法重復進樣5次，記錄色譜圖，測定其峰面積積分值。結果其RSD為1.26%，表明精密度良好。

2.5 穩定性試驗:同一份供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10小時，精密吸取10μ，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積積分值。結果其RSD為1.13%，表明供試品溶液在10小時內測定穩定性良好。

2.6 重復性試驗:精密稱取同一批供試品，按上述供試品溶液的制備方法制備供試品溶液6份，分別精密吸取10?l，注入液相色譜儀，測定其峰面積值。結果甘草酸的RSD值為0.96%。表明該含量測定方法具有良好的重復性。

2.7 回收率試驗:取已知含量的樣品約0.6g，計6份，精密稱定，分別加入一定量的甘草酸對照品溶液，照供試品溶液制備方法制得供試品溶液后進樣測定峰面積，并計算回收率，結果甘草酸平均回收率為98.63%、RSD為0.96%。

2.8 樣品測定:取止吐六味散約1.2g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入流動相50ml，超聲處理(功率250W，頻率40KHz)30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定。精密吸取供試品溶液10?l，注入液相色譜儀，測定其峰面積值，計算甘草酸(C42H62O16)含量。結果表明止吐六味散中甘草酸的平均含量不低于0.33%，其結果見表2。

表1 止吐六味散中甘草酸的含量(n=5)

3 小結

選用HPLC法對止吐六味散中甘草所含甘草酸的含量進行測定研究。結果表明，該方法精密度高、穩定性好、重復性佳、結果準確。甘草酸的平均回收率為98.63%，RSD為0.96%(n=6)，高效液相色譜法測定本品中甘草酸含量的方法可用于止吐六味散質量的定量控制。

〔1〕中華人民共和國衛生部.中華人民共和國衛生部藥品標準·蒙藥分冊〔S〕.北京:1998，65.

〔2〕國家藥典委員會.中華人民共和國藥典·一部〔S〕.北京:化學工業出版社，2005，59.

〔3〕史桂蘭，胡志浩.甘草酸作用及臨床應用研究〔J〕.天津藥學，2001，13(1):10 ～12

〔4〕黃能惠，李誠秀，羅俊，等.甘草酸銨的藥理作用〔J〕.貴陽醫學院學報，1995，20(1):26

〔5〕惠壽年，董阿玲.國內對甘草酸的化學成分研究進展〔J〕.中草藥雜志，1999，30(4):313