電針療法對家兔血清及組織中自由基代謝的動態(tài)影響

張慶德，王德海，程國富，胡薛英，谷長勤

（華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢430070）

自由基作為機(jī)體代謝過程中產(chǎn)生的一類具有氧化活性的離子，對組織細(xì)胞有很強(qiáng)的攻擊性［1］，在機(jī)體自由基產(chǎn)生與消除失衡的情況下，過量的氧自由基通過攻擊DNA雙鏈而致其斷裂或交聯(lián)，進(jìn)而破壞了細(xì)胞結(jié)構(gòu)或其自身的各種成分，引起膜功能減退，蛋白質(zhì)和酶變性，最終導(dǎo)致細(xì)胞生長失控，從而導(dǎo)致臨床上很多疾病的發(fā)生［2］；同時臨床上放療和很多化療藥物作用的內(nèi)在機(jī)制也是刺激機(jī)體產(chǎn)生大量的自由基，進(jìn)而導(dǎo)致不可逆的組織和細(xì)胞變化來達(dá)到治療的目的。

足三里和關(guān)元穴是防病治病和抗衰老的重要穴位之一，素有“保健穴”和“長壽穴”之稱。足三里穴作為機(jī)體全身的保健要穴，是足陽明胃經(jīng)要穴，回陽九針穴之一，針刺該穴可起到補(bǔ)脾健胃，消除疲勞，增強(qiáng)免疫功能的作用，使機(jī)體強(qiáng)壯［3］；關(guān)元穴又名結(jié)交、次門、大中極等，系小腸之募穴，任脈和足三陰經(jīng)之會穴，位于任脈上，為培元固本之要穴，為歷代強(qiáng)壯保健要穴，具有補(bǔ)腎陽壯真火的作用［4］。因此針刺兩穴位對疾病的治療作用已受到國內(nèi)外醫(yī)界的普遍重視和大力推廣，但前期的試驗研究多從免疫、內(nèi)分泌和臨床功效等方面來論述［5－6］，本試驗旨從抗氧化物質(zhì)的角度出發(fā)，研究針刺是否能調(diào)控機(jī)體的抗氧化系統(tǒng)，進(jìn)而探討針刺這兩個穴位是否可調(diào)節(jié)機(jī)體陰陽平衡，達(dá)到防病保健和抗衰老的效果［7］。因此本試驗通過電針針刺家兔足三里和關(guān)元兩穴位，對家兔血清及組織中抗氧化物質(zhì)超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量進(jìn)行動態(tài)測定，研究針刺對家兔體內(nèi)抗氧化物質(zhì)含量變化的影響，從而對針刺調(diào)控機(jī)體的機(jī)制進(jìn)行自由基方面的分析。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及分組 健康家兔32只，普通級，雌雄不限，體重2.5～3.0kg，6～8月齡，由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)實驗動物中心提供。32只健康家兔隨機(jī)分為針刺組和對照組兩組，每組16只，分開單獨飼養(yǎng)，自由飲水采食。

1.2 儀器設(shè)備 721型分光光度計，上海第三分析儀器廠，00000143型；電針儀，汕頭市醫(yī)用設(shè)備廠，6805B型。

1.3 試劑及藥品 抗氧化物質(zhì)體外診斷試劑盒：SOD測定測試盒（批號：20100309）、CAT測定試劑盒（20100101）、MDA 測定試劑盒（批號：20100301），購自南京建成生物工程研究所，試驗操作嚴(yán)格依據(jù)說明書進(jìn)行。

1.4 試驗方法 根據(jù)預(yù)試驗的結(jié)果進(jìn)行試驗設(shè)計：對試驗組家兔的足三里和關(guān)元兩穴位進(jìn)行電針針刺，以捻針手法施針，針刺入足三里穴的深度約為5～7mm，刺入關(guān)元穴的深度約為3～5mm，得氣后針柄接電針治療儀，電壓6V，頻率1.6～2Hz，輸

出強(qiáng)度1～2mA，疏密波，以局部肌肉輕微顫動為度，每次留針25min。試驗組家兔每天針刺1次，連續(xù)5d作為第一療程，間斷2d后重復(fù)第一療程的針刺操作，對照組家兔僅予常規(guī)飼養(yǎng)，不作任何特殊處理。在試驗的第0、1、3、5、7、9、11、13天對試驗組和對照組隨機(jī)抽取的8只家兔進(jìn)行耳外緣靜脈采血取血清，立即進(jìn)行血清中SOD、CAT和MDA的動態(tài)檢測。在試驗第13天將所有家兔頸靜脈放血處死，分別取其心、肝、腎和肌肉，用勻漿器搗碎后用3 500r／min進(jìn)行離心，分別做成1%和10%勻漿，立即進(jìn)行組織中SOD活性、CAT活性和MDA含量的檢測。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 以Excel統(tǒng)計軟件對所測數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，并用t檢驗分析試驗組和對照組均數(shù)間差異的顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 電針針刺對家兔心、肝、腎和肌肉組織中SOD、CAT活性以及MDA含量的影響 見表1。

表1 心、肝、腎和肌肉組織中SOD、CAT活性以及MDA含量（n＝8）

由表1可見：電針針刺足三里、關(guān)元兩穴位13d后，與對照組相比，試驗組家兔的SOD在心、肝、腎和肌肉組織中的活性都有增高，但是增高的幅度有所差異，其中在心臟中活性增高最大，差異極顯著（P＜0.01），其次為肝臟和腎臟，差異顯著（P＜0.05），在肌肉組織中未見明顯變化；試驗組家兔的MDA在心、肝、腎和肌肉組織中的含量都有所下降，下降的幅度也有所不同，其中在心臟和肝臟中含量降低最多，差異極顯著（P＜0.01），其次為腎臟，差異顯著（P＜0.05），肌肉中的 MDA含量則無明顯差異；試驗組家兔的CAT活性在心、肝、腎和肌肉組織都有不同程度的增高，其中在心臟和腎臟中增高極顯著（P＜0.01），在肝臟和肌肉中增高顯著（P＜0.05）。

2.2 電針針刺對家兔血清中SOD、MDA和CAT活性的動態(tài)影響 從表2可見：電針針刺足三里、關(guān)元兩穴位后，試驗組家兔血清中的SOD活性總體呈增高趨勢，其中第0～3天逐漸增高，在試驗后第5天和第7天則逐漸下降，隨后第7～11天又逐漸增高，并在試驗的第11天達(dá)到最高值，第13天有所下降。在整個試驗周期內(nèi)，試驗組家兔血清中的SOD活性在試驗后的第1、3、5、9、11天與對照組相比差距極顯著（P＜0.01），在試驗后第13天則表現(xiàn)為差異顯著（P＜0.05）。

試驗組家兔血清中的MDA含量總體呈下降趨勢，但下降沒有規(guī)律性。在整個試驗周期內(nèi)，試驗組家兔血清中的MDA含量在試驗后第5天與對照組相比差異極顯著（P＜0.01），在試驗后第13天下降顯著（P＜0.05）。

試驗組家兔血清中的CAT活性在試驗后第0～3天呈緩慢增高趨勢，隨后則在試驗后第3～7天逐漸下降，而在試驗后第9天達(dá)到試驗的最高值后直到試驗結(jié)束都呈下降趨勢。在整個試驗周期內(nèi)，試驗組家兔血清中的CAT活性在試驗后第3、9天與對照組相比差異極顯著（P＜0.01），在試驗后第5、11天則差異顯著（P＜0.05）。

表2 針刺對家兔血清中SOD、MDA和CAT活性的動態(tài)影響（n＝8）

3 討論

SOD是機(jī)體內(nèi)主要的抗氧化酶，被稱為機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的第一道防線，SOD能有效地清除并終止超氧陰離子（O－2）自由基引發(fā)的連鎖反應(yīng)防止脂質(zhì)過氧化物的形成，保護(hù)細(xì)胞免受損傷，可催化歧化反應(yīng)而使其淬滅阻斷脂質(zhì)過氧化連鎖反應(yīng)，保護(hù)機(jī)體免受自由基損傷；同時SOD通過上述作用使對超氧陰離子自由基敏感的CAT和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH－Px）免受損害，因此SOD在自由基介導(dǎo)的各項損傷中都具有重要的作用［8－9］。而在本試驗中，通過電針針刺足三里和關(guān)元兩穴位后，血清、心、肝、腎和肌肉中SOD活性都有不同程度的增高，尤其是肝臟中明顯增高，由此可以推斷針刺此兩穴位可以提高血清、心、肝、腎和肌肉中SOD活性，增強(qiáng)機(jī)體清除自由基的能力，通過抗氧化實現(xiàn)對心、肝和腎等組織的保護(hù)作用。

CAT存在于紅細(xì)胞和其他組織細(xì)胞過氧化物體內(nèi)，其主要生理作用是清除過氧化體中羥基乙酸氧化酶與尿酸氧化酶等催化反應(yīng)產(chǎn)生的過氧化氫（H2O2），將對生物體有毒害作用的 H2O2分解為H2O和O2，使得H2O2不至與O－2在螯合物作用下反應(yīng)生成非常有害的羥自由基（－OH），以減少自由基和過氧化脂質(zhì)的形成，因而減少過氧化物對機(jī)體的損害在阻斷自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中起著關(guān)鍵作用，因此CAT活力的高低可以直接影響機(jī)體的抗氧化能力和健康狀況［10］。本試驗測定了血清、心、腎、肝和肌肉組織中CAT的活性水平，結(jié)果顯示，電針針刺足三里和關(guān)元兩穴位后，CAT的活性在所測組織中有較為顯著的增高趨勢。由此可以說明，針刺足三里和關(guān)元兩穴位能顯著提高機(jī)體血清、心、腎、肝和肌肉組織中CAT活性，抑制脂質(zhì)過氧化的發(fā)生，從而起到減少過氧化物對機(jī)體損害的作用，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力和健康水平。

而機(jī)體MDA的含量常?？煞从硻C(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接地反映出細(xì)胞損傷的程度。血清中MDA含量在體內(nèi)較穩(wěn)定，是生物膜磷酯中多不飽和脂肪酸受自由基攻擊而產(chǎn)生的終產(chǎn)物之一。MDA是介導(dǎo)自由基損傷的重要物質(zhì)，可與蛋白質(zhì)、核酸、堿基、生物胺磷脂等含有氨基的物質(zhì)作用而發(fā)生交聯(lián)，導(dǎo)致生物大分子及生物膜結(jié)構(gòu)的損傷。檢測MDA含量可間接反映氧自由基對機(jī)體的損害程度以及機(jī)體的防御能力，為臨床的診斷和治療提供參考價值［8－9］。有研究表明，MDA是脂質(zhì)過氧化作用的代謝產(chǎn)物，在衰老人群大腦中檢測到其濃度有明顯的增高，說明氧化應(yīng)激與衰老具有相關(guān)性。本試驗結(jié)果表明，雖然MDA含量在血清、心、肝、腎和肌肉組織中沒有太明顯的變化規(guī)律，但是總體上是呈下降趨勢的，尤其是心臟和肝臟中下降極為顯著。因而推斷電針針刺足三里和關(guān)元兩穴位可以抑制血清、心、肝、腎和肌肉組織中MDA形成，保護(hù)細(xì)胞膜免受自由基攻擊，從而在遏制腫瘤、抗衰老以及保護(hù)心、肝等臟腑方面起到一定的改善作用。

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