咳喘穴位貼片成型工藝研究及透皮特性研究

楊立平 鄧桂明 楊廣民

咳喘穴位貼片是由湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院臨床應(yīng)用十余年的貼散經(jīng)劑改而成的外用中藥新制劑，由麻黃、丁香、肉桂等組成，療效可靠深受廣大患者歡迎，是治療咳喘病標本兼顧的獨特療法。但傳統(tǒng)的咳喘穴位貼散是純生藥原粉，存在劑型落后等缺點，對其進行劑型改進。采用超臨界CO2萃取技術(shù)提取有效部位的工藝研究［1］，研制了咳喘穴位貼片，并篩選了該貼片透皮促進劑為1%氮酮［2］，進行了2種劑型的體外透皮特性比較研究［3］。對咳喘穴位貼片的體外透皮吸收［4］和釋放性［5］進行了研究，本文對該穴位貼片的成型性及透皮特性進行了研究，為開發(fā)中藥新劑型提供依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 試藥 羊毛脂 (上海嘉定華亭羊毛脂廠)、黃凡士林(包頭黃河石化有限責任公司)氮酮(化學純，天津市科密歐化學試劑開發(fā)中心)、單硬脂酸甘油酯(上海三浦化工有限公司)、硬脂酸(天津市東麗區(qū)天大化學試劑廠)、甘油(河南焦作市化工三廠)、司盤-60(天津市科密歐化學試劑開發(fā)中心)、司盤-20(清明化工廠)、司盤-80(天津市科密歐化學試劑開發(fā)中心)、吐溫-80(天津市光復精細化工研究所)、海藻酸鈉(中國醫(yī)藥(集團)上海化學試劑公司 )等均為分析純，藥材購于湖南振興中藥飲片有限公司，水為重蒸餾水。

1.2 儀器 DK-S22型電熱恒溫水浴鍋(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)、AR2140型Adenturer電子分析天平(感量:0.1 mg，奧豪斯國際貿(mào)易上海有限公司)、DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器 (鞏義市英峪予華儀器廠)Franz擴散池(自制)|全玻璃注射器(10 ml，上海注射器廠)、高效液相色譜儀(Agilent1100，二極管陣列檢測器(DAD)檢測器)、超聲波清洗器(昆山市淀山湖檢測儀器廠)。

表1 處方設(shè)計

表2 處方設(shè)計結(jié)果

2 方法與結(jié)果

2.1 成型性考察

2.1.1 提取物制備 將藥材粉碎成粉，采用CO2超臨界提取法提取有效成分。萃取條件為:萃取壓力24 MPa、萃取溫度45℃、分離釜Ⅰ壓力6 MPa、分離釜Ⅰ溫度55℃、分離釜Ⅱ壓力6 MPa、分離釜Ⅱ溫度 40℃、分離時間2 h、粒度40目、夾帶劑:75%乙醇，用量25%。

2.1.2 處方設(shè)計 作者對各種基質(zhì)加藥物提取物制成的產(chǎn)品成型性進行考察，記錄如表1，結(jié)果見表2。

表3 因素水平表

通過以上實驗發(fā)現(xiàn)油脂性基質(zhì)的成型性較優(yōu)，其中以單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、司盤、吐溫、羊毛脂、黃凡士林、提取物混合后的產(chǎn)品成型性最優(yōu)。為進一步摸索最佳成型處方，進行正交設(shè)計見表3，正交設(shè)計見表4。

表4 正交實驗表

表5 正交實驗結(jié)果等級的一致性檢驗分析表

2.1.3 處方設(shè)計 綜合實驗結(jié)果，最優(yōu)處方為4號，組成為單硬脂酸甘油酯∶硬脂酸∶司盤-80∶吐溫-80∶羊毛脂∶黃凡士林∶提取物 =1.5∶1.5∶1∶2∶1.5∶1.5∶9，按此處方制得的產(chǎn)品外表光澤，手感細膩，涂展性好，載藥量高。

2.1.4 制備方法 將硬脂酸、吐溫-80、黃凡士林、按比例量加入燒杯熔融成液體A備用。將單硬脂酸甘油酯、司盤-80、羊毛脂加入燒杯熔融，待完全熔融成液態(tài)后加入比例量的提取物，輕輕攪勻后迅速倒入液體A，邊加邊攪拌，混合后稍冷，用傾倒法倒入已備好的背襯材料上成直徑20 mm的薄圓餅形即得。

2.2 透皮性研究

2.2.1 透過用皮膚的制備 取體重合格的兔子(湖南中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供)，靜養(yǎng)24 h，處死。以8%硫化鈉溶液去除兔毛，溫水洗凈，取下背部皮膚，去除皮下脂肪及筋膜、血管，再用生理鹽水洗凈，置于冰箱中4℃冷藏備用。從皮膚的制備到用于實驗不能超過1個月。

2.2.2 透皮用藥物樣品的制備 分別制備加氮酮1%和加氮酮3%的藥物樣品，分別考察透皮性。處方總量保持不變，增加氮酮的量就減少吐溫的量。加1%氮酮的樣品制備:取單硬脂酸甘油酯1.5 g、硬脂酸1.5 g、羊毛脂1.5 g、黃凡士林1.5 g、司盤-80 1 g、吐溫-80 1.8 g、提取物 9 g、氮酮 0.2 g，按照2.1.4制備方法制備。加3%氮酮的樣品制備:取單硬脂酸甘油酯1.5 g、硬脂酸1.5 g、羊毛脂1.5 g、黃凡士林1.5 g、司盤-80 1 g、吐溫-80 1.4 g、提取物 9 g、氮酮 0.6 g，按照2.1.4制備方法制備。

2.2.3 透皮試驗方法 將兔皮平攤蒙于Franz擴散池(自制)雙室之間，皮膚表面對著上室，用膠布將上下室固定，于上室加入精密稱定的咳喘穴位貼劑的藥物，下室加接收液，接收液為14 ml生理鹽水，磁力攪拌器恒溫水浴(37±1)℃。在一定的時間間隙取樣，同時補加14 ml生理鹽水，樣品用HPLC測定，同法做空白。

2.2.4 HPLC條件［4］流動相為甲醇∶水=55∶45，檢測器波長280 nm，流速 1 ml/min。

2.2.5 透皮特性試驗 透皮用丁香酚含量作為計算指標，數(shù)據(jù)處理記錄如表6，透皮動力學進行數(shù)學模型擬合結(jié)果見表7。由數(shù)學模型擬合結(jié)果可知未加氮酮組Q與t之間有相關(guān)性的函數(shù)關(guān)系為零級動力學模型、對正態(tài)分布模型、Higuchi模型、一級動力學模型、威布爾模型，進一步比較殘差平方和及擬合度，則更符合威布爾分布模型;1%氮酮組Q與t之間有相關(guān)性的函數(shù)關(guān)系為零級動力學模型、對正態(tài)分布模型、Higuchi模型、一級動力學模型、威布爾模型，進一步比較殘差平方和及擬合度，則更符合Higuchi模型;3%氮酮組Q與t之間有相關(guān)性的函數(shù)關(guān)系為零級動力學模型、對正態(tài)分布模型、Higuchi模型、一級動力學模型、威布爾模型，進一步比較殘差平方和及擬合度，則更符合威布爾模型。上述結(jié)果說明3%氮酮的透皮機理與未加氮酮透皮機理相同，加1%氮酮改變了透皮機理，明顯加快透皮速率。

表6 透皮特性試驗結(jié)果

表7 透皮動力學模型的擬合

r表示線性相關(guān)系數(shù);SUM表示殘差平方和;R2表示擬合度;r臨=0.606(α=0.01;υ=15)

透皮試驗結(jié)果可知，貼片透過速率大于原貼散劑的透皮速率且釋藥穩(wěn)定，且加入1%氮酮的透過性優(yōu)于加入3%氮酮的。

3 討論

3.1 成型性研究 用海藻酸鈉作基質(zhì)做成乳劑型藥物會發(fā)現(xiàn)軟膏中有黃色不溶小塊，疑為存在配伍禁忌。考慮全用水溶性基質(zhì)如CMC-Na、PEG等，但實驗發(fā)現(xiàn)，提取物不能分散，呈油珠狀懸浮在液態(tài)基質(zhì)中。于是采用全油脂性基質(zhì)，取得教好的效果。在實驗中發(fā)現(xiàn)，甘油會使產(chǎn)品在液態(tài)時分層，使凝固時藥物分布不均，遂不用甘油。

作者對產(chǎn)品的凝固點進行了考察，發(fā)現(xiàn)隨著硬脂酸和單硬脂酸甘油酯的用量增加，其凝固點會上升，但細度和涂展性及順滑性會降低。其凝固點難達到40℃以上用2.1.3法配比制成的產(chǎn)品凝固點為37℃左右。產(chǎn)品全為油脂性基質(zhì)，理論上HLB值低的司盤類應(yīng)該應(yīng)用較多，但作者從實驗中發(fā)現(xiàn)，HLB值較高的吐溫類應(yīng)用多于司盤類的產(chǎn)品在成型性及外觀上較優(yōu)，且吐溫∶司盤=2∶1較好。

3.2 透皮特性研究 在透皮實驗中，發(fā)現(xiàn)不加透皮促進劑藥物的透皮速率極低，故加入氮酮考察其透皮性，并分別討論加入1%和3%兩種情況分析比較。在此實驗中，溫度是一個重要的條件，水浴溫度要嚴格控制，溫度太低會使藥物有效成分在HPLC下幾乎檢測不到，太高會破壞皮膚的生理。將藥物涂抹在皮膚上的方法也是一個重要的影響因素，藥物應(yīng)該涂成薄薄一層，讓藥物與皮膚緊密接觸。皮上藥物的用量不宜太多，涂的藥物也不宜太厚，以免部分藥物無參與透皮反而減少總透過率。

［1］鄧桂明，陳鎮(zhèn)，楊廣民，等.超臨界CO2萃取咳喘穴位貼片藥材的工藝研究.中國醫(yī)院藥學雜志，2007，27(11):1493-1494.

［2］何群，鄧桂明，楊廣民，等.咳喘穴位貼片透皮促進劑的篩選.中國藥房，2007，18(9):658-660.

［3］何群，鄧桂明，楊廣民，等.咳喘穴位貼片與貼散體外透皮特性比較研究.中國中藥雜志，2007，32(18):1877-1880.

［4］鄧桂明，陳鎮(zhèn)，楊廣民，等.咳喘穴位貼片體外透皮吸收實驗研究.中南藥學，2008，6(2):134-137.

［5］楊立平，鄧桂明，楊廣民.咳喘穴位貼片體外透皮速率和體外釋放規(guī)律研究中國藥房，2009，20(18):1372-1374.