高效液相外標法測定長效乳酸環丙沙星注射液的效果分析

徐秀榮 陳宗靜 潘琦雯 黃迪海 張從敬 劉霞 張再輝 張華 秦卓明③* （山東省健牧生物藥業有限公司 濟南 250100 ②濟南市生物藥品工程技術中心 ③山東省農業科學院家禽研究所 濟南）

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高效液相外標法測定長效乳酸環丙沙星注射液的效果分析

徐秀榮①②陳宗靜①潘琦雯①黃迪海①②張從敬①②劉霞①②張再輝①②張華①②秦卓明①②③*（①山東省健牧生物藥業有限公司 濟南 250100 ②濟南市生物藥品工程技術中心 ③山東省農業科學院家禽研究所 濟南）

本研究以Inertsil ODS-3C18為色譜柱，乙腈-0.025mol/L磷酸溶液(13:87)(用三乙胺調節pH值至3.0±0.1)為流動相，277nm為檢測波長，利用峰面積，建立外標法定量檢測乳酸環丙沙星的含量。結果顯示：測得長效乳酸環丙沙星的線性范圍為10~60μg/ml(r=0.9995)，平均回收率為99.43%，RSD為0.21%(n=9)。說明高效液相外標法操作簡便、快速、重現性好、結果準確。

乳酸環丙沙星 高效液相色譜 外標法

乳酸環丙沙星是第三代喹諾酮類抗菌藥物，對革蘭氏陽性、革蘭氏陰性菌均有良好的抗菌作用，抗菌譜廣，抗菌力強，已廣泛用于畜禽及小動物的各種感染性疾病的治療。為進一步提高藥用效果，結合藥物緩釋技術，成功研制出長效乳酸環丙沙星注射液。目的是促使乳酸環丙沙星緩慢地釋放入動物體內，確保血藥濃度“峰谷”在一定時期保持在有效濃度范圍之內，且有效避免藥物短時間內濃度過高，超過治療血藥濃度范圍，產生毒副作用，進而達到毒副作用小、治療效果好、減少用藥次數，大大提高經濟效益。

采用高效液相色譜法內標法測定乳酸環丙沙星注射液含量在農業部《獸藥質量標準》2003年版[1]和其他文獻[3]中已有明確規定，但此法在檢測中需要配置對照品溶液及內標溶液，步驟繁瑣，費時費工，且成本較高。本文在參照《中國藥典》2005年版二部[3]及其他文獻[4]的基礎上，建立了一種新的高效液相色譜法外標法，只需配置對照品溶液，具有操作簡便、快速、重現性好、結果準確等特點。

1 儀器和試劑

（1）P1000高效液相色譜儀，SPD-UV100紫外檢測器，購自美國熱電儀器集團TSP公司。BP211D十萬分之一電子天平購自北京賽多利斯儀器系統有限公司。（2）環丙沙星對照品購自中國藥品生物制品檢定所，含量為84.9%，批號為130451-200802，裝量為0.1g。緩釋長效乳酸環丙沙星注射液中試產品，規格為10ml：0.4g，批號為20111101、20111102和20111103；乳酸環丙沙星注射液，規格為10ml：0.2g，批號為20111101、20111102和20111 103；上述產品均由山東省健牧生物藥業有限公司生產。乙腈為色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司生產。其它試劑為分析純，水為重蒸餾水。

2 測定條件及方法

2.1 色譜條件 色譜柱：Inertsil ODS-3C18柱；5μm，4.6×250mm。購自美國熱電儀器集團TSP公司。流動相：0.025mol/L磷酸溶液-乙腈(87:13)(用三乙胺調節pH值至3.0±0.1)，檢測波長為277nm，流速為1.0ml/min，進樣量：10μl。

2.2 對照品溶液的配制 精密稱取環丙沙星對照品20mg，置200ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；精密量取對照品溶液4.0ml，置10ml容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算，校正因子。

2.3 供試品溶液的制備和測定 精密量取樣品2.0ml(約相當于環丙沙星80mg)，置100ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液5.0ml，置100ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。色譜圖見圖1，環丙沙星保留時間是11.3min。

圖1 緩釋長效乳酸環丙沙星注射液的HPLC色譜圖

3 結果

3.1 線性范圍 精密量取對照品溶液1.0ml，2.0ml，3.0ml，4.0ml，5.0ml，6.0ml，分別置10ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別取10μl注入液相色譜儀，記錄各濃度的色譜峰面積，以環丙沙星的峰面積為縱坐標，環丙沙星濃度為橫坐標，根據色譜結果，繪制標準曲線(圖2)，并對峰面積進行回歸，計算線性回歸方程。環丙沙星濃度在10~60μg/ml呈良好的線性關系，其線性回歸方程及相關系數為：y=83091.7x+34799.4，r=0.9995 (n=6)。

圖2 緩釋長效乳酸環丙沙星注射液的標準曲線

3.2 精密度試驗 在上述色譜條件下，分別精密量取環丙沙星標準曲線中10、20、30μg/ml三種濃度的對照品溶液，依法測定峰面積，分別重復進樣6次，結果證實方法精密度良好，RSD分別為0.6%，0.8%，0.9%，n=6。

3.3 穩定性試驗 分別精密量取制備好的同一份供試品溶液分別在0、2、4、8和24h依法進行測定，記錄峰面積，結果峰面積基本不變，RSD為0.6%，n=5。

3.4 重復性試驗 按供試品溶液制備方法制備同一批號環丙沙星供試品溶液5份，依法測定，記錄峰面積，結果證明重復性良好，RSD為0.9%，n=5。

3.5 回收率試驗 用已知含量的原料按處方配制成樣品含環丙沙星相當于標示量的80%，100%，120%，按2測定條件及方法項下的方法制備對照品溶液及供試品溶液，注入液相色譜儀，以峰面積計算含量，計算得平均回收率為99.43%，RSD為0.21%，n=9。

回收率試驗的結果可以看出此方法測定長效乳酸環丙沙星注射液中的環丙沙星是可行的，其所得數據是可靠的，該方法定量準確，回收率高。

3.6 樣品測定 精密量取不同批次的長效乳酸環丙沙星注射液及普通乳酸環丙沙星注射液樣品，按上述供試品制備方法制得供試品溶液，依法測定，計算；與農業部《獸藥質量標準》2003年版中乳酸環丙沙星注射液的內標法對比，經過統計學分析，二者沒有差異。詳細結果見附表。

附表 樣品含量測定結果(n=2) (%)

產品長效乳酸環丙沙星注射液普通乳酸環丙沙星注射液 批號201010012010100220101003201010012010100220101003 外標法99.299.599.798.699.298.3 內標法99.199.3100.198.799.198.5 相對偏差0.10.10.20.10.10.1

4 小結與討論

（1）本文對不同批次的長效乳酸環丙沙星注射液采用高效液相色譜法外標法對環丙沙星的含量進行檢測。通過對線性范圍的考察、精密度試驗、穩定性試驗、重復性試驗和回收率試驗對測定方法經過了驗證。結果表明，本方法重現性好、結果準確，符合測試要求，可用于長效乳酸環丙沙星注射液中環丙沙星的含量測定。又用普通乳酸環丙沙星注射液作了相應的對比，得出高效液相色譜法外標法同樣適用于普通劑型。（2）乳酸環丙沙星注射液的含量測定在農業部《獸藥質量標準》2003年版[1]及其他文獻[3]中均采用高效液相色譜法內標法，此法在檢測中需要配置對照品溶液及內標溶液，浪費試劑、操作繁瑣。而高效液相色譜法外標法，只需配置對照品溶液，其操作簡便、快速、重現性好、結果準確。（3）本文的色譜條件同樣適用于長效乳酸環丙沙星注射液的有關物質的測定。

[1] 中華人民共和國農業部．獸藥質量標準2003年版[S]. 2003: 75.

[2] 中華人民共和國藥典2005年版二部[S]. 北京: 化學工業出版社, 2005: 附錄28.

[3] 羅亞虹, 伍軍, 盧丹等. 高效液相色譜法測定乳酸環丙沙星注射液的含量[J]. 中國藥事, 2002, 16(2): 106-107.

[4] 鐘玉蓮, 楊穎, 劉麗芳等. 反相高效液相色譜法測定乳酸環丙沙星注射液的含量[J]. 中國藥品標準, 2000, 1(1): 42-43.

（2012–05–18）

S859.79+7

A

1007-1733(2012)09-0014-02