六堡茶遺傳毒性試驗研究

覃良 李茂 黃宇聲 劉冠萍

廣西中醫(yī)藥研究院，廣西南寧530022

六堡茶遺傳毒性試驗研究

覃良 李茂 黃宇聲 劉冠萍

廣西中醫(yī)藥研究院，廣西南寧530022

目的:了解六堡茶遺傳毒性，為六堡茶的食用、藥用安全性提供實驗依據(jù)。方法:通過A m e s試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗及小鼠精子畸形試驗對其遺傳毒性進(jìn)行評價。結(jié)果:苦丁茶提取物3項遺傳毒性試驗結(jié)果均為陰性，對所試菌株、小鼠體細(xì)胞與雄性生殖細(xì)胞無誘變性。結(jié)論:在本實驗條件下，六堡茶提取物未見遺傳毒性作用。

六堡茶提取物;A m e s試驗;微核試驗;精子畸形試驗

廣西梧州制藥(集團(tuán))股份有限公司生產(chǎn)的六堡茶，用法用量為開水沖服，一次3g，一日3次。因其優(yōu)良的口感深受消費者歡迎。本文報導(dǎo)其遺傳毒性試驗研究結(jié)果。

1 實驗材料

1.1 受試藥物六堡茶提取物，由廣西梧州制藥(集團(tuán))股份有限公司提供，批號20100408，性狀為棕褐色浸膏(每毫升相當(dāng)于藥材1.87g)。用蒸餾水配成1.24g/ml供試驗用。

1.2 實驗動物KM小鼠90只，體重19～22g，雌雄各半，由廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證SCXK2009－0003，動物質(zhì)量合格證0009925。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1A mes試驗采用標(biāo)準(zhǔn)試菌株TA97、TA98、TA100、TA102，在加和不加S－9混合液的條件下，用樣品五個劑量組即5000、2500、1000、500及100μg進(jìn)行平板摻入法試驗。同時設(shè)自發(fā)回變對照組及陽性對照組。樣品、陽性對照物敵克松(Dexon 50μg/皿)、甲基磺酸甲酯(MMS 1μL/皿)、2－氨基芴(2－AF 10μg/皿)、1，8－二羥基蒽醌(1，8－Dan 50μg/皿)均用二甲基亞砜(DMSO)溶解。每劑量平行做3皿，試驗重復(fù)一次。結(jié)果樣品各劑量組平均回變菌落數(shù)均未超過自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍，見表1。

2.2 小骨髓微核試驗將60只小鼠隨機(jī)分為陽性對照組、陰性對照組(環(huán)磷酰胺40mg/kg體質(zhì)量ip)、樣品三個劑量組(49.6、24.8、12.4g藥材/kg體質(zhì)量)，每組雌雄各5只。各組均用30 h 2次灌胃法，每次0.2mL/10g體質(zhì)量。第二次灌胃后6h處死動物，取股骨骨髓懸于小牛血清中直接涂片，固定，染色，鏡檢。每鼠計數(shù)1000個嗜多染紅細(xì)胞的微核細(xì)胞數(shù)，計算微核發(fā)生率，結(jié)果用SPSS10.0統(tǒng)計軟件中泊松分布u檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果樣品各劑量組的細(xì)胞微核發(fā)生率與陰性對照比較均無統(tǒng)計意義(P＞0.05)，陽性對照組微核發(fā)生率明顯高于對照組，有統(tǒng)計意義(P＜0.001)，見表2。

表1 六堡茶提取物對各菌株回變菌落數(shù)的影響(±SD)

表1 六堡茶提取物對各菌株回變菌落數(shù)的影響(±SD)

組別劑量/m－1TA97TA98TA100TA102 86±17 DMSO0．1mL/皿109±9121±927±432±3119±14119±15268±16291±12樣品1100113±10123±729±234±3117±12128±13275±11289±17樣品2500111±10127±629±234±4119±12128±14272±15288±15樣品31 000109±10129±927±135±4122±11131±10283±14290±17樣品42 500110±11126±831±335±3126±11135±10280±10288±20樣品55 000112±8126±830±235±2124±13130±13270±13294±14 Dexon501 813±220－1 370±205－－－1 473±136－MMS1цL/皿－－－1 510±152－－－－S9+S9－S9+S9－S9+S9－S9+S9空白－110±10122±629±333±2125±13129±14272±152－2－AF10－1 977±146－1 477±151－1 321±140－－1.8－Dan50－－－－－－－833±146

2.3 小鼠精子畸形試驗將30只小鼠隨機(jī)分為樣品3個計量組(49.6、24.8、12.4g藥材/kg體質(zhì)量)、陰性對照組、陽性對昭組(環(huán)磷酰胺40mg/kg體質(zhì)量，ip)，每組5只，各組動物每天灌胃一次，每次0.2mL/10g體質(zhì)量，連續(xù)5d。首次給受試物后的第35 d處死動物，取雙側(cè)附睪放入生理鹽水中縱向切1～2刀，過濾，吸濾液涂片、固定、2%伊紅染色制片。每鼠鏡檢1 000個精子，計數(shù)精子畸形數(shù)及畸形類型，計算畸形率。結(jié)果用SPSS10.0統(tǒng)計軟件中秩和檢驗統(tǒng)計分析。

結(jié)果樣品各劑量組與陽性對照組的精子畸形率比較均無統(tǒng)計意義(P＞0.05)。陽性對照組精子畸形數(shù)明顯高于陰性陰對照組，有統(tǒng)計意義(P＜0.01)，見表3。

表2 六堡茶提取物對小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核發(fā)生率的影響(±SD)

表2 六堡茶提取物對小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核發(fā)生率的影響(±SD)

注:*與陰性對照組比較，P＜0.01。

組別劑量(g·kg－1體質(zhì)量)動物數(shù)(只)鏡檢細(xì)胞數(shù)(個)微核細(xì)胞數(shù)(個)微核發(fā)生率(‰)0.2MLl0g55×1 000102.0樣品組112.455×1 00081.6樣品組224.855×1 000102.0樣品組349.655×1 00091.8陽性對照物10mg/kg55×1 000120*24.0♂陰性對照物0.2mL/10g55×1 00091.8樣品組112.455×1 00091.8樣品組224.855×1 000112.2樣品組349.655×1 000102.0陽性對照組40mg/kg55×1 000135*♀陰性對照組27.0

3 結(jié)論

六堡茶提取物經(jīng)Ames試驗、小鼠微核試驗和精子畸形試驗結(jié)果均為陰性，對所試菌株、小鼠體細(xì)胞與雄性生殖細(xì)胞無誘變性［1，2］。

研究表明六堡茶安全性好，無遺傳毒性。

表3 六堡茶提取物小鼠精子畸形試驗結(jié)果(±SD)

表3 六堡茶提取物小鼠精子畸形試驗結(jié)果(±SD)

注:*與陰性對照組比較，P＜0.01。

組別劑量(g·kg－1體質(zhì)量)動物數(shù)(只)鏡檢精子數(shù)(個)畸形數(shù)(個)畸形率(%)0.2mL/10g55×1 000501.00樣品組12.455×1 000420.84樣品組24.855×1 000460.92樣品組49.655×1 000450.90陽性對照組40mg/kg55×1 000263*陰性對照物5.26

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部，食品安全性毒學(xué)評價程序和方法［S］．北京:衛(wèi)生部，1994:14－47．

［2］李壽祺．衛(wèi)生毒理基本原理和方法［M］．成都:四川科學(xué)出版社，1987:174－175．

［3］龐廣昌．生物活性肽的研究進(jìn)展理論基礎(chǔ)與展望［J］．食品科學(xué)，2001，22(22):80－84．

R965.3

A

1007－8517(2012)21－0055－02

2012.09.27)