天冬中總氨基酸的含量測定

劉亮劉英波周英信丁斗潘年松馮華

1．貴州省遵義醫藥高等專科學校，貴州 遵義 563002;2．貴州省遵義市藥品檢驗所，貴州 遵義 563000

天冬中總氨基酸的含量測定

劉亮1劉英波1周英信1丁斗1潘年松1馮華2

1．貴州省遵義醫藥高等?？茖W校，貴州 遵義 563002;2．貴州省遵義市藥品檢驗所，貴州 遵義 563000

目的:建立天冬中總氨基酸含量測定的方法。方法:以天冬素為對照品，2%茚三酮及pH=6．8磷酸二氫鉀－氫氧化鈉緩沖液為顯色劑，置沸水中顯色15min，于566nm下測定吸光度。結果:天冬素的質量濃度在4～14μg·mL－1與吸光度成良好線形關系，r=0.9994(n=6)，平均回收率為100.59%，RSD=2.47%。結論:該法可用于天冬的含量測定。

天冬;總氨基酸;含量測定

天冬為百合科植物天門冬Asparagus cochinchinensis(Lour．)Merr．的塊根，是一種臨床常用中藥，具有養陰清熱，潤肺滋腎的功效，臨床上多用于治陰虛發熱、咳嗽吐血、肺癰、咽喉腫痛、消渴、便秘等病癥。天冬中所含化學成分主要有氨基酸類、糖類、螺甾甙類。通過查閱文獻，我們發現氨基酸類具有抗腫瘤活性，但其含量測定方面的研究較少［1］，難以進行深入開發。本文通過紫外法，以天冬素為對照品對天冬中總氨基酸的含量測定進行了方法學的考察，為天冬的質量控制提供了新思路，新嘗試。

1 儀器與試藥

Aquelix 5型實驗室高純水系統(重慶市金富科技發展有限公司)，UV2501紫外分光光度計(日本島津);DKS－26型電熱恒溫水浴鍋(寧波江南儀器廠);FA2004B型電子天平(上海越平科學儀器有限公司);SHZ－DⅢ型予華牌循環水真空泵(鞏義市予華儀器有限責任公司);FW200型高速萬能粉碎機(北京科偉永興儀器有限公司)。

天冬素購于上海華壹生物科技有限公司(批號:70－47－3);天冬藥材購于貴州遵義，經遵義醫藥高等?？茖W校張學愈副教授鑒定為百合科植物天冬Asparagus cochinchinensis(Lour．)Merr．的塊根;所用水為高純水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液的配制

2.1.1 茚三酮溶液的配制(2%)

稱取茚三酮2.0g加乙醇溶解，定容至100mL。

2.1.2 磷酸鹽緩沖液的配制(pH=6.8)

精密稱取磷酸二氫鉀3.4022g及氫氧化鈉0.4720g混合加水使其溶解，定容至500mL。

2.1.3 天冬素對照溶液的配制

精密稱取天冬素0.0100g加水使其溶解，定容至100mL。此溶液濃度為0.1mg/mL。

2.1.4 供試溶液的制備

精密稱取天冬藥材粗粉1克，加水50mL，超聲提取30min，抽濾，濾液定容至100mL。

2.2 測定波長的選擇

分別精密吸取對照溶液、供試溶液適量于25mL容量瓶中，加水至10mL，再分別加入磷酸鹽緩沖液2mL和茚三酮溶液2mL，搖勻，置于沸水中顯色15min，取出后立即用冰水冷卻5min，用水定容至刻度，搖勻，靜置10min，在400～800nm進行掃描，結果顯示對照溶液在577nm處有最大吸收(圖1)，而供試溶液在566nm處有最大吸收(圖2)，故選擇566nm為本試驗的測定波長。

2.3 標準曲線的制備

分別精密移取對照溶液0.0，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0和3.5mL于25mL容量瓶中，加水至10mL，再分別加入磷酸鹽緩沖液2mL和茚三酮溶液2mL，搖勻，置于沸水中顯色15min，取出后立即用冰水冷卻5min，用水定容至刻度，搖勻，靜置10min，于566nm處測定吸光度。以吸光度(A)為縱坐標，質量濃度(C)為橫坐標進行線性回歸。結果表明，天冬素在4～14μg/mL與吸光度呈良好的線性關系?；貧w方程為A=0.052314C－0.077162，r=0.9994。

2.4 穩定定性試驗

精密吸取樣品溶液1.0mL，按2.3項下的操作方法顯色，于566nm處分別在0，10，20，，40，60，90，120min測定吸光度。結果表明樣品液顯色后在120min內穩定，RSD=0.43%。

2.5 精密度試驗

精密吸取對照溶液2mL，共6份，按2.3項下的操作方法顯色，于566nm處測定吸光度，計算RSD=0.57%。結果表明方法的精密度良好。

2.6 重復性試驗

精密稱取同一批樣品6份，按2.1.4項下方法制備供試品溶液，按2.3項下操作方法顯色，于566nm處測定吸光度，并計算含量，結果平均含量為2.05%，RSD=1.08%。結果表明方法的重復性良好。

2.7 加樣回收率試驗

分別精密吸取6份已知含量的樣品溶液0.5mL于25mL容量瓶中，加入對照品溶液1.0mL，按2.3項下操作方法顯色，于566nm處測定吸光度，結果見表1。

表1 天冬加樣回收率試驗結果(n=6)

2.8 樣品的含量測定

按照2.1.4項下操作方法，制備3批供試溶液，按2.3項下操作方法顯色，于566nm處測定吸光度，3批藥材中總氨基酸的含量分別為:2.07%，2.07%，2.06%，RSD=0.35%。

3 討論

根據文獻的查閱［2－4］，試驗前期比較了醋酸－醋酸鈉(pH=5.5)、磷酸二氫鉀－磷酸氫二鈉(pH=8.04)及磷酸二氫鉀－氫氧化鈉(pH=6.8)三種緩沖液對顯色穩定性的影響。結果表明醋酸－醋酸鈉(pH=5.5)緩沖液條件下生成物不穩定，吸光度值在短時間內下降很快。后兩種緩沖液條件下相比較而言，磷酸二氫鉀－氫氧化鈉(pH=6.8)穩定性最好，故選為本試驗反應條件。實驗過程中應嚴格控制溫度和時間。本法具有操作簡單，準確等優點，為天冬的質量控制提供了新的有效手段。

［1］ 馬家驄，項勤，劉浙創等．異硫氰酸苯柱前衍生法測定天冬中天冬素含量［J］．科技通報，1990，6(3):152－154．

［2］ 胡京枝，董小海，于大杰．紫外分光光度法測定含乳飲料中游離氨基酸含量［J］．中國食品添加劑，2007，18(6):164－167．

［3］ 朱瑾，李新霞，陳堅．茚三酮比色法測定蒜氨酸原料藥中總氨基酸的含量［J］．西北藥學雜志，2008，23(3):136－138．

［4］ 梁英麗，李艷，高孟婷等．西歸中總氨基酸含量測定方法的研究［J］．大理學院學報，2009，8(10):7－9．

R927.2

A

1007－8517(2012)15－0045－02

貴州省教育廳自然科學研究項目，黔教科(2008)069號;遵義醫藥高等?？茖W校自然科學科技項目，遵醫專科合(2011)Z01號。

劉亮(1981～)，男，講師，理學碩士，主要從事中藥、民族藥化學成分及質量研究。

周英信，教授。Tel:13985235292。

2012.05.16)