玫瑰花茶對束縛應激小鼠尾懸掛實驗與抗氧化能力的影響

陳 文，張 靜，常 平，任 超，張艷貞

（北京聯合大學應用文理學院，生物活性物質與功能食品北京市重點實驗室，北京100191）

玫瑰花茶對束縛應激小鼠尾懸掛實驗與抗氧化能力的影響

陳 文，張 靜，常 平，任 超，張艷貞

（北京聯合大學應用文理學院，生物活性物質與功能食品北京市重點實驗室，北京100191）

探討玫瑰花茶對束縛應激小鼠尾懸掛實驗與抗氧化能力的影響。將8周齡雄性BALB/C小鼠分為4組：正常對照組（C組）、應激對照組（S組）、低劑量玫瑰花茶組（L-RE組）、高劑量玫瑰花茶組（H-RE組）。S、L-RE、H-RE組小鼠每天給予1h的束縛刺激，30min后分別灌喂水和相應劑量的玫瑰花茶。連續灌胃6周后用BIOSEB小鼠懸尾自動分析系統進行尾懸掛實驗，并分析血漿同型半胱氨酸（HCY）、肝臟還原型谷胱苷肽（GSH）含量和過氧化氫酶（CAT）活性。結果顯示，與C組相比較，S組小鼠懸尾時后4min內的不動時間延長了93%、活動消耗的量能和活動能力都下降，肝臟CAT活性、GSH含量都明顯降低（P＜0.05），血漿HCY含量顯著升高（P＜0.05）。與S組相比較，L-RE組小鼠的不動時間降低了53%，活動消耗的量能、活動能力分別提高了87%、47%，L-RE組和H-RE組小鼠肝臟CAT活性、GSH含量都明顯增加（P＜0.05），血漿HCY含量分別降低了20%和14%。提示玫瑰花茶提高了小鼠的抗氧化能力，改善了束縛應激誘導的高HCY血癥，增強了尾懸掛實驗中小鼠的掙扎活動能力，縮短了不動時間，在一定程度上緩解了束縛應激小鼠的“行為絕望”狀態。

玫瑰花，尾懸掛實驗，抗氧化，束縛應激，小鼠

應激是指機體在受到各種內外環境因素刺激時出現的非特異性全身反應，長期過度的應激會對機體造成氧化損傷[1-3]。應激又與焦慮和抑郁密切相關，被認為是導致焦慮和抑郁的誘因。本文從尾懸掛實驗和抗氧化能力等不同方面來觀測玫瑰花茶對束縛應激小鼠的影響，以初步探討玫瑰花茶“緩解壓力”之功效。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

高氯酸 北京南尚樂化工廠，分析純；硼砂 北京益利精細化學有限公司，分析純；氫氧化鈉 北京化學試劑廠，分析純；醋酸鈉 中國醫藥公司，分析純；甲醇 CALEDON公司，色譜純；二硫蘇糖醇（DTT，純度≥99%）、7-氟苯-2-氧-1，3-重氮-4-磺胺（SBD-F，純度≥98.5%）、同型半胱氨酸（HCY，純度≥95%） Fluak公司；過氧化氫酶試劑盒、還原型谷胱甘肽試劑盒 南京建成生物工程研究所；玫瑰花 康美藥業股份有限公司。

小鼠懸尾自動分析系統 法國BIOSEB公司；高效液相色譜儀 600E，配有熒光檢測器，美國Waters公司；BR4高速離心機 法國Jouan公司；WFZ UV-2000紫外可見分光光度計 美國UNICO公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 玫瑰花茶的制備 稱取玫瑰花9、4.5g，分別浸于100mL沸水中，超聲提取30min，過濾，濾液分別作為高劑量玫瑰花茶（9g/100mL）和低劑量玫瑰花茶（4.5g/100mL）。

1.2.2 實驗動物及分組 8周齡雄性BALB/C小鼠60只（SPF級，購于軍事醫學科學院實驗動物中心），在光-暗周期為12h、溫度20～22℃的環境下適應飼養一周后，按體重隨機分成四組：正常對照組（C組）、應激對照組（S組）、低劑量玫瑰花茶組（L-RE組）、高劑量玫瑰花茶組（H-RE組）。各組小鼠均自由攝食飲水，S組、L-RE組、H-RE組小鼠每天置于帶有透氣孔的束縛管中，給予1h的束縛刺激，30min后分別灌喂0.4mL水、低劑量玫瑰花茶、高劑量玫瑰花茶。連續喂飼6周，于第6周末期進行尾懸掛實驗。次日，各組小鼠灌胃后30min，采血，測定血漿同型半胱氨酸（HCY）含量；采血后處死小鼠，取肝臟測定還原型谷胱苷肽（GSH）含量和過氧化氫酶（CAT）活性。

1.2.3 尾懸掛實驗 將小鼠尾端0.5cm處環繞粘貼上小膠條，膠條鉤在懸尾儀上，使動物呈倒掛狀態，頭部離臺面約5cm，懸掛6min，記錄小鼠后4min內的不動時間。結束后用75%酒精擦拭懸尾儀箱體并揮干，再進行下一只小鼠的實驗。

1.2.4 小鼠肝臟GSH含量、CAT活性的測定 取一定量肝臟，用生理鹽水制成5%勻漿液。取部分勻漿液3000r/min離心10min，取上清液，按照試劑盒方法測定小鼠肝臟GSH含量。另取部分勻漿液，稀釋5倍后，3000r/min離心10min，取上清液，按照試劑盒方法測定小鼠肝臟CAT活性。

1.2.5 小鼠血漿同型半胱氨酸含量的分析 參照黃其擎[4]等的HPLC方法，流動相0.08mol/L醋酸鈉含1%甲醇，Waters Symmetry Shield TM RP18色譜柱（3.9mm× 150mm，5μm），流速0.8mL/min，進樣量20μL，激發波長390nm，發射波長470nm。

2 結果與分析

2.1 玫瑰花茶對小鼠體重的影響

實驗開始時各組小鼠間體重無差異，經過6周的實驗后，與C組相比較，S組的體重有所降低（P＜0.05），提示束縛刺激使小鼠產生焦慮情緒，影響了體重增長；與S組相比較，L-RE組和H-RE組小鼠體重也明顯減輕（P＜0.05），提示玫瑰花茶有一定減重效果。

表1 實驗前后各組小鼠體重的變化（±s，n=13）Table 1 The change of mice body weight（±s，n=13）

表1 實驗前后各組小鼠體重的變化（±s，n=13）Table 1 The change of mice body weight（±s，n=13）

注：*：與實驗前C組比較有顯著性差異（P＜0.05）；#：與實驗后C組比較有顯著性差異（P＜0.05）；##：與實驗后S組比較有顯著性差異（P＜0.05）。

組別 實驗前體重（g） 實驗后體重（g）C組 23.2±1.0 27.0±1.8* S組 23.4±0.9 25.6±1.2# L-RE組 23.1±0.9 24.1±1.6## H-RE組 23.2±1.3 23.7±1.7##

2.2 玫瑰花茶對束縛應激小鼠尾懸掛實驗的影響

尾懸掛實驗中，小鼠為克服不正常的倒掛體位而掙扎活動，企圖逃脫。但活動一定時間后，出現間斷性“不動”顯示“失望”、“行為絕望”狀態。懸掛6min，計算后4min內的不動時間。同時法國BIOSEB小鼠懸尾自動分析系統還能給出活動消耗的量能和活動能力等數據，以綜合判斷實驗結果。

實驗結果顯示，連續喂飼6周后，與C組相比較，S組小鼠后4min內的不動時間延長了93%，活動消耗的量能和活動能力分別下降了42%和26%，提示每天的束縛刺激使小鼠產生放棄逃脫的傾向；與S組相比較，L-RE組小鼠的不動時間降低了53%，活動消耗的量能、活動能力分別提高了87%、47%，提示低劑量玫瑰花茶在一定程度上增強了束縛應激小鼠的掙扎活動能力，縮短了不動時間，緩解了小鼠的“失望”狀態。

表2 玫瑰花茶對束縛應激小鼠尾懸掛實驗的影響（±s，n=13）Table 2 The effect of rose extract on tail suspension test in stressed mice（±s,n=13）

表2 玫瑰花茶對束縛應激小鼠尾懸掛實驗的影響（±s，n=13）Table 2 The effect of rose extract on tail suspension test in stressed mice（±s,n=13）

注：*：與S組比較有顯著性差異（P＜0.1）；#：與C組比較有顯著性差異（P＜0.1）。

組別 懸尾時后4min內的不動時間（s） 活動消耗的量能 活動能力C組 14.7±11.2 8858±2292 37.1±10.0 S組 28.5±25.6 5116±2501* 27.4±13.5* L-RE組 13.5±9.7# 9590±4885# 40.3±20.1# H-RE組 15.0±14.4 7716±3594 31.7±15.1

2.3 玫瑰花茶對束縛應激小鼠抗氧化能力的影響

表3 玫瑰花茶對束縛應激小鼠抗氧化能力的影響（±s，n=13）Table 3 The effect of rose extract on antioxidant capacity of stressed mice（±s，n=13）

表3 玫瑰花茶對束縛應激小鼠抗氧化能力的影響（±s，n=13）Table 3 The effect of rose extract on antioxidant capacity of stressed mice（±s，n=13）

注：*：與C組比較有顯著性差異（P＜0.05）；#：與S組比較有顯著性差異（P＜0.05）。

血清HCY含量（μg/100mL）C組 16.6±3.2 4.77±0.28 34.5±3.9 S組 13.5±2.8* 4.16±0.54* 46.1±11.0* L-MG組 16.9±3.1# 5.16±0.49# 36.0±6.4# H-MG組 17.1±3.7# 5.23±0.72# 38.8±10.8組別 肝臟CAT活性（U/mg·prot）肝臟GSH含量（mg/g·prot）

由表3可見，與C組相比較，S組小鼠肝臟CAT活性、GSH含量都明顯降低（P＜0.05），血漿HCY含量顯著升高（P＜0.05），提示每天的束縛刺激使小鼠抗氧化能力下降；與S組相比較，L-RE組和H-RE組小鼠肝臟CAT活性、GSH含量都明顯提高（P＜0.05），血漿HCY含量分別降低了20%和14%，提示玫瑰花茶能夠改善束縛應激小鼠的抗氧化能力。

3 討論

應激易引起機體的氧化損傷，對多種疾病如心腦血管疾病、惡性腫瘤和糖尿病的發生、發展都有重要影響[1]。因此，研究應激對機體的影響具有重要意義。

2001年，吳淑慶[2-3]等人報道束縛應激能誘導大鼠高同型半胱氨酸血癥，通過對同型半胱氨酸（HCY）轉硫代謝酶胱硫醚β合成酶轉錄水平的負性調控影響其活性，最終導致高HCY血癥的發生。而HCY可通過氧化應激、內質網應激、參與免疫反應等多種機制損傷心臟、血管及血細胞，導致心腦血管疾病的發生，是心腦血管疾病發病的獨立危險因子。細胞實驗表明[5-6]，HCY對培養的內皮細胞所產生的毒性作用可被過氧化氫酶（CAT）所抑制，而在高HCY血癥大鼠體內發現，血小板聚集性和組織因子活性增強的同時，血液中脂質過氧化產物水平也升高，可能與其抑制谷胱甘肽（GSH）的合成、降低細胞內谷胱甘肽過氧化物酶濃度有關。2004年，Oliveria[7]等人在束縛、游泳、寒冷及適應新環境四種不同條件下檢測了大鼠血漿HCY水平，發現只有束縛應激顯著提高了大鼠血漿HCY水平。束縛主要可引起動物緊張和恐懼的心理反應，提示心理應激可能是引起血漿HCY水平升高的重要因素之一。

應激又與焦慮和抑郁密切相關，被認為是導致焦慮和抑郁的原因。在焦慮和抑郁生物學機制的研究方面，通常利用動物對應激性或新異性事件的行為或生理反應來觀測動物的焦慮或抑郁狀態，尾懸掛實驗就是方法之一[8]。尾懸掛實驗中，小鼠為克服不正常的倒掛體位而掙扎活動，企圖逃脫。但活動一定時間后，出現間斷性“不動”顯示“失望”、“行為絕望”狀態。間斷不動時間也能一定程度地反映動物的肌力。

本實驗中，束縛應激組小鼠懸尾時后4min內不動時間延長了93%，活動消耗的量能和活動能力都下降，提示每日的束縛刺激使小鼠產生放棄逃脫的傾向；同時，小鼠肝臟CAT活性、GSH含量都明顯降低（P＜0.05），而血漿HCY含量顯著升高（P＜0.05），提示束縛刺激誘導了高HCY血癥，使小鼠抗氧化能力下降。束縛主要通過使動物的軀體活動受限，而使小鼠產生掙扎、急躁、憤怒、抑郁、絕望等心理及行為變化。較長的造模周期與每天造模時間的不固定，可增強上述心理應激效果。本實驗中，由于反復、長期的束縛，產生慢性應激，引起機體的功能紊亂，從而導致軀體及精神疲勞的發生。

玫瑰花作為藥食兩用的物品，含有多種生物活性成分，主要包括揮發油、鞣質、氨基酸、黃酮類、色素類、多酚類等等[9-11]，其主要的功效報道集中在抗氧化、抗菌抗病毒、以及對心血管的保護等方面。曾佑煒[12]等人曾報道玫瑰花水提液具有良好的清除二苯代苦味酰自由基（DPPH）的作用。本實驗中，在連續給予小鼠束縛應激6周后，與應激對照組相比較，低劑量玫瑰花茶組小鼠的不動時間降低了53%，活動消耗的量能、活動能力分別提高了87%、47%，兩個劑量玫瑰花茶組小鼠肝臟CAT活性、GSH含量都明顯提高（P＜0.05），血漿HCY含量分別降低了20%和14%。以上結果提示低劑量玫瑰花茶通過提高小鼠的抗氧化能力，改善了束縛應激誘導的高HCY血癥，在一定程度上增強了尾懸掛實驗中束縛應激小鼠的掙扎活動能力，縮短了不動時間，緩解了小鼠的“失望”、“行為絕望”狀態。

本實驗中束縛刺激抑制了小鼠體重的增長。而與應激對照組相比較，兩個玫瑰花茶組小鼠的體重也都減輕，這與我們此前關于玫瑰花茶功效作用的研究結果（未發表）相吻合，玫瑰花茶組均多次出現減重效果。關于玫瑰花茶減重減壓功效及其作用機制有待于深入探討。

4 結論

本文初步證實玫瑰花茶提高了小鼠的抗氧化能力，改善了束縛應激誘導的高HCY血癥，增強了尾懸掛實驗中小鼠的掙扎活動能力，縮短了不動時間，在一定程度上緩解了束縛應激小鼠的“行為絕望”狀態，為玫瑰花茶“緩解壓力”功效研究提供了一些參考依據。

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Effect of rose extract on tail suspension test and antioxidant capacity in stressed mice

CHEN Wen，ZHANG Jing，CHANG Ping，REN Chao，ZHANG Yan-zhen
（College of Artsamp;Science of Beijing Union University，Beijing Key Laboratory of Bioactive Substances and Functional Foods，Beijing 100191，China）

In order to study the effect of rose extract on tail suspension test and antioxidant capacity of stressed mice，8-weeks-old male BALB/C mice were divided into 4 groups：control group（C），stressed group（S），lowdose rose extract group（L-RE）and high-dose rose extract group（H-RE）based on their body weights.The mice of S，L-RE and H-RE group were suffered restraint stress 1h per day.6 weeks later，tail suspension test was done，and plasma homocysteine（HCY）and liver reduced glutathione（GSH）and catalase activity were determined.Results：Compared with C group，immobility duration of S group in tail suspension test prolonged by 93%，total spent energy and the power of movement declined，liver GSH and CAT activity significantly decreased（P＜0.05），and plasma HCY remarkably increased（P＜0.05）.Compared with S group，immobility duration of L-RE group in tail suspension test shortened by 53%，total spent energy and the power of movement improved 87%and 47%respectively，both of liver GSH and CAT activity significantly increased（P＜0.05）in L-RE and H-RE group，and plasma HCY reduced.The above results suggested that rose extract improved the antioxidant capacity of stressed mice，reduced plasma HCY level，shortened the duration of immobility and enhanced the power of movement in tail suspension test.

rose；tail suspension test；antioxidant capacity；restraint stress；mice

TS201.4

A

1002-0306（2012）01-0376-03

2011－09－09

陳文（1966-），女，博士，副教授，研究方向：營養與功能食品。

北京聯合大學自然科學類項目（2009）。