紫花杜鵑片中杜鵑素的HPLC法測定

李淑如 羅杰 李蘭芳

廣州白云山和記黃埔中藥有限公司現(xiàn)代中藥研究院，廣東 廣州 510515

紫花杜鵑片中杜鵑素的HPLC法測定

李淑如 羅杰 李蘭芳

廣州白云山和記黃埔中藥有限公司現(xiàn)代中藥研究院，廣東 廣州 510515

目的：建立了HPLC法測定紫花杜鵑片中杜鵑素的含量。方法：采用Agilent C18色譜柱，以甲醇-0.1%磷酸溶液（57：43）為流動相，檢測波長為297nm。結(jié)果：杜鵑素在0.0334 ～1.002μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。回收率為 96.7% ,RSD=1.8%。結(jié)論：該方法結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于測定紫花杜鵑片中杜鵑素含量。

紫花杜鵑片；杜鵑素；含量測定；高效液相色譜

Absract

Objective: To establish the farrerol in Rhododendron maria hance tablets by HPLC.. Method:Applying HPLC, Agilent C18 was used for column, methanol-0.1%phosphoric acid solutions（57：43）for mobile phase,detective wave 297nm. Results: The calibration cruve for farrerol was linear within 0.0334 ～1.002μg.The average recovery rate was 96.7%,with RSD=1.8%. Conclusion: The method is accurate and reproducible, and can be used for the quality control of farrerol in Rhododendron maria hance tablets.

rhododendron maria hance tablets; farrerol; content assaying; HPLC

紫花杜鵑片為紫花杜鵑藥材單方制劑，該處方組方簡單，療效確切，其功能主治為止咳，祛痰。用于氣管炎。紫花杜鵑中的有效成分杜鵑素能明顯促進(jìn)小鼠呼吸道排出酚紅，提示杜鵑素可能直接作用于呼吸道黏膜，而大鼠氣管引流法表明，杜鵑素有一定的促進(jìn)呼吸道液體分泌的作用[1]。現(xiàn)依據(jù)本品的功能，采用高效液相色譜法測定紫花杜鵑片中杜鵑素的含量。

1 材料與方法

1.1 儀器

Waters2695高效液相色譜儀（四元梯度泵， Waters 2996二極管陣列檢測器Waters Empower 2 色譜管理軟件）。

1.2 試藥

杜鵑素（批號：110850-200604 中國藥品生物制品檢定所）。紫花杜鵑片（廣州白云山和記黃埔中藥有限公司）。甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent C18色譜柱（4.6mm×250mm,5μm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液（57：43）；檢測波長：297nm。流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL

2.2 對照品溶液的溶液制備

取杜鵑素對照品，加甲醇配制成每mL含30ug的溶液，即得。

2.3 供試品溶液制備

取本品，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率：頻率：）20分鐘，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性試驗

取杜鵑素對照品溶液（0.0334mg/ml），分別進(jìn)樣1μl、3μl、5μl、10μ l、20μl、30μl按試驗方法項下的色譜條件測定。

以杜鵑素進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明見圖1，杜鵑素在0.0334～1.002μg的范圍內(nèi)，其進(jìn)樣量與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系。回歸方程：Y＝3×10-7X+0.0072，R=0.999。

圖1 杜鵑素對照品HPLC圖譜

圖2 樣品HPLC圖譜

2.5 精密度試驗

取杜鵑素對照品溶液（0.0334mg/ml），連續(xù)進(jìn)樣6次，杜鵑素峰面積的平均值為：1100256， RSD為0.32%，說明儀器精密度較高。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，在0、2、4、6、8、12h連續(xù)測定峰面積，計算杜鵑素峰面積積分值的RSD=1.2 %，表明室溫下供試品溶液中12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗

取同一批號的紫花杜鵑片，制備6份供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，計算杜鵑素含量的RSD= 1.8%，結(jié)果表明本方法重現(xiàn)性好，見圖2。

2.8 加樣回收率

試驗取已知含量（0.92mg/g）供試品6份，每份0.5g，精密稱定，分別精密加入杜鵑素（濃度為 0.161mg/ml ）對照品溶液3 mL，按供試品溶液制備方法制備并測定，結(jié)果見表1。

表1 杜鵑素回收率試驗

2.9 樣品測定

取3批紫花杜鵑片樣品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件測定，結(jié)果見表2。

表2 3批樣品含量測定

3 討論

3.1 原標(biāo)準(zhǔn)采用分光光度法測定制劑中蘆丁含量，該方法重現(xiàn)性、精密度、專屬性較差，而且黃酮類成分蘆丁廣泛存在植物藥材中，采用高效液相色譜法測定杜鵑素，重現(xiàn)性好、精密高、專屬性強。

3.2 測定杜鵑素的流動性經(jīng)優(yōu)化實驗后，選定為甲醇-0.1%磷酸溶液（57：43），參照流動相甲醇-0.2%磷酸溶液（58：42）[2]，甲醇-0.4%磷酸溶液（52：48）[3],本方法流動相使用0.1%磷酸溶液，較0.2%磷酸溶液酸性低，有利于保護(hù)色譜柱、減少磷酸的使用，減少環(huán)境污染，同時也降低了使用成本。

[1]中藥大辭典.下冊( 第二版）.上海科學(xué)技術(shù)出版社

[2]張朝陽，張振秋.HPLC波長切換法測定滿山紅中杜鵑素和槲皮素的含量[J].中國實用醫(yī)藥雜志，2008，1（3）：59～60

[3]黃齊林，高小瑩，等.高效液相色譜法快速測定滿山紅中槲皮素和杜鵑素的研究.[J].分析科學(xué)學(xué)報,2006,22(4),162～163

Determination of Farrerol in Rhododendron Maria Hance Tablets Bby HPLC

Li Shuru Luoi Jie Li Lanfang
(Hutchison Whampoa Guangzhou Baiyunshan Chinese Medicine Co., Guangzhou, 510515, Guangdong, China)

10.3969/j.issn.1001-8972.2012.02.025

李淑如，中級工程師，研究方向：中藥質(zhì)量控制及政策法規(guī)研究。