RP－HPLC－ELSD法測定野生白花丹藥材1～12月份根、莖、葉中β－谷甾醇的含量＊

戴先芝，丁 玲，黃艷菲，李艷丹，張吉仲，劉 圓△

（1.阿壩師范高等專科學校，四川 汶川623002；2.西南民族大學民族醫藥研究院，四川 成都610041）

白花丹是雙子葉植物藍雪科植物白雪花（Pl umbago zeyl anica L.）的全草［1］。為多民族醫常用藥材，民間應用廣泛，具有散瘀消腫、祛風止痛等功效［1］。收載于1996年版《廣西中藥材標準》第二冊和1998年版國家衛生部部頒維藥標準。文獻資料及本課題組前期的研究表明，白花丹具有抗腫瘤、抗炎、抗肝損傷等藥理作用［2～8］。目前國內外日益重視白花丹藥材的應用和開發，除有效成分白花丹醌外，對其有效成分β－谷甾醇的研究報道較少。本實驗擬對野生白花丹藥材1～12月份的根、莖、葉中的β－谷甾醇含量進行測定，以期為白花丹野生變家種提供有用的實驗數據。

1 實驗材料

1.1 儀器 Waters 2695系列高效液相色譜儀（Waters公司），Empower色譜工作站，浙江大學N2000色譜工作站，Sedex－75型蒸發光散射檢測器（奧泰公司）；色譜柱為迪馬C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）。RE－52A型旋轉蒸發器。METTLER AE 240雙量程分析天平。

1.2 試藥 β－谷甾醇對照品（成都市藥檢所，供含量測定用）；甲醇為色譜純；所用提取試劑均為分析純。

1.3 藥材 實驗所用藥材樣品采自于白花丹最適產地云南西雙版納（中國醫學科學院藥用植物研究所南藥園），經西南民族大學劉圓教授鑒定。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱為迪馬C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為純甲醇；流速為1.0 mL／min；柱溫25℃；蒸發光散射檢測器檢測參數為漂移管溫度65℃，N2流速為2.5 L·min－1。色譜圖見圖1～圖2。

圖1 β－谷甾醇對照品HPLC色譜圖（A）

圖2 樣品HPLC色譜圖（B）

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取β－谷甾醇對照品10.3 mg，用甲醇溶解于50 mL容量瓶中，制成0.103 mg／mL的溶液作為對照品。

2.3 樣品溶液的制備 精密稱取白花丹藥材樣品約3 g，置于索氏提取器中，精密加入150 mL的甲醇溶液，索氏提取3 h，取出放冷，揮去溶劑，用甲醇溶解于25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 方法學考察

2.4.1 標準曲線的制備 分別精密吸取β－谷甾醇對照品溶液，依選定色譜條件，測定不同進樣量下β－谷甾醇的峰面積值，得回歸方程為：Y＝1.500 5 X＋5.683 6，r＝0.998（n＝6）。表明β－谷甾醇在0.103～2.575μg范圍內與峰面積值線性關系良好。

2.4.2 精密度試驗 分別精密吸取β－谷甾醇10μL，各重復進樣6次，得RSD為0.015%，結果表明精密度良好。

2.4.3 穩定性試驗 取同一樣品根溶液20μL，按選定色譜條件下于0、2、4、6、8 h測定樣品溶液中β－谷甾醇峰面積值，得RSD為0.029%，表明樣品穩定性良好。

2.4.4 重復性試驗 分別精密取同一白花丹根藥材6份，各約3 g，按樣品溶液制備項下方法制備樣品，按照選定的色譜條件測定6份樣品溶液中β－谷甾醇的含量，得RSD為1.284%。

2.4.5 加樣回收率試驗 精確稱取已知含量的白花丹藥材9份，各約3.0 g，分別加入濃度為0.131 mg／mLβ－谷甾醇對照品溶液，按樣品溶液制備方法制備并測定，結果見表1。

表1 β－谷甾醇加樣回收率試驗結果（n＝9）

2.5 樣品含量測定 取白花丹野生1～12月份藥材根、莖、葉按2.3項下樣品溶液的制備方法制備，進樣量為10μL，測定β－谷甾醇的含量，結果見表2。

表2 1～12月份根、莖、葉中β－谷甾醇的含量（n＝3）

3 小結與討論

野生白花丹1～12月份藥材根中β－谷甾醇含量變化范圍為0%～0.0681%，莖中β－谷甾醇含量變化范圍為0%～0.0874%，葉中β－谷甾醇含量變化范圍為0.0424%～0.1367%。白花丹藥材中β－谷甾醇含量在葉中含量最高，根中含量最低或未檢出，說明有些少數民族地區采用葉來抗炎、消腫是有科學依據的。野生白花丹葉可作為再生資源。由含量變化可看出β－谷甾醇含量在3、5、7、8月份最高，冬季含量最低。

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