bcl-2表達與腮腺黏液表皮樣癌病理組織學分級臨床分期的相關性研究

安 琦 南欣榮 趙志剛

(山西醫科大學口腔醫學系，山西 太原 030001)

黏液表皮樣癌（mucoepidermoid carcinoma ，MEC）是最常見的涎腺惡性腫瘤之一，約占惡性腫瘤的30%，發病部位多發于腮腺[1]。腫瘤可侵犯面神經，出現面癱，術后可復發。由于MEC發生部位不同，其分化程度、惡性程度、轉移、治療方法等方面也不同。近年來大量研究發現細胞凋亡抑制在腫瘤的發生、發展與轉移過程中有重要意義，受到學者的廣泛關注。

bcl-2基因即B細胞淋巴瘤/白血病基因2（B-cell ymphoma/leukemia-2）于1984年首次在濾泡型B淋巴瘤中發現。在腫瘤的發生過程中，bcl-2通過抑制細胞凋亡，延長細胞生存的時間，增加了細胞染色體畸變和病毒感染的概率，最終導致了細胞惡變和腫瘤的形成。有研究表明，大多人類腫瘤中都有bcl-2的高表達。還有學者認為bcl-2的高表達，不是某一種腫瘤的特征，而是腫瘤細胞的一種增生狀態的表現，并且認為bcl-2高表達是腫瘤進展和預后差的標志。本課題采用免疫組織化學法S-P測定人腮腺黏液表皮樣癌組織中bcl-2在不同的臨床分期、組織學分級中的表達，探討bcl-2異常表達與腮腺黏液表皮樣癌臨床分期、組織學分級的關系，可能為腮腺黏液表皮樣癌的早期診斷及預后提供一定價值。

1 材料與方法

1.1 標本來源

取自山西醫科大學第一醫院病理科2005至2010年存檔的45例腮腺黏液表皮樣癌蠟塊，其中男性24例，女性21例，年齡29～52歲，平均40.4歲。入院前患者沒有進行過其他相關治療，全部進行原發灶和頸淋巴結清掃手術，常規病理活檢診斷，每例標本都經過兩位經驗豐富的病理科醫師雙盲法閱片，并且取得的結果一致。HE染色切片根據WHO（2005）標準進行腫瘤的組織學分級。TNM分期根據國際抗癌聯盟（2002）的分類方法進行。

1.2 試劑

bcl-2兔抗人多克隆抗體，PV-6000-G，DAB顯色試劑盒（中國中杉金橋公司）；PBS緩沖液（pH=7.2～7.4，0.01mol/L）（福州邁新生物技術開發有限公司）。

1.3 實驗方法

應用免疫組織化學Envision PV-6000 Power Vision TM二步法染色，詳細步驟按S2P試劑盒說明操作。

1.4 結果判斷及統計學分析

bcl-2陽性反應為細胞質和/或細胞膜染成黃色。根據著色強度分為四級：深棕色（＋＋＋），棕色（＋＋），淡黃色（＋），未著色（－）。計算著色強度及著色細胞數在切片中的百分比：病變細胞未著色和著色細胞≤30%定為陰性表達，＞30%為陽性表達。

1.5 統計學處理

用χ2檢驗、確切概率法及相關分析對結果進行統計學處理。P＜0.05，認為差異有統計學意義，Kappa=1表示一致，Kappa=0表示不一致（SPSS17.0）。

2 結 果

2.1 bcl-2在正常腮腺組織和MEC的表達

正常腮腺組織中0%（0/40）（圖1）；腮腺黏液表皮樣癌中66.7%（30/45）bcl-2呈陽性表達（圖2）。結果顯示：bcl-2在MEC中的表達顯著高于正常腮腺組織（P＜0.05）（表1）。

圖1 正常腮腺組織中bcl-2陰性表達（SP×400）

圖2 腮腺黏液表皮樣癌中bcl-2陽性表達（SP×400）

表1 bcl-2在正常腮腺組織和MEC的表達

2.2 bcl-2表達與臨床病理特征之間的關系

結果顯示bcl-2表達差異與患者的性別、年齡無統計學意義（P＞0.05）；而與腫瘤的分化程度、大小及臨床分期之間有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 45例腮腺黏液表皮樣癌臨床病理特征與bcl-2表達的關系（例）病例 bcl-2

3 討 論

3.1 bcl-2基因的基本概況及作用機制

bcl-2基因屬于一類新的癌基因家族成員，可通過抑制不同類型細胞中的細胞凋亡，延長細胞活力而發揮作用，是許多因子作用的共同分子基礎。它是傳遞靶點，可導致細胞周期的停止或調亡，還可使有有絲分裂缺陷的細胞發生凋亡障礙[2]，其過表達已被證實存在于多種腫瘤中，其陽性高表達與腫瘤分化程度呈正相關。其表達產物有抑制細胞凋亡而導致腫瘤產生的功能[3]。研究發現bcl-2基因在各種細胞的激活和發育過程中表達，而在成熟的或走向凋亡的細胞中不表達或低表達。

關于bcl-2的生物學作用，目前研究揭示，bcl-2調控細胞凋亡的途徑有兩條：即細胞內抗氧化作用和抑制鈣離子跨膜運動。可以從Hock-enbery及Can等的研究中看出端倪。

3.2 bcl-2基因在腮腺黏液表皮樣癌中的表達

關于bcl-2在腫瘤中的表達情況，報道不盡一致。有資料表明，在前列腺中bcl-2的表達多見于腫瘤細胞分化差、惡性程度高的病例中；而在甲狀腺癌、乳腺癌中，bcl-2的表達多見于腫瘤細胞分化好而惡性程度較低的病例。本研究針對bcl-2在腮腺黏液表皮樣癌中的表達，發現bcl-2在正常腮腺組織的陽性表達率0%。bcl-2在正常腮腺組織中有表達的具體機理目前還不是很明確，因此我們推斷：bcl-2在維持正常組織的結構和功能方面具有一定的作用。bcl-2在在正常腮腺組織中的陽性表達率遠低于黏液表皮樣癌組織，正常腮腺腺體組與黏液表皮樣癌組之間差異顯著（P＜0.05）。提示大多數黏液表皮樣癌組織中存在bcl-2過度表達。由此可見，bcl-2主要在表皮樣細胞中表達，其次是中間細胞，黏液細胞僅在低分化癌中有少量表達。說明表皮樣細胞和中間細胞是分泌bcl-2的主要細胞，分化成熟的黏液細胞很少或不分泌bcl-2，表皮樣細胞和中間細胞發生浸潤轉移的可能性較大，這也可以解釋為什么低分化黏液表皮樣癌易發生浸潤和轉移。

3.3 bcl-2基因表達與腮腺黏液表皮樣癌臨床病理特征之間的關系

從本研究結果中我們看出：bcl-2表達差異與患者的性別、年齡之間無統計學意義；中分化和高分化組的癌組織中表達率低于低分化，有統計學意義，T1+T2組中表達率低于T3+T4癌組織，有統計學意義，Ⅰ～Ⅱ期的陽性表達率明顯低于Ⅲ-Ⅳ期，差別有統計學意義。這與賈林等在胰腺癌的研究結果相符[4]。由此可見，腫瘤病理級別越高，腫瘤細胞的基因會有更高的突變率，包括致癌基因的激活和抑癌基因的失活，因此由基因改變引起的bcl-2表達增強亦會更加明顯。

基因的表達及聯合檢測在腫瘤早期診斷和預后判斷中的作用是近年來研究的熱點，從凋亡基因這個方面對基因表達進行分析，探討其在腫瘤產生中的生物學意義，能更好的對黏液表皮樣癌治療方案進行選擇以及預后評估。因腫瘤的產生可受多因素影響，所以bcl-2在腫瘤中的相互關系及作用機理，是否還協同其他因子的共同作用等，還需要進一步研究。

[1]吳運堂,趙燕平,趙福運,等.口腔頜面部惡性腫瘤肝轉移(70例報告分析)[J].中華口腔醫學雜志,1989,37(24):130-133.

[2]Can RZ,Sommer A.Human basic FGF gene encodes four polypeptides:Three inimat translation from nonAUG codens[J].Proc Natl Acad Sci USA,1989,86(11):3978.

[3]Kishi H,Igawa M,Kikuno N,et al.Expression of the Survivin gene inprostate cancer:correlation with clinicopathological characteristi cs,proliferalive activity and apoptosis[J].J Uro1,2004,171(5):1855-1860.

[4]Suzuki A,Ito T,Kawano H,et al.Survivin initiates procaspase329/p21 complex formation as a result of interaction with CdK4 to resist Fas-mediated cell death[J].Oncogene,2000,19 (10):1346-1353.