高效液相色譜法測(cè)定半夏厚樸湯不同煎液中和厚樸酚含量＊

馮 華，聶明華，羅秀瓊，王祥培，鄒孔強(qiáng)，令狐昌敏

(1.貴州省遵義市藥品檢驗(yàn)所，貴州 遵義 563002; 2.貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽 550002)

半夏厚樸湯出自張仲景《金匱要略》，由半夏、厚樸、茯苓、生姜、蘇葉組方，具有行氣散結(jié)、降逆化痰等之功效。用分煎法與合煎法制備的中藥復(fù)方湯劑，有效成分含量有何變化，藥理作用有何變化，一直是中醫(yī)藥理論和臨床實(shí)踐中值得探討的課題。特別是近年來單味中藥精制顆粒逐漸在臨床上推廣應(yīng)用，更引起了國家對(duì)單味中藥精制顆粒的重視。筆者以中藥經(jīng)方半夏厚樸湯中的有效成分和厚樸酚為指標(biāo)，比較用合煎法與分煎法制得的該方湯劑中和厚樸酚含量差異，探索中藥復(fù)方湯劑不同制法對(duì)有效成分溶出量的影響，為單味中藥精制顆粒應(yīng)用于臨床提供一些理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

Waters1525型高效液相色譜儀，KQ-300DE型超聲儀。半夏、厚樸、茯苓、生姜、蘇葉5味藥材飲片由遵義醫(yī)藥有限公司提供，經(jīng)遵義市藥品檢驗(yàn)所鄧順超副主任中藥師鑒定均符合2010年版《中國藥典(一部)》收載品種標(biāo)準(zhǔn);和厚樸酚對(duì)照品(批號(hào)為110730-2003609，中國藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Diamonisl C18柱 (200 mm×4.6 mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇 -水(78∶22);流速:1 mL/min;檢測(cè)波長:294 nm; 柱溫:25℃[1];進(jìn)樣量:10μL。在此條件下的色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

對(duì)照品溶液:稱取和厚樸酚對(duì)照品11.6 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

合煎液供試品溶液(傳統(tǒng)煎煮法):稱取藥材飲片半夏12.0 g，厚樸9.0 g，茯苓12.0 g，生姜9.0 g，蘇葉6.0 g，加8倍量的水煎煮，保持微沸30 min，倒出煎液;藥渣再加8倍量的水煎煮20 min，合并兩次煎液，減壓干燥成干粉。稱取相當(dāng)原藥材處方量的干粉，置100 mL量瓶中，用開水溶解定容至刻度，精密吸取5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，稱重，超聲處理(功率250W，頻率20kHz)25 min，取出，放冷，加甲醇補(bǔ)足質(zhì)量，搖勻，取續(xù)濾液，用0.45μm的微孔濾膜濾過，即得合煎液供試品溶液。

分煎液供試品溶液:稱取上述處方量的藥材半夏、厚樸、茯苓、生姜、蘇葉，分別加8倍量的水，以合煎液相同時(shí)間煎煮2次，制備各藥材的煎液，減壓干燥成干粉。稱取相當(dāng)原藥材處方量各藥材的干粉混合均勻，同合煎液法制得分煎液供試品溶液。

陰性對(duì)照品溶液:再分別按供試品溶液制備法制備不含厚樸藥材的合煎液、分煎液的陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:分別精密稱取和厚樸酚對(duì)照品，用甲醇稀釋配制成質(zhì)量濃度分別為 1.393，1.856，2.320，2.786，3.248，3.712 g/L的系列和厚樸酚對(duì)照品溶液，各精密吸取10μL，按上述色譜條件依次測(cè)定，以峰面積積分值(A)對(duì)進(jìn)樣量(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=2.0×106X-14 917，r=0.999 3(n=6)。結(jié)果表明，和厚樸酚進(jìn)樣量在13.93～37.12μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積的 RSD=0.5%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別于 0，4，8，16，24 h 時(shí)測(cè)定。結(jié)果含量的 RSD合煎液為1.2%，分煎液為1.5%，表明兩種供試品溶液在24 h內(nèi)均穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一樣品各5份，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果合煎液的 RSD=0.8%(n=5)，分煎液的 RSD=1.0%(n=5)，表明方法重復(fù)性好。

加樣回收試驗(yàn):按分煎液、合煎液制備項(xiàng)下制備半夏厚樸湯傳統(tǒng)湯劑及其配方顆粒湯劑各6份，按進(jìn)樣量10μL折算，精密加入和厚樸酚對(duì)照品 3 個(gè)質(zhì)量濃度(10.40，13.00，15.20 μg/mL)，進(jìn)行加樣回收試驗(yàn)，濾液過0.45μm濾膜，并按色譜條件進(jìn)樣，依法測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 和厚樸酚加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

分別按分煎液、合煎液供試品溶液制備方法制備溶液并測(cè)定含量，求樣品平均含量。結(jié)果和厚樸酚在一個(gè)復(fù)方中的含量分別為合煎液1.580 mg、分煎液1.596 mg?？梢?，相同藥材不同方法制備的半夏厚樸湯中，分煎液、合煎液中和厚樸酚的含量沒有差異。

3 討論

采用高效液相色譜法測(cè)定中藥復(fù)方制劑中的和厚樸酚，可用多種不同組成的流動(dòng)相系統(tǒng)[2-5]。本試驗(yàn)選擇藥典方法，和厚樸酚與雜質(zhì)峰能達(dá)到基線分離。

厚樸有燥濕消痰、下氣除滿等功效，故對(duì)半夏厚樸湯合煎湯劑與分煎湯劑進(jìn)行了和厚樸酚含量的對(duì)比研究。從研究結(jié)果可以看出，分煎液、合煎液中有效成分和厚樸酚的含量無變化。

本試驗(yàn)表明，在相同條件下，半夏厚樸湯中和厚樸酚的含量在分煎、合煎煎煮過程中無其他影響因素。本試驗(yàn)研究可為中藥精制配方顆粒應(yīng)用于臨床提供一些理論依據(jù)。

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