PFC聯合QHS抑制試驗在食管癌中的診斷價值

肖錦華

（無錫市第三人民醫院 檢 驗科，江蘇 無 錫214041）

食管癌是指由食管鱗狀上皮或腺上皮異常增生所形成的惡性病變，其發展一般經過上皮不典型增生、原位癌、浸潤癌等階段。食管鱗狀上皮不典型增生是食管癌的重要癌前病變，由不典型增生到癌變一般需要幾年甚至十幾年。正因為如此，一些食管癌可以早期發現，并可以完全治愈［1］。吞咽不暢或有異物感的患者應盡早行胃鏡檢查，以便發現早期食管癌或癌前病變［2］。對無條件開展或是無法耐受的患者，有無其他方法可供選擇？這是醫患一直都關心的問題。本研究應用空斑形成抑制實驗（PFC）聯合體外溶血素分泌測定（QHS）對食管癌進行診斷，觀察兩種方法在食管癌診斷中的的價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 實驗對象 選取2008年1月～2011年10月我院腫瘤科收治的食管癌患者120例作為食管癌組，男68例，女52例，年齡35～68歲，平均年齡（47.2±5.6）歲，均由病理檢查確診；另選同期60例健康志愿者作為對照組，男30例，女30例，年齡36～70歲，平均年齡（46.7±5.1）歲，均由我院統一招募。兩組患者性別、年齡等比較，無明顯差異，具有可比性。

1.2 PEC方法（瓊脂固相法）

1.2.1 實驗材料 玻璃器皿（7×1.5 cm）；1 ml注射器和青霉素小瓶；水浴（47－49℃ ）；Hanks＇液；胎牛血清 （56℃30分鐘滅活，并經羊紅細胞吸收）；瓊脂或瓊脂糖（表層基0.7%；底層基1.4%；用Hanks＇液配制 ）；右旋糖酐（DEAE－dxtran分子量50萬，用蒸餾水配置10 mg／ml）；抗－Ig血清（測定間接空斑用）；20%綿羊紅細胞懸液（Hanks＇液配制）；補體：豚鼠血清（用前經綿羊紅細胞吸收）

1.2.2 試驗方法 （1）將溶化的底層瓊脂傾注平皿形成一薄層，使其凝固，備用；（2）將每管含2 ml表層基的試管加熱溶化后，放入47－49℃水浴內保溫；（3）免疫小鼠脾細胞懸液的制備：將免疫小鼠腹腔或靜脈注射綿羊紅細胞4×108個。測定直接溶血空斑用免疫后4天的小鼠。測間接空斑用免疫后10天的小鼠。拉脫頸椎致死，取出脾臟，用200目鋼網研磨過濾，細胞計數并檢查活細胞的百分率；（4）實驗平皿的制備：將底層平皿和所有試劑預溫40℃左右。于水浴內保溫的表層基中加入以下試劑：胎牛血清0.1 ml、DEAE－右旋糖酐0.1 ml、適當稀釋的抗－Ig血清0.1 ml、20%羊紅細胞0.1 ml和脾細胞懸液0.1 ml充分混勻，傾注于鋪有底層之平皿內，在水平臺上令表層基鋪平凝固后，37℃1小時，然后每個平皿加1：10稀釋的補體1.5－2.0 ml，均勻覆蓋其表面，再次溫育30分鐘，即可進行空斑計數。

1.3 QHS抑制試驗

1.3.1 實驗材料 SRBC免疫小鼠；新鮮SRBC溶液 （1.5×108／ml）；經SRBC吸收的補體溶液（來自豚鼠血清，經SRBC吸收去除非特異性抗體）。

1.3.2 實驗方法 （1）制備脾細胞：①斷頸處死SRBC免疫的小鼠；②取脾，以 Hank’s液漂洗；③經200鉬銅網，以針拴研磨脾臟成單細胞懸液；④收集細胞懸液，加適量 Hank’s洗滌；⑤離心1 500 rpm，5 min，棄上清；⑥細胞沉淀中加入4.5 ml蒸餾水，用力混勻40 s；⑦迅速加入0.5 ml 9%NaCl；⑧離心1 500 rpm，5 min；⑨棄上清，加入1.2 ml Hank’s溶液。（2）抗原－抗體－補體反應：①加1ml SRBC溶液，加1 ml補體，徹底混勻；②37℃孵育1 h；③離心，3 000 rpm，5 min；④分光光度計檢測上清液413 nm波長下的吸光值。（3）計數。

1.4 統計方法 采用13.0統計軟件包進行統計，以均數±標準差表示，組間比較采用t檢驗進行統計學分析；計數資料應用Ridit分析進行統計。

2 結果

2.1 受檢者血清PFC抑制陽性率和血清PFC抑制率均數比較

以血清PFC抑制率50%為上限，大于50%則為陽性。食管癌組陽性率高達84.17%，對照組陽性率僅為11.67%。兩組陽性率經Ridit檢驗，差異有統計學意義（P＜0.01）。見表1。食管癌組血清PFC抑制率均值為0.64%，而對照組血清PFC抑制率為0.27%，經T檢驗，P＜0.05，說明兩組血清PFC抑制率比較有統計學意義。見表2。

表1 PFC抑制情況比較

表2 血清PFC抑制率均數比較

2.2 兩組QHS抑制率均數比較

食管癌組血清QHS抑制率均值為0.68%，而對照組血清QHS抑制率為0.35%，兩組血清QHS抑制率比較，P＜0.05，差異有統計學意義。見表3。

表3 血清QHS抑制率均數比較

3 討論

食管癌是最常見的惡性腫瘤之一。根據1990年－1992年中國惡性腫瘤統計分析發現：食管癌的粗死亡率為17.19／10萬，占全部腫瘤死因的第4位，比例為16.4%。流行病學研究顯示，吸煙和重度飲酒是引起食管癌的重要因素［3］。國外研究顯示，對于食管鱗癌，吸煙者的發生率增加3－8倍，而飲酒者增加7－50倍。在我國食管癌高發區，主要致癌危險因素是致癌性亞硝胺及其前體物、某些霉菌及其毒素。食管癌高危人群主要是處于食管癌高發區、年齡在40歲上、有腫瘤家族史或者有食管癌的癌前疾病，或癌前病變者［4，5］。

根據臨床癥狀、體征及影像學檢查，符合下列之一者即可進行臨床診斷：吞咽食物時有哽噎感、異物感、胸骨后疼痛或出現明顯的吞咽困難，食管造影發現食管粘膜局限性增粗、局部管壁僵硬、充盈缺損或龕影等表現。吞咽食物時有哽噎感、異物感、胸骨后疼痛或出現明顯的吞咽困難，胸部CT檢查發現食管管壁的環形增厚或不規則增厚。臨床診斷食管癌病例需經病理學檢查確診［6］。

根據臨床癥狀、體征及影像學檢查，經細胞學或組織病理學檢查，符合下列之一者可診斷為食管癌：纖維食管鏡檢查刷片細胞學或活檢陽性；臨床診斷為食管癌，食管癌病變（鎖骨上淋巴結、皮膚結節）經活檢或細胞學檢查明確診斷者。但是，因于病理檢查的技術難度及患者的耐受程度，以及可能在活檢中并不能取到真正的病變部位等局限性，在臨床上尋求一種可靠的或是可供參考的診斷方法非常有意義。本文采取PFC聯合QHS抑制試驗檢查食管癌，結果表明，其陽性檢測率均明顯高于健康人（P＜0.05）。

PFC測定技術又稱溶血空斑試驗［7］，是一種體外檢測單個抗體形成細胞（漿細胞）的方法。自從1963年Jerne和Nordin首先建立PFC測定技術以來，使免疫學方法得到很大的發展。特別是間接溶血空斑測定法的建立，更擴大了本實驗的應用范圍。它不僅可以測定產生Ig M類的抗體產生細胞，而且還可以檢測產生其他各類免疫蛋白及其亞類的抗體形成細胞。它不僅可以作為免疫基本理論研究的有力工具，而且還可以作為臨床篩檢抗腫瘤新藥以及研究中藥對機體免疫功能的影響（免疫增強劑和免疫抑制劑）的特異指標。1983年王建光等［8］應用此法測定胃癌病人血清抑制活性，獲陽性結果，與本研究的結果一致，提示此方法是一種可供選擇的方法。

［1］李秀敏，趙志敏，張淵智，等.食管癌高發區食管癌患者遺傳易感性對生存期的影響［J］.實用醫學雜志，2010，26（4）：675.

［2］徐寶宏，陳雪華，李 靜，等.無痛胃鏡檢查的臨床觀察［J］.中華全科醫師雜志，2007，6（9）：558.

［3］李 顥，李會慶.食管癌的流行病學研究進展［J］.中華胃腸外科雜志，2009，12（1）：96.

［4］賀宇形，李建濤，劉江惠，等.食管癌高發區人群免疫功能與食管癌發病相關性研究［J］.中華預防醫學雜志，2009，43（1）：73.

［5］代麗萍，王凱娟，張建中，等.以人群為基礎的食管癌高發區危險因素病例對照家系研究［J］.中華預防醫學雜志，2009，43（7）：597.

［6］丁以國，沈振亞，余云生，等.同時性食管重復癌27例的診斷與治療分析［J］.現代腫瘤醫學，2009，17（6）：1098.

［7］王 霞，劉 靜，趙汝松，等.復雜環境介質中全氟化合物的分析檢測現狀［J］.光譜實驗室，2008，25（6）：1064.

［8］王建光，李一鳴，葉維曾，等.胃癌血清中免疫抑制因子的初步探討［J］.上海免疫學雜志，2011，3：53.

［9］鄧家剛，吳 光，運晨霞，等.達肝清對小鼠免疫功能影響的實驗研究［J］.中國現代應用藥學，2008，25（4）：278.