結直腸癌組織真核細胞起始因子4E和基質金屬蛋白酶－9的表達及臨床意義

周 平，徐啟革

（淄博市第一醫院 病 理科，山東 淄 博255200）

真核細胞起始因子4E（eIF4E）為蛋白生物合成的始動因子，在翻譯控制中發揮著重要作用，參與細胞生長調節，并具有抗凋亡作用［1－3］。新近多項研究發現eIF4E與多種惡性腫瘤有密切聯系，多種惡性腫瘤中有高表達的eIF4E，可作為一些腫瘤惡性進展的分子標記及預后指標［4－6］。基質金屬蛋白酶（MMPs）可以降解基底膜，被認為在腫瘤的侵襲和轉移中起到重要作用。eIF4E在結直腸癌中的表達與其臨床特征的研究甚少，而在結直腸癌中eIF4E與基質金屬蛋白酶－9（MMP－9）的表達的關系如何目前相關的研究缺如。本研究擬探討結直腸癌患者組織eIF4E和各項臨床特征以及MMP－9的表達及兩者的相關性。

1 對象與方法

1.1 研究對象

2008年1月至2011年12月在我院收治的確診結直腸癌的患者80例，所有患者經過手術切除標本或大結腸鏡活檢組織的病理檢查確診。男52例，女28例，平均年齡51.2（35±63）歲。有淋巴結轉移34例，未轉移46例。Dukes分期：A期22例，B期35例，C期23例。低分化腺癌45例，高中分化腺癌35例。根治性切除65例，姑息性切除15例。根治術后出現復發轉移10例。所有患者術前均未接受、放化療。

1.2 eIF4E及 MMP－9的免疫組化

取上述入選的結直腸癌患者的癌組織和癌旁正常組織（距癌組織5 cm以上）制成石蠟標本。eIF4E及MMP－9兔抗人多克隆抗體購于sctacruz公司，DAB及兔源組化試劑盒購自丹麥Dako公司。石蠟標本連續切片3μm，高壓修復抗原和過氧化氫酶滅活處理后，分別加對應的一抗4℃過夜。PBS沖洗3次，每次5 min后加入二抗，室溫孵育30 min，DAB顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，掌握染色時間，蘇木素復染，脫水，中性樹膠封片。陰性對照采用PBS代替一抗，陽性對照采用已知的肺癌組織切片。

1.3 結果判定

eIF4E及 MMP－9均主要定位于細胞漿，陽性結果以背景清晰并在細胞漿中出現棕黃色顆粒者判斷為陽性。根據文獻報道的方法，結合陽性細胞所占百分百和染色強度進行半定量分析，在高倍鏡下隨機選10個不同視野，每個視野計算100個細胞，取平均值。染色強度按下列標準評分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為黃色，3分為棕黃色。染色的陽性細胞所占百分比評分：0分為陰性，1分為陽性細胞≤25%，2分為26%－50%，3分為51－75%，4分為＞75%。結合染色細胞百分比和染色強度分為：染色強度與陽性細胞所占百分比乘積大于3分為（＋），6－9分為（＋＋），大于9分為（＋＋＋），低于3分為（—）。

1.4 統計學分析

應用SPSS13.0統計軟件進行統計分析。計量資料用均數± 標準差表示，兩組比較采用t檢驗。相關性分析采用Spearman等級相關分析方法。P＜0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 結直腸癌患者組織eIF4E和MMP－9的表達

免疫組化結果顯示結直腸癌患者癌組織EIF4E和MMP－9的表達較癌旁正常組織明顯升高，其表達主要定位于胞漿。本組資料，EIF4E表達的陽性率為100%，MMP－9表達的陽性率為81.25%。

2.2 結直腸癌患者eIF4E和各項臨床特征和MMP－9的關系

結直腸癌患者eIF4E的表達與年齡、腫瘤部位、大小、分化程度、臨床分期等無關，與浸潤深度和有無轉移差異有顯著性（P＜0.05）。見表1。

結直腸癌患者eIF4E和MMP－9表達的關系見表2，相關分析結果顯示eIF4E和MMP－9表達呈正相關（r＝0.358，P＝0.042）。

3 討論

eIF4E是一分子量為25KD的多肽，即m RNA帽結合蛋白，在蛋白的起始合成階段起著重要的作用，與多種惡性腫瘤的發生發展和侵襲轉移有關。發現在甲狀腺乳頭狀癌中存在高表達的eIF4E，明顯高于癌旁的正常組織和良性腺瘤病變，并且高表達的eIF4E與是否發生甲狀腺外侵潤和淋巴結轉移有關［7］。另一項有關于膽管癌組織的研究則發現膽管癌組織中的eIF4E的表達是與腫瘤組織分化程度、手術方式和有無浸潤轉移明顯相關的［8］。有關大腸癌方面的研究證實了大腸癌組織eIF4E的高表達是發生于癌癥的早期［9］。國內外研究證實eIF4E在大腸癌組織的表達明顯高于癌旁組織和良性病變組織，并且其表達的陽性率與侵潤深度有關，與年齡、性別、腫瘤位置、大小等均無關［9］。本研究結果類似，本組資料顯示結直腸癌患者eIF4E的表達與年齡、腫瘤部位、大小、分化程度、臨床分期等無關，與浸潤深度和有無轉移差異有顯著性。雖然在本組資料eIF4E的表達與臨床分期統計學上無關，但是不同的臨床分期eIF4E的表達差異具有一定的趨勢，這可能與本組資料的樣本數少有關。提示了結直腸癌患者eIF4E的表達與腫瘤的惡性程度有關，可以作為結腸癌惡性程度的一個評價指標，在腫瘤的發生發展中起著重要的作用。

表1 結直腸癌患者eIF4E和各項臨床特征的關系

表2 結直腸癌患者eIF4E和MMP－9表達的關系

基底膜和細胞外基質（Extracellular matrix，ECM）對腫瘤的轉移起著屏障功能。MMP在腫瘤的擴散與轉移中起重要作用。目前普遍認為MMP－9在惡性腫瘤的浸潤和轉移中起著重要作用。MMP－9屬于MMPs家族，是一種金屬離子依賴的蛋白酶，并且是一種IV型膠原酶，可降解ECM的IV型膠原，除了參與體內多種生理及病理過程，還對腫瘤侵襲及血管形成具有促進作用，研究已經證實它的異常高表達與多種惡性腫瘤的轉移和預后密切相關［10－12］。MMP－9參與腫瘤的侵襲和轉移主要與下面幾方面作用有關：降解ECM，破壞ECM的完整性；促進腫瘤的新生血管形成；調節細胞粘附和生長。既往的研究已經證大腸癌患者癌組織MMP－9的表達水平與其臨床分期、是否發生淋巴結轉移和腫瘤的侵潤深度有關。MMP－9可以作為反映大腸癌侵襲能力的一個指標［13－16］。

腫瘤的發生和發展是多基因、多因素共同作用的結果，是由于腫瘤細胞生長失控以及凋亡基因、凋亡抑制基因功能的改變等多種原因引起的。目前在大腸癌患者中eIF4E與MMP－9表達的關系如何并不清楚。本研究結果顯示了結直腸癌患者癌組織eIF4E和 MMP－9的表達較癌旁正常組織明顯升高。本組資料，eIF4E表達的陽性率為100%，MMP－9表 達 的 陽 性 率 為 81.25%。eIF4E 和MMP－9表達呈正相關。即eIF4E的高表達會導致MMP－9表達的升高，提示了如果通過有效的措施抑制或降低大腸癌患者eIF4E的表達可能可以降低MMP－9的表達，從而減少腫瘤血管的形成和減少基質降解導致的腫瘤侵襲和轉移。最終可以降低腫瘤的生長速度和減少轉移率，有利于提高患者的生存率。本研究的意義在于可以為大腸癌的治療提供新的治療方向和理論依據。

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