血清FS及CA125用于卵巢癌診斷的比較研究

陳芳芳，任 平，于 宏，柳忠輝，侯文佳，孫 洋，牛立慢，崔雪玲＊

（1.吉林大學中日聯誼醫院 唐 敖慶特聘教授實驗室，吉林 長 春130033；2.吉林大學第一醫院，長春130021；3.吉林大學白求恩醫學院免疫學系，長春130021）

卵巢癌是女性最常見惡性腫瘤，預警主要是檢測腫瘤標志物CA125，但有關研究顯示，CA125的檢測并不能有效地降低死亡率［1］。因此，尋找更有效的卵巢癌腫瘤診斷標志物具有重要意義。卵泡抑素（Follistatin，FS）最初是從豬和牛的卵泡液中分離獲得的單鏈糖蛋白，能夠抑制垂體前葉腺細胞分泌卵泡刺激素（FSH）［2，3］。研究發現，FS不僅在性腺組織表達，在外周血中也能檢測到FS成熟蛋白的分泌，血清中FS水平變化與女性妊娠以及腫瘤等有關［4，5］。為了明確外周血FS在卵巢腫瘤診斷中的意義，本研究通過比較卵巢癌患者外周血FS及CA125水平變化及二者用于卵巢癌診斷的敏感度和特異性，進而闡述FS在臨床診斷卵巢癌中的意義。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 FS ELISA檢測試劑盒購自R＆D（Minneapolis，MN，USA），CA125電化學發光試劑盒購自羅氏公司（Mannheim，GER）。

1.2 研究對象 選擇自2009年1月至2011年12月在吉林大學第一醫院及中日聯誼醫院住院的經病理和細胞學診斷證實的卵巢癌及卵巢囊腫患者。對照組來自吉林大學第一醫院體檢中心體檢的健康女性。

1.3 血清樣本處理 血清采自患者入院后第二日晨時空腹靜脈血，經3 000 r／min離心10 min，分離血清，－80℃保存待測。

1.4 ELISA法檢測血清FS 按照試劑盒操作說明檢測血清中FS水平，測定450 nm波長光吸收值，根據標準曲線計算血清FS含量。

1.5 電化學發光法檢測血清CA125 采用電化學發光雙抗體夾心法檢測血清中CA125水平。首先在標本中加入生物素化的抗CA125亞單位的單克隆抗體和釕標記的抗CA125另一亞單位單克隆抗體并將反應體系混勻，形成雙抗體夾心抗原抗體復合物；然后添加鏈霉親和素包被的磁性微粒進行孵育，抗原抗體復合體與磁珠通過生物素和鏈霉親和素的作用結合。將反應液吸入測量池中，通過電磁作用將磁珠吸附在電極表面，給電極加以一定的電壓，使復合體化學發光，并通過光電倍增器測量發光強度，根據標準曲線計算CA125含量。

1.6 統計學方法 所得數據采用IBM SPSS（version 19.0，IBM Inc.，NY，USA）統計軟件進行分析。采用ANOVA統計方法比較各組數據之間的差異，ROC曲線分析CA125及FS在卵巢癌診斷中的工作能力，以健康對照組95%可信區間衡量CA125、FS的敏感度和特異性，P≤0.05具有統計學意義。

2 結果

2.1 研究對象臨床特征

健康對照組60例，均為健康成年女性，卵巢囊腫患者40例，卵巢癌患者45例。各組在年齡上比較差異無顯著性（P＞0.05）。見表1。

表1 實驗分組及臨床資料

2.2 卵巢癌患者外周血FS及CA125水平比較

分別采用ELISA和電化學發光法檢測健康成年女性、卵巢囊腫及卵巢癌患者血清FS及CA125水平，結果如圖1所示，卵巢癌患者外周血FS及CA125水平明顯高于健康對照組及卵巢囊腫，P＜0.01。不同的是，卵巢囊腫患者外周血CA125水平明顯高于健康對照組，而FS水平較健康對照組無明顯差異。

圖1 ELISA法及電化學發光法檢測卵巢癌、卵巢囊腫、健康對照組外周血FS及CA125水平

2.3 外周血FS、CA125檢測用于卵巢癌診斷敏感性及特異性比較 以對照組95%可信區間判斷CA125、FS用于卵巢癌診斷的敏感性和特異性，結果如表2所示，血清CA125檢測敏感性（77.8%）高于FS（53.3%），而血清FS檢測特異性（93.3%）遠高于CA125（65%）。

表2 各組血清FS、CA125陽性率

2.4 共同檢測卵巢癌患者血清FS和CA125結果比較 CA125是常用的卵巢癌診斷血清學標記物，因此，我們進一步分析卵巢癌患者血清FS水平與CA125水平的相關性。結果表明，在24例CA125陽性的卵巢癌患者中有23例FS呈陽性，這表明卵巢癌患者血清FS和CA－125密切相關（23／24＝95.8%）。由于血清CA125在良性卵巢囊腫患者有較高的假陽性率，因此，我們還檢測了16例CA125陽性的卵巢囊腫及健康對照者血清FS水平。結果顯示，這16血清FS均為陰性。此外，利用ROC曲線評價FS、CA125用于卵巢癌診斷的準確性，結果如圖2所示，FS應用于卵巢癌診斷時曲線下面積（0.902）與 CA125相似（0.886），特異性高于 CA－125。上述結果表明，血清FS可能被用來作為卵巢癌診斷的腫瘤標志物，與CA125聯合檢測有助于提高診斷特異性。

圖2 外周血FS及CA125水平用于卵巢癌診斷的ROC曲線

3 討論

卵巢癌是女性生殖系統常見的惡性腫瘤，因早期無癥狀、發現的時候大多數患者已處于晚期、死亡率高而被稱為“安靜的”殺手。決定卵巢癌患者生存率最重要的因素就是診斷的階段，卵巢癌局限于子宮時5年生存率為70－82%。然而，大多數卵巢癌患者診斷時已處在疾病的進展期，5年生存率僅為15%［6］。

目前卵巢癌的臨床診斷主要包括以CA125為主的腫瘤標記物的血清學檢測以及陰道鏡等侵入性檢查。CA125是女性生殖系統腫瘤的常規檢測指標之一，通常表達于子宮內膜、子宮頸及輸卵管以及腹膜、心包膜、胸膜的上皮細胞。盡管CA125被廣泛用于檢測生殖系統腫瘤，但仍存在許多挑戰，一個首要的問題就是對于早期卵巢癌的敏感性過低和假陽性高，因為在排卵或者子宮內膜移位、子宮肌瘤及其他一些良性腫瘤時CA125也會同時升高。另外，識別CA125檢測陽性的指標 （30 or 35 U／m L）是通過有臨床癥狀的患者建立起來的，該指標不適合用于篩查無癥狀的卵巢癌患者。Saundra S.Buys等人［1］花費了8年觀察CA125及陰道鏡作為篩查手段對卵巢癌死亡率的影響，共對39，105個婦女進行了4年以上的每年一次的篩查，同時選取了39，111個婦女作為對照。研究結果表明，該篩查手段與對照組相比并沒有降低死亡率，69%經該篩查項目診斷的卵巢癌患者已經處于晚期，稍稍低于對照組，說明檢測CA125及陰道鏡檢測并不能診斷早期卵巢癌；如果把CA125血清水平陽性閾值降低（低于常規35 U／ml），則有可能有助于卵巢癌早期診斷，但是會因為更多的假陽性診斷而花費不必要代價——更多的侵入性檢查及其相關的痛苦。在日本的靜崗市，同樣采用CA125及陰道鏡作為篩查手段歷時9年對60，000多日本女性進行卵巢癌的篩查，結果表明，干預組有35人患病而對照組有32人患病，同樣提示該篩查手段對腫瘤的早期診斷無價值［7］。本實驗研究結果表明，卵巢癌患者外周血CA125檢測陽性率為77.8%，但是卵巢囊腫患者外周血CA125檢測陽性率也很高，為25%，健康對照組陽性率為10%?？梢?，外周血CA125用于卵巢癌診斷時其假陽性率較高，必定會給良性疾病患者甚至是健康人帶來不必要的精神和經濟負擔以及不必要的侵入性檢查引起的創傷。可見，尋找有效的卵巢癌診斷指標具有重要的意義。

FS與激活素的相互作用共同調控卵巢排卵［8］和卵巢損傷上皮的修復［9］與細胞增殖［10，11］，FS與激活素共同存在、共同表達構成一個維持卵巢正常生長的平衡系統，其中一項的過度表達或另一項的減少引起的激活素－FS系統的失衡，將伴隨卵巢生理過程的失調和腫瘤的發生［12－16］。本研究在部分腫瘤患者外周血中檢測到FS水平升高，以卵巢癌患者的升高最明顯，陽性率最高（53.3%），肝癌患者FS的陽性率為25%［17］，其他腫瘤患者的FS水平與健康人比無顯著差異。因此，外周血FS有可能成為一種有效的臨床輔助卵巢癌診斷的腫瘤指標物。我們選取臨床常用的卵巢癌診斷血清標記物CA125作為對照，探討血清FS用于卵巢癌診斷的準確性。

與CA125相比，血清FS檢測陽性率（53.3%）雖然略低于CA125，但其特異性遠遠高于CA125。在60例健康人及40例卵巢囊腫患者中，血清FS的檢測特異性分別為98.3%和95%，而CA125的特異性只有75%；FS在不同病理類型卵巢癌中表達強度不同［17］，而CA125表達強度與卵巢癌分型無關，可見FS除了診斷特異性高于CA125外，對卵巢癌的臨床病理分型也具有一定的輔助診斷意義。同時檢測卵巢癌、卵巢囊腫、健康對照組外周血FS及CA125水平表明，卵巢癌患者血清FS和CA－125密切相關，相關性為95.8%，ROC曲線結果同樣說明，外周血FS檢測用于卵巢癌的診斷的工作能力與CA125相似，特異性略高于CA125，證明FS是一個很有意義的卵巢癌診斷血清學標志物。

綜上所述，本研究證實，具有廣泛組織分布，參與多種生物學作用的FS在卵巢癌患者外周血中高表達，外周血FS水平測定與CA125一樣，對卵巢癌的臨床診斷具有一定的價值，與CA125聯合應用，有助于提高卵巢癌診斷的特異性。

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