紅細胞膜免疫磁珠檢測成分血中抗A／抗B的研究

李 巖，吳曉葵，牟忠梅，劉 穎，王 超，李 勇＊

（1.長春市中心血站，吉林 長 春130031；2.吉林市中心醫院；3.長春博德生物技術有限責任公司）

多年來，O型血一直被視為萬能供血者，且被廣泛使用。但近年來，越來越多的關于O型血（血漿、血小板）進行異型輸血時，由于其血漿中含有高效價抗體（效價≥128）而引起溶血性輸血反應的報道。因此，歐洲、美國的一些輸血組織建議進行獻血員的抗體效價篩查，并將具有高效價抗體的O型成分血做以標識，僅供給O型患者使用［1，2］。目前，臨床測定抗體效價所采用的試劑均為新鮮紅細胞，應用的方法為試管法、微柱凝膠法。筆者采用了紅細胞膜免疫磁珠試劑進行抗體效價的檢測，紅細胞膜免疫磁珠是將新鮮紅細胞內容物去除，填充入納米磁性顆粒制備而成，其特點是不具有生命活性，但其ABO血型抗原性卻與新鮮紅細胞相同。膜免疫磁珠保存期長，且可將紅細胞抗原標準化，在進行抗體檢測時，可避免由于試劑紅細胞廠家不同而造成檢測結果的不一致。我們應用此試劑檢測抗體效價并與現有方法進行比較。同時將待檢樣本稀釋并檢測，以確定應用紅細胞膜免疫磁珠檢測標本中是否含有高效價抗體的方法，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 ABO血型反定型試劑（人紅細胞）、微柱凝膠卡購自長春博迅生物技術有限責任公司；紅細胞膜免疫磁珠購自長春博德生物技術有限責任公司；程控磁化振蕩器、血型血清學多用途離心機由長春博研科學儀器有限責任公司提供；待檢標本來源于吉林省血液中心；其他試劑均為國產分析純。

1.2 方法

1.2.1 效價、特異性測定 用試管法、微柱凝膠法及紅細胞膜免疫磁珠法進行60份血清樣本（30份A型，30份B型）的檢測。在試管中，用生理鹽水將同一份血漿標本倍比稀釋，分別用三種方法檢測，比較抗體效價。同時用陰性血清進行特異性檢測。

結果判定：以產生1＋凝集強度的反應最高稀釋倍數倒數為其效價。特異性檢測為陰性。判斷標準如下［3］：

試管法1＋，很多小的凝集塊，液體背景有游離的紅細胞。陰性：均一的紅細胞懸液，無紅細胞凝集。

微柱凝膠法1＋，紅細胞復合物位于凝膠中下部。陰性：紅細胞沉于凝膠底部。

免疫磁珠法1＋，很多小的凝集塊，液體背景中存在細小均一的磁珠。陰性：均一的磁珠懸液。

1.2.2 用上述三種方法同時檢測50份O型血漿抗體效價 將50份經新鮮細胞試管法檢測效價≥128的血清標本（1份效價1024，13份效價512，12份效價256，24份效價128）分別10、15、20倍稀釋，用膜免疫磁珠法檢測其凝集強度并進行評分。判讀標準及評分［3］：

凝集強度 描述 評分4＋ 一個完整的凝集塊12 3＋ 數個大凝集塊 10 2＋ 很多小凝集塊中散在一些大的凝集塊 8 1＋ 很多小的凝集塊，液體背景中存在細小均一的磁珠5 W＋ 很多更小的凝集塊，與液體背景中細小均一的磁珠混在一起 3陰性 均一的磁珠懸液0

1.3 統計學分析 采用SPSS11.5統計學軟件，對不同方法測定的效價進行相關分析。

2 結果

2.1 用試管法、微柱凝膠法及紅細胞膜免疫磁珠法進行60份血清樣本的檢測（30份A型，30份B型）。在試管中，用生理鹽水將同一份血漿標本倍比稀釋，分別用三種方法檢測，比較抗體效價。結果微柱凝膠法最敏感，其次為試管法，紅細胞膜免疫磁珠法低于試管法1個滴度。同時用陰性血清進行特異性檢測，三種方法特異性成立。結果見表1。

2.2 采用新鮮細胞試管法、微柱凝膠法及紅細胞膜免疫磁珠法三種方法測定50份O型血漿樣本抗體效價，統計結果見表2，表3。同時進行方法比較，將紅細胞膜免疫磁珠法分別與試管法及微柱凝膠法進行比較，兩方法間比較采用相關性分析。將每份標本均分為三份，同時用新鮮細胞試管法、微柱凝膠法及紅細胞膜免疫磁珠法三種方法進行測定，紅細胞膜免疫磁珠法結果計為Y變量，試管法、微柱凝膠法結果分別計為X變量，作線性回歸，比較紅細胞膜免疫磁珠法檢測結果與另外兩種方法檢測結果的相關性。紅細胞膜免疫磁珠法檢測結果與試管法檢測結果之間的線性回歸方程為：Y＝1.0154X－3.7471，回歸系數b＝1.0154，相關系數為0.9952，P＜0.01，表明兩種檢測方法的檢測結果間呈顯著性相關。紅細胞膜免疫磁珠法檢測結果與微柱凝膠法檢測結果之間的線性回歸方程為：Y＝0.9986X－1.1753，回歸系數b＝0.9986，相關系數為0.9961，P＜0.01，表明兩種檢測方法的檢測結果間呈顯著性相關。

表1 三種方法測定60份血清樣本（30份A型，30份B型）結果比較

表2 三種方法測定50份O型血漿樣本抗體效價結果統計

表3 三種方法測定50份O型血漿樣本抗體效價評分（）

表3 三種方法測定50份O型血漿樣本抗體效價評分（）

45.38±19.82 46.3±21.32微柱凝膠法 47.12±19.41 46.86±21.16磁珠法抗體效價評分試管法方法 Ig M抗－A抗體效價評分 Ig M抗－B 44.14±20.24 45.04±21.31

2.3 將已采用新鮮細胞試管法檢測效價≥128的50份待檢樣本（1份效價1024，13份效價512，12份效價256，24份效價128）10倍、15倍、20倍稀釋后，用紅細胞膜免疫磁珠檢測，測定其凝集強度。結果見表4。

表4 紅細胞膜免疫磁珠檢測稀釋后的血清標本的凝集強度

由上表分析，將高效價抗體進行不同倍數稀釋后，與膜免疫磁珠反應強度不同。將樣本15倍稀釋后，反應強度均≥2＋。進一步將另外50份未知抗體效價的血清樣本直接進行15倍稀釋，用紅細胞膜免疫磁珠檢測。其中有5份樣本凝集強度＞2＋，用新鮮細胞試管法檢測其效價均≥128；有2份標本凝集強度1＋，用新鮮細胞試管法檢測其效價分別為32、64。

3 討論

盡管早在1992年英國血液病標準化委員會輸血專業組就輸用新鮮冰凍血漿和血小板提出了指導標準，明確指出輸用新鮮冰凍血漿和血小板時要ABO同型輸注［4］。但是在緊急條件下，給患者配O型成分血為最佳選擇。O型成分血中含有高效價抗體時易產生溶血性輸血反應，這種情況盡管少，但仍然存在［1，5］。并且由于藥物原因也會使獻血員體內產生ABO血型系統抗體［6］。故2005年英國輸血指南中指出為保證輸血安全要求對于全血和紅細胞、新鮮冰凍血漿、單采血小板、來自于含有高效價O型獻血員血漿的血小板以及新生兒使用的血或其他血液制品都要進行抗體效價的檢測，效價大于128時標記為高效價［7］。Laura L.Cooling，Thalhimer W等人在使用新鮮紅細胞微柱凝膠法進行抗體效價研究時發現，在使用不同廠家，不同批號的紅細胞試劑檢測同一樣本效價時，出現的反應終點不同［5，8］。而由于紅細胞膜免疫磁珠可將ABO血型抗原標準化，作為標準化紅細胞應用與抗體效價檢測能夠解決這一問題。

通過三種方法的比較發現，應用紅細胞膜免疫磁珠試劑檢測抗體效價時要低于新鮮細胞試管法，所以應用紅細胞膜免疫磁珠試劑檢測抗體效價≥64時，即可標記為高效價抗體，只能用于同型輸血。同時，為方便臨床使用，筆者將效價≥128的多份血清標本進行10倍、15倍、20倍稀釋，應用紅細胞膜免疫磁珠檢測。從實驗結果得出，使用紅細胞膜免疫磁珠試劑檢測標本效價時，可將其進行15倍稀釋，若檢測凝集強度≥2＋時，即可視為帶有高效價抗體。

紅細胞膜免疫磁珠在保存期方面要遠遠優于新鮮紅細胞。據文獻報道［9］，應用傳統的紅細胞保護液CPD－A液及ACD液保存新鮮紅細胞，4℃保存其保存期分別為35天、21天；而現市售的新鮮紅細胞試劑最多能保存3個月，在其使用過程中，易受環境條件的影響，室溫有菌環境下應用新鮮紅細胞，紅細胞易染菌，在30天后有溶血出現。而紅細胞膜免疫磁珠為凍干試劑，盡管試劑廠家確定其有效期為1年，但我們對其穩定性跟蹤檢測時發現，室溫保存4年的膜免疫磁珠其ABO抗原性與效期內的磁珠無明顯差別。另外，在使用過程中，膜免疫磁珠受環境條件影響小，重復性好，可以使檢測結果標準化。故筆者認為其應用于成分血中高效價抗體的檢測，結果可靠，試劑均一性好，優于新鮮紅細胞，值得推廣應用。

［1］Mac Lennan S.High titre anti－A／B testing of donors within the National Blood Service（NBS）［monograph on the Internet］.Information document INF／MED／MA／004／01.London： NBS；2002？；Available from：http：／／www.blood.co.uk／hospitals／library／pdf／hightit.pdf

［2］Josephson CD，Mullis NC，Van Demark C，et al.Significant numbers of apheresis－derived group O platelet units have a“high－titer”anti－A／A，B：implications for transfusion policy［J］.Transfusion，2004，44（6）：805.

［3］童 軍，劉慶海，楊文沖.血型血清學實驗方法／／李勇，馬學嚴.實用血液免疫學血型理論和實驗技術［M］.北京：科學技術出版社，2006：589－591.

［4］British Committee for Standards in Haematology，Working Party of the Blood Transfusion Task Force.Guidelines for the use of fresh frozen plasma／for platelets［J］.Transfusion Med，1992，2（1）：57－63／311.

［5］Cooling L，Downs T，Butch S，Davenport R.Anti－A and anti－B titers in pooled group O platelets are comparable to aphaeresis platelets［J］.Transfusion，2008，48（10）：2106.

［6］Jennifer Daniel－Johnson，Susan Leitman，et al.Probitic－associated high－titer anti－B in a group A platelet donor as a cause of severe hemolytic transfusion reaction［J］.Transfusion，2009，49（9）：1845.

［7］Donation testing （red cell immunohaematology）.Guidelines for the Blood Transfusion Services in the UK ［M］.2005；180－1 A－vailable from：www.tsoshop.co.uk

［8］Thalhimer W，Taylor ES.The low agglutinin titer of both small and large pools of plasma［J］.JAMA，1945，128：277.

［9］Technical Manual［M］.American Association of Blood Banks 13TH Edition 166.