超高效液相色譜法檢測飲料中納他霉素的含量

張 慧，吳 穎，*，朱 蕾，路 勇，張衛(wèi)民，姜 潔

(1.北京市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，北京100026; 2.北京市食品安全監(jiān)控中心，北京100041)

超高效液相色譜法檢測飲料中納他霉素的含量

張 慧1，吳 穎1，*，朱 蕾1，路 勇2，張衛(wèi)民2，姜 潔2

(1.北京市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，北京100026; 2.北京市食品安全監(jiān)控中心，北京100041)

建立用超高效液相色譜測定飲料中納他霉素含量的方法。用甲醇溶液提取樣品中的納他霉素，UPLC分析，外標法定量。采用BEH Shield RP18色譜柱，檢測波長為303nm，以乙酸銨和乙腈為流動相，進行等度洗脫。該方法操作簡單快捷，方法準確度和穩(wěn)定性好。

超高效液相色譜，納他霉素，檢測

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

納他霉素標準品 Dr.Ehrenstorfer公司;乙腈、乙酸銨 色譜級，Dikma公司;實驗用水 超純水。

Waters ACQULITY UPLC超高效液相色譜儀配有光電二極管矩陣(PDA)檢測器;高速冷凍離心機 德國SIGMA公司;旋渦混合器;色譜柱ACQULITY UPLC BEH Shield RP18(2.1mm×50mm，1.7μm)。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品前處理 稱取飲料類樣品5g(精確至0.01g)，用甲醇定容至25mL，超聲10min，10000r/min冷凍離心10min，取上清液過0.25μm濾膜，待儀器進樣使用。

1.2.2 色譜分析條件 采用BEH Shield RP18色譜柱，分別選取流動相甲醇－水、乙腈－水、乙腈－5mmol乙酸銨、乙腈－10mmol乙酸銨、乙腈－20mmol乙酸銨，同時對不同流速、不同控制溫度進行實驗。

1.2.3 標準溶液配制、線性范圍及最低檢出限 精密稱取1mg(精確到0.1mg)納他霉素標準物質(zhì)，用甲醇定容至10mL，得100mg/L標準品儲備液，置于4℃冰箱中密封保存。準確量取儲備液，用甲醇∶水=1∶1稀釋定容，配制納他霉素的濃度梯度為0.1、0.5、1、2、5mg/L的標準溶液。并測定出最低檢出限。

1.2.4 樣品回收率實驗 選用在空白樣品中添加那他霉素的濃度為0.25、1.0mg/kg，每個加標水平重復6次，測定果汁類產(chǎn)品的回收率。

表1 精密度實驗Table 1 Precision experiment

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理

飲料類樣品采用甲醇提取，由于納他霉素在甲醇中溶解度高，可以保證較好的提取效果。

2.2 超高效液相色譜條件的選擇

經(jīng)過實驗后，流動相采用乙腈－20mmol乙酸銨。流速分別選取0.25、0.3、0.4mL/min，實驗發(fā)現(xiàn)，流速的影響很小，最后確定0.3mL/min的流速，這樣柱壓不會過高，同時也避免因流速過低而產(chǎn)生的擴散現(xiàn)象。

選取柱溫分別為25、30、35、40℃的條件下，隨著溫度的升高，保留時間不斷前移，最后選擇35℃的柱溫，在此溫度下，納他霉素色譜峰保留時間穩(wěn)定，不會造成因保留時間漂移而導致連續(xù)進樣中產(chǎn)生一系列的無效數(shù)據(jù)。

綜上所述，超高效液相色譜操作條件確定為:流速:0.3mL/min;柱溫:35℃;進樣體積:10μL;流動相: A為20mmol/L乙酸銨溶液，B為乙腈;流動相比例為A∶B=75∶25等度洗脫;檢測波長:303nm。納他霉素標準物質(zhì)色譜圖如圖1所示。

圖1 納他霉素標準物質(zhì)液相色譜圖Fig.1 UPLC chromatogram of natamycin standard

2.3 標準曲線繪制、線性范圍及最低檢出限

納他霉素的濃度為0.1、0.5、1、2、5mg/L，以峰面積分值(Y)為縱坐標，納他霉素溶液濃度(X)為橫坐標繪制標準曲線，結(jié)果納他霉素標準曲線為Y=2.66 ×105X－2.39×104(R2=0.999)，線性范圍為0.25～5mg/L，標準曲線圖如圖2所示。

稱取一定量果汁溶液，加入納他霉素標準溶液配制成濃度含量為0.33、0.95、5.00mg/kg三個不同濃度樣品溶液，按照色譜條件，水平重復8次，以S/N≥10計的測定最低檢出限可以達到0.25mg/kg和相對標準偏差為0.1%～0.4%;實驗結(jié)果如表1所示。

圖2 標準曲線圖Fig.2 Standard curve

2.4 樣品回收率實驗

選用在空白樣品中添加那他霉素的濃度為0.25、1.0mg/kg，每個加標水平重復6次，測定果汁類產(chǎn)品的平均回收率和標準偏差，結(jié)果如表2所示，樣品加標譜圖見圖3。

表2 回收率實驗(n=6)Table 2 Recovery rate experiment(n=6)

圖3 樣品加標液相色譜圖Fig.3 UPLC chromatogram of the simple adding standard

3 結(jié)論

本研究建立了超高效液相檢測果汁類樣品中納他霉素含量的方法，實驗結(jié)果表明，該方法操作簡單快捷，便于實驗室應用，準確度和穩(wěn)定性好。

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［4］蔡秀云，王普，楊仲毅.納他霉素HPLC檢測波長的優(yōu)化［J］.中國抗生素雜志，2008，33(12):765－766.

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［6］周莉莉，祝建華，張卉，等.乳制品中那他霉素的超高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定［J］.分析測試學報，2010，29 (1):77－79.

［7］張慧，吳穎，路勇，等.超高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法測定蘋果中的赤霉素、脫落酸、甲萘威、多效唑和烯效唑殘的殘留量［J］.食品工業(yè)科技，2010(10):383－385.

Determination of natamycin in various drinks by ultra performance liquid chromatography

ZHANG Hui1，WU Ying1，*，ZHU Lei1，LU Yong2，ZHANG Wei－min2，JIANG Jie2
(1.Beijing Products Quality Supervision and Inspection Institute，Beijing 100026，China; 2.Beijing Municipal Center for Food Safety Monitoring，Beijing 100041，China)

A method for the determination of natamycin in various drink was established by ultra performance liquid chromatography.The sample was extracted with methanol as extraction solvents.The analyte was determined by UPLC and quantified by the external standard curve.The separation was performed on a BEH Shield RP18 column by isocratic elution with a system of water(containing 20mmol/L ammonium acetate buffer)－acetonitrile as mobile phase.The method was simple，accurate and suitable for the identification and quantification.

ultra performance liquid chromatography;natamycin;determination

TS207.3

A

1002－0306(2012)08－0086－03

納他霉素(natamycin)又稱作游霉素、匹馬菌素、匹馬利星，它是一種多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌劑，其抗菌機理是與細胞膜上的甾醇化合物反應，破壞微生物細胞膜的架構(gòu)或改變細胞膜的滲透性，使微生物體內(nèi)的酶類和代謝產(chǎn)物溢出細胞外，導致微生物正常的生理平衡被破壞而失活［1］。納他霉素對大部分霉菌、酵母菌和真菌都有高度抑制作用，此外，由于納他霉素是白色、無氣味、無味道的粉末狀，對食品的口感和風味沒有影響，常作為防腐劑使用，應用于各類飲料中。目前報道的關(guān)于納他霉素的檢測方法有生物檢測法［2］、紫外分光光度法［3］、高效液相色譜法［4－5］、超高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜［6］。目前應用最多的是液相色譜法，生物檢測法和紫外分光光度法不能排除基質(zhì)干擾，難以精確定量，應用范圍窄。超高效液相色譜作為液相色譜法的一種，具有超高分離度、超高速度、高靈敏度等特點［7］，用于納他霉素的檢測研究較少，此方法的開發(fā)可大大減少樣品分析時間。

2011－08－17 *通訊聯(lián)系人

張慧(1981－)，女，助工，研究方向:分析檢測。