生脈丹咀嚼片對(duì)大鼠急性心肌缺血的影響△

鄧奕,曹亮,丁崗,2,3,王振中.2.3,蕭偉,2,3*

(1.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222001；2.中藥制藥過(guò)程新技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇 連云港 222001；3.江蘇省企業(yè)院士工作站,江蘇 連云港 222001)

生脈丹咀嚼片對(duì)大鼠急性心肌缺血的影響△

鄧奕1,曹亮1,丁崗1,2,3,王振中1.2.3,蕭偉1,2,3*

(1.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222001；2.中藥制藥過(guò)程新技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇 連云港 222001；3.江蘇省企業(yè)院士工作站,江蘇 連云港 222001)

目的觀察生脈丹咀嚼片對(duì)冠脈結(jié)扎及垂體后葉素致大鼠心肌缺血模型的影響。方法給予生脈丹咀嚼片7 d后，采用結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈復(fù)制大鼠急性心肌梗死模型，TTC染色后計(jì)算梗死心肌占心室的百分比；采用垂體后葉素注射致大鼠急性心肌缺血模型，觀察給予生脈丹咀嚼片7 d后對(duì)造模后心電圖ST、T波的影響。結(jié)果生脈丹咀嚼片各劑量組均可以不同程度地降低心肌梗死范圍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)(P<0.05)；生脈丹咀嚼片各劑量組能減少大鼠心電圖的T波和ST段在給予垂體后葉素30 s內(nèi)的上抬幅度，和模型組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05，P<0.01)。結(jié)論生脈丹咀嚼片對(duì)大鼠急性心肌缺血具有一定的保護(hù)作用。

生脈丹咀嚼片；心肌缺血；心肌梗死；心電圖ST

冠心病心絞痛相當(dāng)于中醫(yī)胸痹心痛的范疇，早在《內(nèi)經(jīng)·素問(wèn)》中就有對(duì)此病的描述、預(yù)后分析及治療的記載。張仲景《金匱要略》列專篇對(duì)其論述，并創(chuàng)立了治療心絞痛的治療體系。近年來(lái)的研究提示中醫(yī)藥在治療冠心病心絞痛方面具有速效、療效穩(wěn)定、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，在中成藥的研究開(kāi)發(fā)等方面亦進(jìn)行了大量的工作，為冠心病的防治做出了突出的貢獻(xiàn)。然而，當(dāng)前的國(guó)內(nèi)中成藥市場(chǎng)上中成藥的功能比較單一，或者以活血化瘀止痛為主，或者以芳香開(kāi)竅急救為主；或者以益氣、養(yǎng)陰培本為主；尚缺乏針對(duì)氣陰兩虛、瘀阻心脈型胸痹的藥物。而我們?cè)谂R床實(shí)踐中觀察到，胸痹心痛(冠心病心絞痛)往往由多種危險(xiǎn)因素長(zhǎng)期作用于人體后發(fā)生，多發(fā)于40歲以上的中老年人，其證往往虛實(shí)夾雜，本虛標(biāo)實(shí)。單純實(shí)證或虛證非常少見(jiàn)。根據(jù)這一臨床實(shí)際，我們以古典名方“生脈散”和“丹參散”為基礎(chǔ)，結(jié)合臨床病癥特點(diǎn)和多年診治冠心病的經(jīng)驗(yàn)，配伍組合為生脈丹咀嚼片，既針對(duì)患者氣陰不足的本虛，又充分考慮病發(fā)時(shí)瘀血痹阻的標(biāo)實(shí)，經(jīng)過(guò)數(shù)年臨床實(shí)踐，證實(shí)生脈丹咀嚼片療效較單用益氣養(yǎng)陰或活血化瘀治法為優(yōu)。

生脈丹咀嚼片由紅參、麥冬、五味子和丹參等藥物組成，具有益氣養(yǎng)陰、活血化瘀、通脈止痛的功能。對(duì)單味藥的研究文獻(xiàn)表明，人參具有抗缺氧和保護(hù)心臟的作用，麥冬具有改善急性心肌缺血、心臟血流動(dòng)力學(xué)的作用，五味子能顯著提高耐缺氧能力，并具有增強(qiáng)抗氧化酶活性的作用，丹參對(duì)心血管系統(tǒng)的影響可表現(xiàn)為擴(kuò)張冠脈、改善微循環(huán)等，并能縮小實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心肌梗死面積[1-2]。

我們通過(guò)一系列藥效模型，驗(yàn)證了生脈丹復(fù)方制劑在實(shí)驗(yàn)性心肌缺血模型中的藥效作用，本文主要采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈致心肌缺血及垂體后葉素致心肌缺血的方法，研究生脈丹咀嚼片對(duì)大鼠急性心肌缺血的影響。

1 材料

1.1 藥品與試劑

生脈丹咀嚼片為薄膜衣片，為異型片，除去包衣后，顯淡棕色，味酸甜，微苦，口服給藥，每片含浸膏0.338 g，1 g浸膏含3.7 g飲片，擬臨床人日用量為11.25 g 飲片·(60 kg)-1(江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：20050310)；垂體后葉素注射液(南京新百藥業(yè)有限公司，批號(hào)：030902)；硝酸異山梨酯片(南京白敬宇制藥廠，批號(hào)：20040301)；丹參片(上海雷允上藥業(yè)有限公司，批號(hào)：0404031)；水合氯醛(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20040420)；0.9%氯化鈉注射液(南京小營(yíng)制藥廠，批號(hào)：2005052505)；其余試劑均為分析純。

1.2 儀器

RM-6000八道生理記錄儀及附件(日本NIHON KOHDEN公司)；8s型PowerLab生命信息處理系統(tǒng)和Chart v5.2軟件(澳大利亞ADInstruments公司)；DH140人工呼吸器(浙江醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器實(shí)驗(yàn)廠)；LDZ5-2型離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；KHW-501型恒溫水槽(江蘇省昆山市淀山湖檢測(cè)儀器廠)；JA1003上皿電子天平(上海精科電子天平廠)；MELLTER-AE240電子天平(奧賽斯國(guó)際貿(mào)易上海有限公司)；DGF30/23-ⅢA型電熱鼓風(fēng)干燥箱(南京實(shí)驗(yàn)儀器廠)。

1.3 動(dòng)物

清潔級(jí)SD大鼠，雄性，體重180～220 g，由南京軍區(qū)南京總醫(yī)院提供，生產(chǎn)許可證：SCXK(蘇)2003-0004，使用許可證號(hào)：SYXK(蘇)2003-0029。

2 方法

2.1 對(duì)大鼠冠脈結(jié)扎的影響

SD大鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只。即正常對(duì)照組，模型組，陽(yáng)性藥組和生脈丹咀嚼片小、中、大劑量組。陽(yáng)性藥組灌胃給予丹參片1.0 g飲片·kg-1，生脈丹咀嚼片小、中、大劑量組分別灌胃給予生脈丹咀嚼片0.5 g飲片·kg-1、1.0 g飲片·kg-1、2.0 g飲片·kg-1，給藥容積為10 mL·kg-1，正常對(duì)照組和模型組灌胃給予等容積蒸餾水，連續(xù)給藥7 d。

給藥7 d后1 h，水合氯醛(350 mg·kg-1)腹腔注射麻醉，仰臥固定于手術(shù)臺(tái)，氣管插管連接到呼吸機(jī)，進(jìn)行人工呼吸。胸部去毛、消毒，沿左鎖骨中線縱行切開(kāi)皮膚約2 cm，自左側(cè)4～5肋間鈍性分離肌肉，打開(kāi)胸腔，剪開(kāi)心包，輕壓右側(cè)胸廓，擠出心臟。在動(dòng)脈圓錐與左心耳之間用5/0縫合線結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈(LAD)后，迅速將心臟送回胸腔，立即縫合胸壁[1]，停止人工呼吸。結(jié)扎LAD 24 h后，脫頸椎處死大鼠，同時(shí)開(kāi)胸取心臟，再沿冠狀溝去除心房組織，稱心室濕重。平行房室溝將心室橫切5片，放置于37 ℃的0.5%TTC磷酸鹽緩沖液中染色。分離心肌中梗死區(qū)(不染色者)并稱量其濕重。計(jì)算梗死心肌占心室的百分比[3-5]。

2.2 對(duì)垂體后葉素致心肌損傷的影響

挑選心電圖合格的SD大鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只。即正常對(duì)照組，模型組，陽(yáng)性藥組和生脈丹咀嚼片小、中、大劑量組。陽(yáng)性藥組灌胃給予硝酸異山梨酯片5 mg·kg-1，生脈丹咀嚼片小、中、大劑量組分別灌胃給予生脈丹咀嚼片0.5 g飲片·kg-1(臨床等效劑量1/2倍)、1.0 g飲片·kg-1(臨床等效劑量)、2.0 g飲片·kg-1(臨床等效劑量2倍)，給藥容積為10 mL·kg-1，正常對(duì)照組和模型組灌胃給予等容積蒸餾水，連續(xù)給藥7 d。

第7日給藥1 h后，水合氯醛麻醉(350 mg·kg-1，腹腔注射)，測(cè)定一段時(shí)間正常心電圖舌靜脈給予垂體后葉素(0.5 U·kg-1)，5～10 s內(nèi)給完，測(cè)定給藥后5 s、10 s、20 s、30 s、1 min、5 min、10 min時(shí)的心電圖，觀察藥物對(duì)給予垂體后葉素后心電圖ST、T波的影響[5-6]。

2.3 統(tǒng)計(jì)方法

3 結(jié)果

3.1 生脈丹咀嚼片對(duì)大鼠冠脈結(jié)扎的影響

正常對(duì)照組大鼠心肌無(wú)梗死，模型組大鼠出現(xiàn)明顯的心肌梗死，生脈丹咀嚼片各劑量組均可以不同程度地降低心肌梗死范圍，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。表明生脈丹咀嚼片對(duì)大鼠心肌缺血具有一定的保護(hù)作用。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 生脈丹咀嚼片對(duì)大鼠冠脈結(jié)扎心肌梗死范圍的影響

注：與模型組比較，*P<0.05

3.2 生脈丹咀嚼片對(duì)垂體后葉素致心肌損傷的影響

模型組大鼠心電圖的T波和ST段在給予垂體后葉素30 s內(nèi)顯著上抬，出現(xiàn)第一期心電圖的變化，30 s后出現(xiàn)T波低平、雙向、倒置P-R及Q-T間期延長(zhǎng)等第二期心電圖變化；給藥各組動(dòng)物心電圖的T波和ST段在給予垂體后葉素30 s內(nèi)也呈上升趨勢(shì)，但和模型組比較，上抬幅度顯著降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05，P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表2、3。

表2 生脈丹咀嚼片對(duì)垂體后葉素致心肌損傷大鼠心電圖ST段的影響 /mv

注：與正常對(duì)照組比較，△P<0.05，△△P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；下同。

表3 生脈丹咀嚼片對(duì)垂體后葉素致心肌損傷大鼠心電圖T波的影響 /mv

4 討論

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是心血管疾病的重要死亡病因，也是臨床猝死的常見(jiàn)癥狀之一。心肌梗死大多是在冠狀動(dòng)脈長(zhǎng)期和急劇病變的基礎(chǔ)上，冠狀動(dòng)脈的血流急劇減少或中斷，使相應(yīng)的心肌出現(xiàn)嚴(yán)重而持久的急性缺血，最終導(dǎo)致心肌的缺血性壞死[7]。本文采用大鼠冠脈結(jié)扎建立急性心肌梗死模型，經(jīng)過(guò)TTC染色后計(jì)算梗死心肌占心室的百分比，從數(shù)據(jù)中可以得出模型組大鼠出現(xiàn)明顯的心肌梗死，生脈丹咀嚼片高、中、低劑量組均能較好地保護(hù)心肌組織，減少心肌缺血模型大鼠心肌梗死范圍。

冠脈痙攣是導(dǎo)致心肌急性缺血的主要原因之一，垂體后葉素(Pit)包含加壓素和催產(chǎn)素，可作用于加壓素V1受體，促使全身血管(包括冠脈) 收縮，冠脈流量減少，心電圖改變，與臨床上變異性心絞痛的發(fā)病過(guò)程十分相似，是誘導(dǎo)大鼠急性心肌缺血的經(jīng)典模型[8]。Pit通過(guò)誘發(fā)冠狀動(dòng)脈痙攣而致急性心肌缺血，出現(xiàn)異常心電圖改變，主要反映在ST段、T波異常以及出現(xiàn)心律失常。正常大鼠注射Pit后心電圖變化(Ⅱ?qū)?lián)) 分為兩期，第1期：注射Pit后即刻至30 s，T 波升高、ST段抬高0.l mv以上；第2期：注射后30 s至數(shù)分鐘，T波低平、雙向、倒置，心率變慢，P-R及Q-T間期延長(zhǎng)[9]。能防止或減輕第1期或第2期心電圖變化的藥物，可以認(rèn)為對(duì)該模型有效。

本試驗(yàn)中給予Pit后，模型組大鼠心電圖的T波和ST段在給予垂體后葉素30 s內(nèi)顯著上抬，出現(xiàn)第1期心電圖的變化，30 s后出現(xiàn)第2期心電圖變化；給藥各組動(dòng)物心電圖的T波和ST段在給予垂體后葉素30 s內(nèi)也呈上升趨勢(shì)，但和模型組比較，上抬幅度顯著降低，說(shuō)明生脈丹咀嚼片對(duì)垂體后葉素導(dǎo)致的大鼠心肌缺血有一定的改善作用。

本實(shí)驗(yàn)從缺血面積、心電圖方面證實(shí)了生脈丹咀嚼片對(duì)大鼠心肌缺血模型具有確切的保護(hù)作用，其效果明顯，值得進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用。

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EffectofShengmaidanChewableTabletsonBloodLipidandHemorheologyinHyperlipedemiaModelRats

DENG Yi1，CAO Liang1，DING Gang1,2,3，WANG Zhen-zhong1,2,3，XIAO Wei1,2,3

(1.JiangsuKanionPharmarceutical，Ltd.，Lianyungang222001，China；2.StateKeyLaboratoryofPharmaceuticalProcessNew-techforChineseMedicine，Lianyungang222001，China；3.EnterprisesAcademicianWorkstationsinJiangsuProvince，Lianyungang222001，China)

Objective：To observe the cardioprotective effect of Shengmaidan Chewable tablets on rats with acute myocardial ischemia induced.MethodsThe acute myocardial ischemia model was induced by ligation of left anterior descending coronary artery at the distal one third segment in opened chest rats.The infarct area showed by TTC stain after ligation.The Ⅱ-lead electrocardiogram examined the myocardial injury model induced by pituitrin.ResultsCompared with model group，all groups using different dosage Shengmaidan Chewable tablets could reduce the area of myocardial infarction(P<0.05).Furthermore，three dosage of Shengmaidan Chewable tablets lowered the elevation of S-T segment and the amplitude of T wave in the electrocardiograms of rats.ConclusionShengmaidan Chewable tablets has obvious protective effect against acute myocardial ischemia in rats.

Shengmaidan Chewable tablets；Myocardial ischemia；Pituitrin；Coronary artery ligation

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中藥治療心腦血管疾病有效成分組(群)的創(chuàng)新藥物孵化基地(2011ZX09401-014)

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蕭偉，E-mail：qly099@hotmail.com

2012-05-15)