液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定飲料中16種鄰苯二甲酸酯

劉 杰，郁宏燕，鮑立杰，羅 焱

(昆山市流通領(lǐng)域食品質(zhì)量檢測(cè)中心，江蘇 昆山 215300)

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定飲料中16種鄰苯二甲酸酯

劉 杰，郁宏燕，鮑立杰，羅 焱

(昆山市流通領(lǐng)域食品質(zhì)量檢測(cè)中心，江蘇 昆山 215300)

建立同時(shí)檢測(cè)飲料中16種鄰苯二甲酸酯的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)方法。用甲醇提取飲料中的鄰苯二甲酸酯，采用Aglilent Eclipse plus C18柱(2.1mm×150mm，3.5μm)，以0.1%甲酸的甲醇溶液＋0.1%甲酸溶液作為流動(dòng)相，梯度洗脫，質(zhì)譜檢測(cè)器檢測(cè)，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)定量。方法檢出限為0.005～0.051mg/kg，回收率為89.1%～105.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8%～4.1%，可以滿(mǎn)足飲料中鄰苯二甲酸酯的檢測(cè)要求。

鄰苯二甲酸酯；液相色譜-質(zhì)譜；飲料

2011年5月，從臺(tái)灣飲料業(yè)開(kāi)始的“塑化劑風(fēng)波”引起了社會(huì)各界的廣泛關(guān)注，不法分子用塑化劑生產(chǎn)食品添加劑“起云劑”，造成下游食品受到污染。截止2011年6月7日臺(tái)灣地區(qū)已公布受塑化劑污染企業(yè)279家，產(chǎn)品948種。衛(wèi)生部2011年第16號(hào)公告更是將塑化劑的主要成分鄰苯二甲酸酯(PAEs)列入《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單(第六批)》。鄰苯二甲酸酯類(lèi)具有種類(lèi)多、難以降解、生物富集性強(qiáng)的特點(diǎn)，對(duì)人體、生物體及植物均有較大的毒性，該類(lèi)污染物對(duì)人類(lèi)的危害主要表現(xiàn)在致癌、致畸性以及免疫抑制性，尤以人體生殖功能異常最為引人注目[1-6]。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，鄰苯二甲酸酯的檢測(cè)方法主要有光譜法[7]、氣相色譜法[8]、液相色譜法[9-11]、氣質(zhì)聯(lián)用法[12-15]、液質(zhì)聯(lián)用法等[16-17]。國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)以氣質(zhì)聯(lián)用法居多，并且很少有同時(shí)測(cè)定十多種鄰苯二甲酸酯的文獻(xiàn)報(bào)道。目前為止，食品方面的國(guó)家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)也僅有氣質(zhì)聯(lián)用法一種[18]。本研究擬采用液高效相色譜(high performance liquid chromatography)質(zhì)譜(mass spectrometer)聯(lián)用法測(cè)定飲料中的鄰苯二甲酸酯，以期為其方法的建立提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

飲料 市售。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：苯二甲酸二異丁酯(DIBP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)、鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP)、鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP)、鄰苯二甲酸二戊酯(DPP-1)、鄰苯二甲酸二己酯(D H X P)、鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP)、鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯(DCHP)、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、鄰苯二甲酸二苯酯(DPP-2)、鄰苯二甲酸二正辛酯(DNOP)、鄰苯二甲酸二壬酯(DNP)，16種標(biāo)準(zhǔn)品均為Dr.Ehrenstorfer品牌，純度均大于99.5%。甲醇(HPLC級(jí))、乙酸銨(GR)。

1.2 儀器與設(shè)備

1290-6410B液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 美國(guó)Agilent公司； Direct-Q 純水儀 美國(guó)密理博公司。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：Aglilent Eclipse plus C18(2.1mm×150mm，3.5μm)；流動(dòng)相：0.1%甲酸的甲醇溶液＋0.1%甲酸溶液；柱溫：3 0℃；進(jìn)樣量：5 μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件

操作模式：ESI正離子模式；干燥氣流量：10L/min；干燥氣溫度：350℃；毛細(xì)管電壓：4000V；噴霧壓力：30psi。

1.3.3 樣品處理

準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品5g(精確至0.01g)于25mL容量瓶中，加入約10mL甲醇，超聲波振蕩30min，平衡至室溫后用甲醇定容。用離心管離心后，取上清液待測(cè)。注意，本實(shí)驗(yàn)所接觸的所有實(shí)驗(yàn)器具均要求為玻璃材質(zhì)，并要求做全程溶劑空白實(shí)驗(yàn)。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制

準(zhǔn)確稱(chēng)取1.1節(jié)中所述16種標(biāo)準(zhǔn)品各10mg(精確至0.01mg)，用甲醇配成1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4℃條件下密封保存。

將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用甲醇稀釋成0.05、0.50、1.00、2.00、5.00mg/L的標(biāo)準(zhǔn)使用液，通過(guò)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定，以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(multiple reaction monitoring，MRM)子離子峰面積對(duì)質(zhì)量濃度做標(biāo)準(zhǔn)定量曲線(xiàn)。

1.3.5 定性和定量

樣液經(jīng)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定，通過(guò)保留時(shí)間及多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM子離子相對(duì)豐度定性，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜和質(zhì)譜條件的優(yōu)化

2.1.1 色譜條件優(yōu)化

經(jīng)實(shí)驗(yàn)可知，使用0.1%甲酸的甲醇溶液＋0.1%甲酸溶液體系，采用梯度洗脫的方式可以將16種鄰苯二甲酸酯較好的分離(梯度見(jiàn)表1)。

表1 HPLC流動(dòng)相梯度洗脫條件Table 1 Mobile phase gradient program for HPLC analysi

2.1.2 質(zhì)譜條件優(yōu)化

將16種PAEs標(biāo)準(zhǔn)使用液進(jìn)行質(zhì)譜全掃描，找到母離子，然后優(yōu)化傳輸電壓和碰撞能量，最后分6個(gè)時(shí)間段進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，質(zhì)譜優(yōu)化條件參數(shù)見(jiàn)表2，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM離子流圖見(jiàn)圖1。本方法采用的分6個(gè)時(shí)間段進(jìn)行MRM多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，能最大程度的提高儀器靈敏度和準(zhǔn)確度，從而實(shí)現(xiàn)16種PAEs的同時(shí)測(cè)定，優(yōu)于其他文獻(xiàn)報(bào)道[16]。

表2 質(zhì)譜優(yōu)化條件Table 2 Optimized mass spectrometric parameters for 16 PAEs

圖1 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)離子流圖Fig.1 MRM Ion current chromatograms of 16 PAEs

表3 線(xiàn)性關(guān)系和檢出限Table 3 Linear ranges and detection limits for 16 PAEs

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、線(xiàn)性范圍和檢出限

按1.3.4節(jié)的方法制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得到線(xiàn)性方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果表明在相應(yīng)的線(xiàn)性范圍內(nèi)，線(xiàn)性關(guān)系良好(表3)。取經(jīng)預(yù)先測(cè)定不含PAEs的飲料，添加低濃度PAEs后，以3倍信噪比計(jì)算檢出限，10倍信噪比計(jì)算定量限，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.3 回收率與精密度

表4 回收率和精密度Table 4 Average recovery rates and precision RSD for 6 replication determinations

為了驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確度和精密度，對(duì)飲料樣品進(jìn)行了高、中、低3個(gè)不同水平的標(biāo)準(zhǔn)添加回收實(shí)驗(yàn)，每一水平分別做6份平行實(shí)驗(yàn)，計(jì)算平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation，RSD)，以回收率表示準(zhǔn)確度，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示精密度。結(jié)果表明(表4)，回收率為89.1%～105.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8%～4.1%，方法回收率和精密度良好，能滿(mǎn)足檢測(cè)的要求。經(jīng)實(shí)驗(yàn)比對(duì)，本方法回收率、重復(fù)性等實(shí)驗(yàn)結(jié)果均優(yōu)于同等條件的國(guó)標(biāo)氣質(zhì)聯(lián)用法。

2.4 樣品測(cè)定

隨機(jī)購(gòu)買(mǎi)10批次的國(guó)產(chǎn)飲料，采用本實(shí)驗(yàn)建立的方法進(jìn)行檢測(cè)。經(jīng)檢測(cè)，除有3批次飲料檢出0.33～0.89mg/kg的DEHP之外(低于GB 9685—2008《食品容器、包裝材料用添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》最大遷移量要求，可能與包裝遷移有關(guān))，其他均低于方法檢出限，經(jīng)與GB/T 21911—2008《食品中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定》檢測(cè)結(jié)果對(duì)比，檢測(cè)結(jié)果一致。

每次進(jìn)樣完后，需長(zhǎng)時(shí)間自動(dòng)清洗進(jìn)樣針以降低殘留。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用50%的甲醇溶液自動(dòng)清洗進(jìn)樣針5s以上便能滿(mǎn)足要求。

3 結(jié) 論

針對(duì)鄰苯二甲酸酯的檢測(cè)，國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)以氣質(zhì)聯(lián)用法居多，并且很少有同時(shí)測(cè)定十多種鄰苯二甲酸酯的文獻(xiàn)報(bào)道。目前為止，食品方面的國(guó)家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)也僅有氣質(zhì)聯(lián)用法一種，本實(shí)驗(yàn)建立了同時(shí)檢測(cè)飲料中16種鄰苯二甲酸酯的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。方法檢測(cè)限為0.005～0.051mg/kg，回收率為89.1%～105.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8%～4.1%，可以滿(mǎn)足飲料中鄰苯二甲酸酯的檢測(cè)要求。經(jīng)試驗(yàn)比對(duì)，本方法回收率、重復(fù)性等實(shí)驗(yàn)結(jié)果均優(yōu)于同等條件的國(guó)標(biāo)氣質(zhì)聯(lián)用法。

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[18]GB/T 21911—2008 食品中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定[S].

Determination of 16 Phthalate Esters in Drinks by HPLC-ESI-MS/MS

LIU Jie，YU Hong-yan，BAO Li-jie，LUO Yan
(Circulating Food Quality Supervision and Inspection Center of Kunshan, Kunshan 215300, China)

An HPLC-ESI-MS/MS method was developed for the simultaneous determination of 16 phthalate esters (PAEs)in drinks. Methanol was used to extract PAEs in drinks. The separation was performed on an Aglilent Eclipse plus C18 (2.1 mm ×150 mm, 3.5 μm) column with a gradient mobile phase mixture composed of water containing 0.1% fomic acid and methanol containing 0.1% fomic acid. A tandem mass detector was used for the detection and quantification of PAEs in the multiple reaction monitoring (MRM) mode. The results showed that the limit of detection of the developed method was in a range of 0.005－0.051 mg/kg. The average recovery rates of 16 PAEs across three spike levels were 89.1%－105.1% with relative standard deviation (RSD) of 0.8%－4.1%. This method could meet the requirements for the determination of PAEs in drinks.

PAEs；HPLC-ESI-MS/MS；drinks

TS207.3

A

1002-6630(2012)18-0211-05

2011-07-11

劉杰(1986—)，男，助理工程師，本科，主要從事食品檢驗(yàn)分析研究。E-mail：liujiejienjut@163.com