不同的存放溫度及時間下網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的分析

盤國雄 梁燕媚 謝中興

不同的存放溫度及時間下網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的分析

盤國雄 梁燕媚 謝中興

目的探討血液標(biāo)本存放溫度和存放時間對網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的影響。方法對80例健康成人標(biāo)本按六個不同時間段進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的測定，得出測定結(jié)果。結(jié)果網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果隨著標(biāo)本的存放溫度和時間不同測定結(jié)果降低各異。結(jié)論血液標(biāo)本的存放溫度和時間對網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果影響較大，在臨床檢驗(yàn)工作中應(yīng)引起重視。

網(wǎng)織紅細(xì)胞;活體染色;溫度;時間

影響網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的因素很多，包括染液的性質(zhì)，染色的溫度、時間及標(biāo)本的存放條件和時間等。尤其是標(biāo)本的存放溫度和時間對網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果影響較大。為了探討標(biāo)本不同的存放條件和存放時間對網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果造成的影響，筆者采集了80名健康成人靜脈血。對同一人份靜脈抗凝血分別在4℃、室溫(22℃～28℃)和37℃條件下存放2 h、4 h、8 h、24 h、48 h，然后分別用新亞甲藍(lán)加醇溶液進(jìn)行活體染色［1］。在油鏡下計(jì)數(shù)1000個紅細(xì)胞中網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)，分析標(biāo)本在不同的保存條件下對網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的影響。

1 材料與方法

1.1 材料來源80名健康成人靜脈抗凝血，用EDTA-Na2抗凝。

1.2 對同一人抽取靜脈抗凝血分三份，根據(jù)標(biāo)本不同的存放條件和存放時間情況，先對標(biāo)本進(jìn)行室溫平行后再檢測。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果(表1)。

表1 不同存放溫度和時間網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果(±s，%)

表1 不同存放溫度和時間網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果(±s，%)

溫度時間(h) 2 4 8±0.16 4℃1.24±0.191.17±0.241.13±0.250.94±0.140.66±0.18 37℃1.26±0.251.05±0.220.82±0.170.49±0.12 8 2448室溫1.21±0.271.16±0.320.93±0.180.67±0.150.3 0.23±0.13

在室溫(22-28℃)條件下存放8 h內(nèi)與4℃條件下存放24 h內(nèi)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果無顯著差異(P＞0.05)。置于37℃條件下超過8 h網(wǎng)織紅細(xì)胞結(jié)果偏低，涂片沉渣多，背景臟，無網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)網(wǎng)織紅細(xì)胞。無論置于何種條件下的標(biāo)本都會隨著時間的延長而致網(wǎng)織紅細(xì)胞結(jié)果逐漸偏低。因此作網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)應(yīng)在2 h內(nèi)進(jìn)行其效果最佳，而37℃條件下存放應(yīng)不超過4 h。

2.2 三種溫度條件下的相應(yīng)時間點(diǎn)的計(jì)數(shù)結(jié)果比較，在2 h、4 h內(nèi)各組的計(jì)數(shù)結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，其他相同時間點(diǎn)的計(jì)數(shù)結(jié)果均有差異(P＜0.05)。37℃試驗(yàn)組中最小值位于24 h和48 h，在相同的時間點(diǎn)中與室溫及4℃條件下結(jié)果存在顯著性差異(P＜0.05)，37℃存放24 h、48 h時計(jì)數(shù)結(jié)果明顯低于室溫及4℃條件下的計(jì)數(shù)結(jié)果(見表1)。

3 討論

網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測是臨床上多種血液疾病的參考指標(biāo)，例如對慢性貧血和缺鐵性貧血的鑒別有一定的價值［2］，白血病患者網(wǎng)織紅細(xì)胞較正常人偏低［3］等。網(wǎng)織紅細(xì)胞是一種尚未完全成熟的紅細(xì)胞，胞漿內(nèi)尚存在嗜堿性的RNA物質(zhì)與新亞甲藍(lán)活體染色后呈藍(lán)色的網(wǎng)狀及點(diǎn)狀結(jié)構(gòu)。網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果數(shù)量的變化能間接反映骨髓的造血功能，根據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報告，在正常生理情況下，骨髓釋放到外周血中的網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟時間需2 d，在本試驗(yàn)中可見部分網(wǎng)織紅細(xì)胞其胞質(zhì)中的RNA在37℃條件下存放1 d后即消失。由此可見其胞質(zhì)中的RNA隨著網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟的時間推移即逐漸消失，尤其是標(biāo)本保存在接近人體溫度的37℃環(huán)境中放置的時間趆長其RNA消失的速度趆快。標(biāo)本置于37℃條件下4 h內(nèi)其網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果并未見明顯下降，但在放置8 h后網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果降低較快，放置時間超過24 h后網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果則降低明顯，由此可見在37℃條件下存放時間超過8 h的血液標(biāo)本已不適合作網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。而在室溫與4℃條件下存放的標(biāo)本在8 h內(nèi)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果未見明顯異常，可見隨著保存溫度的降低其保存時間越長。特別是在4℃條件下其保存時間更長，保存時間超過24 h后其網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果也未見明顯下降，其原因是網(wǎng)織紅細(xì)胞在低溫環(huán)境中其細(xì)胞代謝減慢，因此RNA消失較慢。因此日常工作中作網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測應(yīng)在2 h內(nèi)進(jìn)行其效果最佳，在37℃條件下存放應(yīng)不超過4 h，在室溫條件下存放不應(yīng)超過8 h，而在4℃條件下保存期最長，但也不能超過24 h。綜上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，筆者認(rèn)為對于一些不能及時檢測的標(biāo)本應(yīng)保存在4℃條件下，并在24 h內(nèi)檢測完畢為宜。

［1］秦德柱，關(guān)國坤，王鳳仁.網(wǎng)織紅細(xì)胞染色方法的改進(jìn)．中華醫(yī)學(xué)研究雜志，2003，3(1):72．

［2］褚靜英，陸玉霞，羽曉瑜，等.抗凝劑對網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測的影響．中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2009，6(19):115-116．

［3］邱麗君，高瑞香，許穎彬.急性白血病化療患者未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞指數(shù)的臨床觀察．中國醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2005，6(1):34-35．

ObjectiveTo explor the storage time of blood specimen that influence the Reticulocyte Count results.MethodsDetect the Reticulocyte Count of blood specimen which from 80 healthy adults on five different period，and get results.ResultsIt appeared different declining Reticulocyte Count results depend on different storage temperature and time ConclusionThe storage temperature and time of blood specimen was biggish influence to the Reticulocyte Count results，which in the clinical inspec-tion work should be taken seriously．

Reticulocyte;Living dyeing;Temperature;Time

526060肇慶市第二人民醫(yī)院

1.3試劑制取染液(新亞甲藍(lán)加醇溶液):第I組溶液-取0.9%生理鹽水80 ml與30 g/L枸櫞酸鈉20 ml，混勻，稱取1.2 g新亞甲藍(lán)溶于其中，過濾備用;第Ⅱ組溶液-異丙醇乙醇溶液按1:1混合，新制備的醇溶液備用。將第I和Ⅱ組溶液按9:1混合，充分混勻，置棕色瓶內(nèi)［1］備用。

1.4 方法將置于4℃、室溫和37℃條件下擺放2 h，4 h，8 h，24 h，48 h后的靜脈抗凝血分別加入試管中(染液及靜脈抗凝血按1:1混合)在37℃條件下與新亞甲藍(lán)加醇溶液進(jìn)行活體染色10 min，然后分別取各支試管內(nèi)的混懸液推成薄片待干，在紅細(xì)胞分布均勻的區(qū)域內(nèi)油鏡下計(jì)數(shù)1000個紅細(xì)胞中網(wǎng)織紅細(xì)胞的數(shù)量。每個樣本重復(fù)2次，取其平均值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理，各組間網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的總體比較采用方差分析，以P＜0.05上個月統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。