HPLC法測(cè)定苦瓜清脂素膠囊中鹽酸西布曲明

姜嘉鑫 訾陽(yáng)

HPLC法測(cè)定苦瓜清脂素膠囊中鹽酸西布曲明

姜嘉鑫 訾陽(yáng)

建立高效液相色譜法測(cè)定鹽酸西布曲明的含量。色譜柱為Venusil MP C18，流動(dòng)相為含0.1%甲酸的20 mmol/L醋酸銨-甲醇(35∶65)。檢測(cè)波長(zhǎng)為224 nm，流速為1.0 ml/min。鹽酸西布曲明在0.0225～0.225 mg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.9998);平均回收率為98.87%，RSD為0.65%(n=6)。本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好，可作為鹽酸西布曲明的含量測(cè)定方法。

高效液相色譜法;苦瓜清脂素膠囊;鹽酸西布曲明

鹽酸西布曲明(Sibutramine)為非苯丙胺類(lèi)食欲抑制藥，是作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的減肥藥物，近年來(lái)有鹽酸西布曲明多例的死亡報(bào)告［1］。一些不法分子在減肥類(lèi)保健食品中非法添加鹽酸西布曲明，嚴(yán)重危害消費(fèi)者健康。為有效地打擊這種制假摻偽的不法行為，參照有關(guān)文獻(xiàn)［2，3］，采用高效液相色譜法，對(duì)市售的減肥保健品進(jìn)行了檢驗(yàn)。本文選擇在流動(dòng)相中加入0.1%甲酸，改善了分離效果，使樣品中鹽酸西布曲明和其他成分得到了很好的分離，建立了HPLC法測(cè)定苦瓜清脂素膠囊中鹽酸西布曲明的分析方法，結(jié)果令人滿(mǎn)意。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-20AD液相色譜儀(日本島津公司);CP225 d分析天平(德國(guó)賽多利斯公司);KQ-250 dB型數(shù)控超聲波清洗器(江蘇昆山超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 鹽酸西布曲明對(duì)照品(批號(hào):100624-200401，中國(guó)食品藥品生物制品檢定院);苦瓜清脂素膠囊(A企業(yè)，批號(hào):100106、100804和110203);甲醇為色譜純;其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備 ①對(duì)照品溶液精密稱(chēng)取鹽酸西布曲明對(duì)照品11.25 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。②供試品溶液 取本品膠囊10粒，精密稱(chēng)定重量，傾出內(nèi)容物，混勻，精密稱(chēng)取內(nèi)容物0.12 g，置25 ml量瓶中，加甲醇適量，超聲15 min使溶解，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過(guò)，即得供試品溶液。

2.2 色譜條件 色譜柱:venusil MP C18(4.6 mm×100 mm，3 μm);流動(dòng)相:20 mmol/L醋酸銨(含0.1%甲酸)-甲醇(35∶65);檢測(cè)波長(zhǎng):224nm;流速:1.0 ml/min;進(jìn)樣量:10 μL;柱溫:室溫;色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 線性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1、2、4、6、8、10 ml，分別置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取10 μL進(jìn)樣，以峰面積Y對(duì)含量X(mg/ml)作線性回歸。得回歸方程為:Y=19907500X+12929.25 r=0.9998結(jié)果表明，鹽酸西布曲明在0.0225～0.225 mg/ml范圍內(nèi)濃度與峰面積線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密量取鹽酸西布曲明濃度為0.09 mg/ml的對(duì)照品溶液，連續(xù)測(cè)定6次，以峰面積計(jì)算 RSD為0.1%。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 稱(chēng)取苦瓜清脂素膠囊(批號(hào):100106)6份，同2.1.2進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量，RSD為1.4%(n=6)。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8 h測(cè)定以峰面積計(jì)算RSD為0.52%(n=5)，結(jié)果表明，供試品溶液室溫8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的樣品(批號(hào):100106)6份，分置25 ml量瓶，分別精密加入0.229 mg/ml的鹽酸西布曲明對(duì)照品溶液4、5和6 ml，加甲醇適量，同2.1.2進(jìn)行測(cè)定，平均回收率為98.87%，RSD為0.65%。

2.8 樣品含量測(cè)定 取本品苦瓜清脂素膠囊(批號(hào):100106、110203、100804)10 粒，傾出內(nèi)容物，混勻，精密稱(chēng)取0.12 g，置25 ml量瓶中，加甲醇適量，同2.1.2操作進(jìn)行測(cè)定，三批的含量分別為20.34、18.06和0 mg/g。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取對(duì)照品溶液經(jīng)二極管陳列檢測(cè)器在190～300 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，在224 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故將224 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相的選擇 以20 mmol/L醋酸銨-甲醇為流動(dòng)相，用甲酸調(diào)節(jié)pH值2.5～6.0，經(jīng)試驗(yàn)，當(dāng)流動(dòng)相pH值為4.5(含0.1%甲酸)時(shí)鹽酸西布曲明色譜峰形對(duì)稱(chēng)，與其他成分的分離度符合規(guī)定，故流動(dòng)相確定為20 mmol/L醋酸銨(含0.1%甲酸)-甲醇(35∶65)。

［1］ 魏艷紅.關(guān)于鹽酸西布曲明審查的早期報(bào)告．藥品評(píng)價(jià)雜志，2010，7(2):29．

［2］ 張小松，夏錚錚，周琳，等.檢測(cè)中藥保健品中非法摻入的鹽酸西布曲明．華西藥學(xué)雜志，2005，20(4):293-2951．

［3］ 鄭萍，朱蘭，羅霞，等.RP-HPLC測(cè)定鹽酸西布曲明中的有關(guān)物質(zhì)．華西藥學(xué)雜志，2005，20(2):80-82．

Determination of Sibutramine in Kuguaqingzhisu capsule by HPLC

JIANG Jia-xin，ZI Yang．Department of Bidogical Resource，Lushan Branch Institate of Guangxi Technical College，Liuzhou 545616，China

To establish a method for the determination of Sibutramine in kuguaqingzhisu capsule by HPLC.HPLC was used Venusil MP C18column，mobile phase was methanol-20 mmol/L ammonium acetate(0.1%formic acid)(35:65)，The flow rate was 1.0 ml/min with detection wavelength at 224nm.The linear range of sibutramine was from 0.0225～0.225 mg/ml(r=0.9998).The average recoverery was 98.87%and RSD was 0.65%(n=6).The method is simple，accurate and suitable.It can be used for the determination of Sibutramine in kuguaqingzhisu capsule．

HPLC;Kuguaqingzhisu capsule;Sibutramine

545616 柳州，廣西工學(xué)院鹿山學(xué)院生物資源系(姜嘉鑫);河北省食品藥品檢驗(yàn)院(訾陽(yáng))

訾陽(yáng) E-mail:zxr3487@126.com