HPLC法測定子花潔膚搽劑中苦參堿的含量

2012-10-25 05:54:36張立慶

藥學研究 2012年1期

張立慶，張娜

（1.山東大學藥學院，山東濟南250012；2.山東藥品食品職業學院，山東威海264210）

子花潔膚搽劑是山東省淄博市張店區中醫院的自制制劑，由蛇床子、苦參、黃柏等中藥制成，具有清熱解毒、祛風除濕、殺蟲止癢之功效，臨床上用于真菌感染、過敏性疾病、皮膚瘙癢癥、尖銳濕疣、滴蟲性疾病等.苦參為該制劑的主要成分之一，含有苦參堿等有效成分.原標準中未收載含量測定項［1］，為更好地控制產品質量，筆者參考有關文獻［2，3］，采用高效液相色譜法對該制劑中的苦參堿含量進行研究，為該制劑建立完善的質量標準提供了科學依據.本方法操作簡單，結果準確.

1 儀器與試藥

SHIMADZU高效液相色譜儀（SHIMADZU LC－20AT泵，SHIMADZU SPD－20A紫外檢測器，SHIMADZU柱溫箱CTO－20A，自動進樣器SHIMADZU SIL－20A，LC－solution色譜工作站）.苦參堿對照品（批號：200508，供含量測定用，購于中國藥品生物制品檢定所）；子花潔膚搽劑（淄博市張店區中醫院提供）；陰性樣品（按處方比例，稱取除苦參以外的中藥材適量，模擬制劑的制備工藝制備）.實驗所用甲醇、乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純.

2 方法與結果

2.1 色譜條件色譜柱：GL Sciences lnc.ODS－SP色譜柱（150mm×4.6mm，5μm）；流動相：0.02mol·L－1磷酸二氫鉀溶液－乙腈－三乙胺－磷酸（95∶5∶0.2∶0.2）；流速：1.0 mL·min－1；檢測波長：220nm；柱溫：40 ℃ ；進樣量：10μL；理論板數按苦參堿峰計算應不低于2 000.

2.2 對照品溶液的制備精密稱取經五氧化二磷減壓干燥至恒重的苦參堿對照品10.59mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得苦參堿對照品溶液（濃度為0.105 9mg·mL－1），備用.

2.3 供試品溶液的制備取子花潔膚搽劑，搖勻，精密量取1mL，加水25mL，濃氨溶液1mL，搖勻，置分液漏斗中，用三氯甲烷提取4次（30mL、30mL、20mL、20mL），合并三氯甲烷提取液，水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液，即得.

2.4 陰性對照試驗取陰性樣品適量，按“2.3”項下方法制成陰性對照溶液.

照上述色譜條件，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL，注入色譜儀中，記錄色譜圖.結果表明，在與苦參堿對照品色譜相應的位置上無干擾峰出現，方中其他組分對測定結果無影響.色譜圖見圖1.

圖1 苦參堿對照品（A）、供試品（B）、陰性對照（C）液相色譜圖

2.5 線性關系考察分別精密吸取對照品溶液4μL、8μL、12μL、16μL、20μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件，測定峰面積.通過對測定結果進行回歸分析，以苦參堿對照品微克數（X）為橫坐標，峰面積積分值（Y）為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為：Y＝671 500X－2 538.8（r＝0.999 7）.結果表明，苦參堿進樣量在0.423 6～2.118 0μg范圍內呈良好的線性關系.

2.6 精密度試驗取同一供試品溶液，按上述色譜條件，連續進樣6次，測定苦參堿的峰面積，結果RSD為0.36%.表明儀器精密度良好.

2.7 穩定性試驗取同一供試品溶液，按上述色譜條件，分別于0、2、4、6、8、10h注入液相色譜儀，分別測定峰面積.結果苦參堿峰面積RSD＝0.42%，表明供試品溶液在10h內穩定.

2.8 重復性試驗取同一批供試品6份，按“2.3”項下方法制得供試品溶液，在相同色譜條件下測定并計算苦參堿的含量，結果RSD為1.08%.

2.9 加樣回收試驗采用加樣回收法，精密量取已知含量的供試品（批號：201007141，苦參堿含量0.102 0mg·mL－1）0.5mL，加入苦參堿對照品0.5mL（0.105 9mg·mL－1），按供試品溶液制備方法制備并測定，計算回收率.結果見表1.