速效心痛氣霧劑中牡丹皮的提取工藝研究

周長征

（山東中醫藥大學，山東 濟南250355）

牡丹皮為毛茛科植物牡丹 （PaeoniasuffuticosaAndr.）的干燥根皮.味苦、辛、微寒.歸心、肝、腎經，具有清熱涼血，活血化瘀的作用.根皮主要含芍藥苷（Paeoniflorin）、羥基芍藥苷、丹皮酚等.芍藥苷是牡丹皮中主要活性成分之一，穩定性好，醇溶性優于水溶性［1］.芍藥苷具有多種生物活性，對免疫、心血管、中樞神經系統以及平滑肌等方面均有肯定的藥理作用［2］.

速效心痛氣霧劑由牡丹皮、川芎和冰片組成，具有清熱涼血，活血止痛的作用.牡丹皮的提取方法是用90%乙醇冷浸提取2次，芍藥苷為牡丹皮的重要成分之一，并對藥材及其制劑的質量控制有著決定性的作用.因此，如何通過提取工藝的優化來提高牡丹皮中有效成分的提取率是提高藥效的關鍵因素.為此，本研究探討了牡丹皮的提取工藝，為牡丹皮的工業生產提供可行的方法.

1 實驗材料

1.1 儀器 CS－930型薄層掃描儀（島津）；BS110十萬分之一電子分析天平（北京賽多利斯天平公司）；電熱恒溫水浴鍋（北京長源試驗設備廠）；電動攪拌器（廣州紙行第三五金工場制造）；微量進樣器（上海高頜工貿有限公司）.

1.2 材料與試劑 牡丹皮購于濟南藥材站，經山東中醫藥大學中藥鑒定教研室周鳳琴教授鑒定為毛茛科植物牡丹（PaeoniasuffuticosaAndr.）的干燥根皮其質量均符合《中國藥典》2005年版（一部）［3］牡丹皮項下的有關規定.

芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110736－200320）；硅膠G（青島海洋化工廠）；試劑均為分析純.

2 牡丹皮提取工藝研究

牡丹皮中主要成分為丹皮酚與芍藥苷.因為丹皮酚揮發性很強不能準確測其含量［4］.故選用芍藥苷作為確定牡丹皮提取工藝的優選指標.本實驗對滲漉法與冷浸法提取牡丹皮作了優選.考慮到提取效率以及適于工業化大生產，故對此兩種提取方法進行了系統比較.

2.1 冷浸法

2.1.1 提取方法 取牡丹皮120g，粉碎成粗粉，用90%乙醇冷浸提取兩次，第1次加90%乙醇2 600mL，攪拌6h，靜置12h；第2次加90%乙醇2 000mL，攪拌4h，靜置12h，吸取上清液，濾過，回收乙醇至體積約250mL，溶液恒溫水浴上加熱濃縮，然后真空干燥.取干浸膏2g，粉碎成細粉，精密稱重，加95%乙醇80mL置量瓶中超聲處理30min，放置，冷卻，再用95%乙醇定容至100mL，搖勻，濾過，即得供試液.

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷標準品10mg，置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，即得濃度為1mg·mL－1的芍藥苷對照液.

2.1.3 薄層板的制備 硅膠G用0.5%CMC－Na溶液作黏合劑，板厚0.3mm，使用前105℃活化30min.

2.1.4 展開與顯色 展開劑：三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（20∶2.5∶10∶0.1），預飽和15min，上行展開至13cm，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液顯色，105℃烘至斑點清晰.

2.1.5 波長的選擇 取對照品溶液和供試品溶液，在400～800nm波長范圍內進行掃描，由掃描圖可知，在600nm處對照品溶液和供試品溶液均有最大吸收，在700nm處均有最小吸收.

2.1.6 儀器條件與掃描方式 雙波長反射式鋸齒掃描，測定波長600nm，參比波長700nm，直線參數為3，靈敏度為1，狹縫：1.2mm×1.2mm.

2.1.7 標準曲線的繪制及線性關系的考察 分別精密吸取2.1.2項下的對照液2、4、6、8、10μL點于同一硅膠 G薄層板上，展開，顯色，掃描，得回歸方程Y＝4 705.3X＋2 483.7，r＝0.999 0，表明點樣量在2～10μg之間有較好的線性關系.

2.1.8 穩定性考察 取樣品溶液和對照品溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以上述條件展開，掃描，每1h掃描1次，結果在0～6h內穩定，結果見表1.

表1 不同時間測的峰面積值（n＝3）

2.1.9 樣品的測定 分別吸取2.2.1項下的供試液10μL、10μL與2.1.2項下的對照品溶液5μL、10μL交叉點于同一硅膠G薄層板上，按2.1.4項下的展開劑展開，取出，晾干，顯色，再按2.1.6項下的條件進行掃描，記錄峰面積積分值，采用外標兩點法計算.

2.2 滲漉法

2.2.1 提取方法 取牡丹皮480g，粉碎成粗粉，照流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法（《中國藥典》2005年版一部附錄I O）用90%的乙醇作溶劑，浸漬24h，以1mL·min－1速度進行滲漉，收集滲濾液約為2 200mL，回收乙醇，真空干燥.稱取2g，粉碎成細粉，精密稱定，加95%乙醇80mL置量瓶中超聲處理30min，放置，冷卻，再用95%乙醇定容至100mL，搖勻，濾過，即得供試液.

2.2.2 樣品的測定 分別吸取2.1.1項下的供試液20μL、20μL與2.1.2項下的對照液5μL、10μL交叉點于同一硅膠G薄層板上，按2.1.4項下的展開劑展開，取出，晾干，顯色，再按照2.1.6項下的條件進行掃描，記錄峰面積積分值，運用外標兩點法計算.

表2 兩種提取方法的比較（n＝3）

由表2可知，牡丹皮中芍藥苷的提取率冷浸法和滲漉法分別為0.25g／100g和0.10g／100g，可以看出，冷浸法較滲漉法顯著，更有利于有效成分芍藥苷的溶出，這與速效心痛氣霧劑質量標準的制法一致［5］，并且，冷浸法較滲漉法方便，可大量提取，更適于工業大生產.

3 討論

雙波長薄層掃描法測定芍藥苷的提取率，要求展開劑配制要準確，否則對斑點形狀變化有影響.

芍藥苷含量測定方法較多，本實驗采用了醇提，并用三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（20∶2.5∶10∶0.1）展開，獲得分離較好的芍藥苷斑點，展開劑中甲酸可以防止斑點拖尾.

［1］季宇彬.中藥有效成分藥理與應用［M］.哈爾濱：黑龍江科學技術出版社，1994：78－79.

［2］胡南，許惠玉，陳志偉，等.芍藥苷的藥理學研究進展［J］.齊齊哈爾醫學院學報，2007，28（9）：1093－1095.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2005年版（一部）［S］.北京：化學工業出版社，2005：160.

［4］楊云，張晶，陳玉婷.天然藥物化學成分提取分離手冊［M］.北京：中國中醫藥出版社，2003：73－74.

［5］中華人民共和國衛生部藥典委員會.衛生部藥品標準中藥成方制劑第十一冊［S］.北京：中華人民共和國衛生部，1996：150.