忍冬茶及其加工過程中氨基酸和微量元素分析

李金玲，王永勝，馬 強，張繼芬，陳 剛，徐曉玉，*

(1.西南大學藥學院，重慶市藥效評價工程技術研究中心，重慶 400716; 2.重慶工商大學藥物研究中心，重慶 400067)

忍冬茶及其加工過程中氨基酸和微量元素分析

李金玲1，王永勝1，馬 強1，張繼芬1，陳 剛2，徐曉玉1，*

(1.西南大學藥學院，重慶市藥效評價工程技術研究中心，重慶 400716; 2.重慶工商大學藥物研究中心，重慶 400067)

目的:考察忍冬茶及其加工過程中氨基酸、微量元素含量的變化情況。方法:采用L－8800型全自動氨基酸分析儀分析忍冬茶及其加工過程中氨基酸種類及其含量的變化情況;采用火焰原子吸收光譜法測定銅、鋅、鐵等9種微量元素的含量。結果:忍冬茶中含有17種氨基酸且含量豐富，加工前后17種氨基酸的種類沒有變化但含量都有所增加;加工后微量元素鋅、鐵、錳的含量增加，銅、鉛、鉻、鎳、砷的含量降低。忍冬茶經過沖泡后有害金屬元素鉛、鎘、鎳、砷含量均符合GB2762—2005《食品中污染物限量》中規定的標準。結論:忍冬茶的加工過程增加了氨基酸和多種有益微量元素的含量，降低了多種有害金屬元素的含量，有害金屬元素含量均符合GB2762—2005《食品中污染物限量》中規定的標準，表明忍冬茶加工工藝可行，飲用安全。

忍冬茶，氨基酸，微量元素，火焰原子吸收光譜法

灰氈毛忍冬(LoniceramacranthoidesHand－Mazz)俗稱大花忍冬，是中國藥典規定的山銀花項下的品種之一。目前，灰氈毛忍冬的花蕾已經得到了充分利用［1－2］，具有清熱解毒、涼散風熱的功效，現代藥理研究發現其有抗炎、抗菌、抗病毒、保肝、免疫調節、降血脂作用。灰氈毛忍冬的藤也具有藥用價值［3］，有祛風除濕，通絡止痛的功效，常用于治療風濕痹痛。關于灰氈毛忍冬的花、莖、葉中化學成分研究過去已有很多報道［4－6］。但到目前為止尚未發現關于灰氈毛忍冬鮮芽中氨基酸和微量元素含量的研究報道。微量元素是維持人體物質代謝的重要化學元素，中藥藥效與微量元素密切相關［7－10］。氨基酸是影響茶滋味的重要成分，也是重要的營養物質［11－12］。研究忍冬茶中的氨基酸和微量元素含量對指導開發忍冬茶有重要意義。本研究分析了忍冬茶及其加工過程中氨基酸、微量元素的含量變化，既有利于我們了解忍冬茶中有益微量元素和氨基酸的含量，又為預防過量攝入有害重金屬元素，將忍冬嫩芽開發成為新資源食品“忍冬茶”提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

忍冬芽 重慶秀山壩芒基地灰氈毛忍冬嫩芽;忍冬茶 西南大學藥學院分子藥理實驗室提供;硝酸、高氯酸、硫酸 成都科龍化工試劑廠;磺基水楊酸 天津市大茂化學試劑廠;17種氨基酸混合標準溶液 1nmol/μL，Agilent Technologies;Cu、Zn、Fe、Mn、Pb、Cr、Ni、Cd、As的標準溶液 1.000mg/m L，均購自國家標準物質研究中心。

L－8800型全自動氨基酸分析儀 日本Hitachi公司;TAS－990型原子吸收分光光度計 北京普析通用儀器有限責任公司;JA2003N電子天平 上海精密科學儀器有限公司;移液器 艾本德中國有限公司;Milli－Q Century純水系統 美國 MilliPore公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 氨基酸的測定

1.2.1.1 分析條件 分離柱:(4.6mm×60mm)，洗脫液流速0.4m L/m in，柱溫70℃，柱壓9.627MPa;反應柱:茚三酮及茚三酮緩沖液流速0.35m L/m in，柱溫135℃，柱壓0.982MPa，分析周期32m in。

1.2.1.2 標準液的配制 取1.0m L 1nmol/μL的氨基酸標準品溶液用0.02nmol的HCl溶液定容到10m L容量瓶中即得氨基酸標準溶液。

1.2.1.3 樣品溶液的制備 稱取5.0000g樣品，加適量水研磨至勻漿，倒入150m L三角瓶中，加入沸蒸餾水45m L，置100℃水浴中提取45m in，浸提完畢后立即趁熱減壓過濾，殘渣用少量熱蒸餾水洗滌2～3次，濾液定容至50m L。吸取樣品溶液2.0m L于50m L燒杯中，加0.4m L 4%的磺基水楊酸溶液，0.45μm微孔濾膜過濾，全自動氨基酸分析儀分析濾液中氨基酸的種類與含量。

1.2.1.4 方法驗證 取氨基酸標準溶液重復進樣5次進行精密度實驗，計算RSD;在一定量的樣品溶液中加入定量的標準溶液進行加樣回收率實驗，計算回收率;計算最小檢出量。

1.2.2 微量元素的測定方法

1.2.2.1 儀器工作條件 負高壓為300.0V，預熱燈電流2.0mA，測定各元素含量最佳工作條件見表1。

表1 原子吸收光譜儀工作條件Table 1 Working condition of the instrument

1.2.2.2 標準溶液的配制 將9種微量元素Cu、Zn、 Fe、Mn、Pb、Cr、Ni、Cd、As 1.000mg/m L的標準溶液按表3進行稀釋得到系列標準溶液。

1.2.2.3 茶待測液的制備 稱取1.0000g粉碎后的樣品于錐形瓶中，分別依次加入硝酸10m L，高氯酸5m L，混勻，置于電爐上加熱消解。當消解液剩余約1.0m L時停止加熱，冷卻后轉移到容量瓶中用2%硝酸定容至25m L，即得茶葉微量元素待測液，并同法制備3個空白液(不加樣品)，采用火焰原子吸收光譜法分析樣品中的微量元素。

1.2.2.4 茶湯待測液的制備 稱取2.0000g成品忍冬茶樣品各3份，加入45m L沸水，沖泡10m in后倒出，定容至50m L的容量瓶中，得第1道茶水。重復上面操作2次，得到第2、第3道茶水。取1.0m L至錐形瓶中，按1.2.2.3的方法對其進行處理，分析茶水樣品中的微量元素。

1.2.2.5 精密度與加樣回收實驗 取各微量元素標準溶液重復進樣5次進行精密度實驗，在一定量的樣品溶液中加入定量的標準溶液進行加樣回收率實驗，計算RSD與回收率。

1.2.2.6 樣品測定 按“1.2.2.1”的條件分別測定忍冬茶加工過程中和茶湯中的微量元素含量。

2 結果與分析

2.1 氨基酸的測定結果

2.1.1 氨基酸的測定色譜圖

圖1 氨基酸色譜圖Fig.1 The spectrum of amino acids

2.1.2 精密度與加樣回收測定結果 取氨基酸標準溶液重復進樣5次，RSD為0.36%。方法回收率為99.5%，RSD為0.92%，最小檢出量為3pmol/20μL。說明采用L－8800型全自動氨基酸分析儀測定氨基酸含量精密度高、穩定性好，能夠達到檢測要求。

2.1.3 氨基酸種類和含量測定結果 如表2所示忍冬茶中含有17種氨基酸，忍冬芽經過殺青之后除酪氨酸、脯氨酸外其余15種氨基酸含量都增加;成品忍冬茶中除天門冬氨酸、脯氨酸的含量增加外，其余15種氨基酸的含量均下降;但比鮮芽氨基酸的含量還是有明顯的增加，而氨基酸種類沒有變化。

表3 各元素的線性回歸方程和線性范圍(n=5)Table 3 Linear range and linear regression equation of each element(n=5)

表2 忍冬茶加工過程中氨基酸的種類和含量檢測Table 2 The test results of amino acids in lonicera tea

在由忍冬芽加工成忍冬茶的過程中，忍冬芽經過殺青后氨基酸的含量會有所增加有可能是由于蛋白質在酶作用下的水解和濕熱作用下的熱解所致。而經過烘干之后含量又有所降低可能由于氧化、水解、轉化或與糖、多酚等結合導致的。氨基酸含量的增加能使茶香氣的鮮爽度和茶湯滋味的鮮醇度得到提高。氨基酸的種類和含量決定著蛋白質品質的高低，必需氨基酸是評價食品營養水平的重要指標［13－17］;忍冬茶中的必需氨基酸含量較高，因此忍冬茶中蛋白質的含量也較高，所以忍冬茶的營養價值相對也較好。

2.2 微量元素測定結果

2.2.1 標準曲線的繪制 采用火焰原子吸收光譜法測定9種微量元素的含量，繪制各微量元素的標準曲線見表3。

2.2.2 精密度與加樣回收測定結果 取9種微量元素Cu、Zn、Fe、Mn、Pb、Cr、Ni、Cd、As標準溶液，重復進樣5次，根據標準曲線計算各元素含量。結果，各元素的 RSD分別對應是 1.19%、1.89%、1.49%、1.12%、1.08%、1.58%、1.53%、1.48%、1.41%，結果顯示:精密度良好。另在一定量的樣品溶液中加入定量的標準溶液，最后定容在25m L容量瓶中，并用此樣品溶液進行加樣回收率實驗，結果Cu、Zn、Fe、Mn、Pb、Cr、Ni、Cd、As 9種元素的回收率都在96.7%～106.4%之間，RSD均小于2%，說明采用火焰原子吸收光譜法測定這9種微量元素穩定性好，能夠達到檢測要求。

2.2.3 忍冬茶加工過程中9種微量元素含量測定結果 從表4可以看出，忍冬茶在加工過程中鋅、鐵、錳這三種對人體有益的微量元素的含量一直處于增加狀態。另外忍冬茶中銅、鉛、鉻、鎳、砷等重金屬元素的含量明顯低于鮮芽中的，除鉛含量偏高外，鎘、鎳、砷含量均低于GB2762－2005《食品中污染物限量》中的規定。

表4 忍冬茶加工過程中微量元素含量(n=3)Table 4 The trace elements content of Lonicera tea(n=3)

2.2.4 茶湯中微量元素含量檢測結果 表4的檢測結果顯示忍冬茶的加工過程可使重金屬含量降低，但各含量仍然較高，由于茶葉通常是飲用品，所以我們又對沖泡過后的茶湯中的微量元素進行分析，檢測結果見表5。

由表5可以看出，忍冬茶經過沖泡過后的茶湯中的各種微量元素的含量豐富，忍冬茶在沖泡過程中鐵的含量有所升高，這說明沖泡有利于有益元素鐵含量的增加;銅、鋅、錳、鉻、鎳等微量元素的含量依次減少，鋅、錳這兩種有益元素的含量雖然減少但仍含量較高;鉻、鎳這兩種重金屬的含量的減少對人體是有利的［18－22］，有害金屬元素鉛、鎘、鎳、砷含量均符合GB2762－2005《食品中污染物限量》的規定，鉛在加工過程中含量則增加，表明忍冬茶在飲用時不宜沖泡次數過多，應控制在3次以內。因此，本研究表明，忍冬茶能補充人體必需的微量元素，長期飲用具有一定保健功效。

表5 茶湯中微量元素含量(n=3)Table 5 The trace elements content in leachate of tea(n=3)

3 結論與討論

3.1 氨基酸［11－12］是茶葉鮮爽味的主體物質，是決定茶葉香、口感的重要生化成分。氨基酸的組分不同則其呈現的味特性也不同，因此能夠影響茶葉的品質。忍冬茶含有17種氨基酸，氨基酸是構成生物體蛋白質并同生命活動有關的最基本的物質，忍冬茶中豐富的氨基酸含量在發揮其食療作用和藥用價值方面有較高的開發價值。

3.2 忍冬茶加工前后均含有17種氨基酸和9種微量元素，且含量均較高。忍冬茶的原材料忍冬芽主產區分布于重慶秀山，這里常年雨水充沛，土壤肥沃。這些良好的生長環境使忍冬芽能含有豐富的氨基酸和微量元素等營養成分，具有優良的品質。

3.3 中國國家標準GB2762－2005《食品中污染物限量》中只對茶葉中的鉛含量規定了其限度，其余金屬元素含量未做限定。本研究表明忍冬茶及其加工過程中有害金屬元素鉛含量偏高，但本加工過程能顯著降低重金屬的含量。由于茶葉通常是飲用品，故本研究又對沖泡過后的茶湯中的微量元素含量進行檢測，檢測結果表明忍冬茶中的鉛含量符合GB2762－2005《食品中污染物限量》的規定;其余重金屬含量也均符合中國農業部2003年制定的茶葉重金屬元素限量的規定［23］。因此，忍冬茶能安全飲用。

3.4 通過上述工藝加工制成的灰氈毛忍冬嫩芽茶(忍冬茶)含有豐富的氨基酸和微量元素，食用對人體有益，可以作為新資源食品食用。

［1］陳君，許小方，柴興云，等.灰氈毛忍冬花蕾的化學成分［J］.中國天然藥物，2006，4(5):347－351.

［2］許小方，李會軍，李萍，等.灰氈毛忍冬花蕾中的化學成分［J］.中國天然藥物，2006，4(1):454－461.

［3］賈曉東，馮煦，董云發.灰氈毛忍冬中皂苷類成分的研究［J］.中草藥，2007，38(10):1452－1455.

［4］Yu C，Feng X，Xiaodong J，et al.Triterpene glycosides from Lonicera.Isolation and structural determination of seven glycosides f.rom flower buds of Lonicera macranthoides［J］.Chemistry of Natural Compounds，2008，44(1):392－431.

［5］陳敏，吳威巍，沈國強，等.灰氈毛忍冬化學成分研究［J］.藥學學報，1994，29(8):6172－6201.

［6］茅青，曹東，賈憲生.灰氈毛忍冬化學成分的研究［J］.藥學學報，1993，28:2732－2811.

［7］霍仕霞，閆明，劉曉東，等.白花丹中微量元素的測定［J］.中國藥房，2010，21(11):1008－1010.

［8］王勇健.微量元素與疾病的關系［J］.家庭醫學:新健康，2007，5(1):7－10.

［9］Iqbal S，Haleem S，Akhtar M，et al.Efficiency of pomegranatepeel extracts in stabilization of sunflower oil under accelerated conditions［J］.Food Research International，2008，41 (2):194－200.

［10］張舉成，劉衛，嚴和平，等.野山茶抗氧化活性研究及微量元素測定［J］.食品科技，2007(4):267－271.

［11］朱尚同.關于茶樹中氨基酸代謝研究的若干進展和問題［J］.茶葉通報，1980(1):43－47.

［12］徐琪壽.氨基酸藥理學研究進展［J］.氨基酸與生物資源，1996，18(1):30－32.

［13］李澤鴻，姚玉霞，王全凱，等.二杠鹿茸和三杈鹿茸中營養元素含量的差異［J］.微量元素和健康研究，2003，20(4): 30－31.

［14］Matsuura H，Hokura A，Katsuki F，et al.Multielement determination and speciation ofmajor－to－trace elements in black tea leavesby ICP－AES and ICPMSwith the aid of size exclusion chromatography［J］.Analytical Sciences，2001，17(3):391－398.

［15］曾琦斐.微量元素與人體健康［J］.中國科技信息，2008 (3):158－159.

［16］FitzGerald R J，Murray B A，Walsh D J.Hypotensive peptides from milk proteins［J］.JNutr，2004，134:980－988.

［17］宋念藝.微量元素鋅與眼病［J］.微量元素與健康研究，2006，23(6):73－75.

［18］Abua I，Nosa O E.Assessment of trace elements in canned fishes(mackerel，tuna，salmon，sardines and herrings)marketed in Georgia and Alabama(United States of America)［J］.Journal of Food Composition and Analysis，2005，18(8):771－787.

［19］王婕.淺談微量元素鐵與人體健康［J］.貴州教育學院學報，2005，21(4):35－36.

［20］江元汝.微量元素與健康［M］.北京:中國建材工業出版社，2004:103－119.

［21］Goldhaber S B.Trace element risk assessment:essentiality vs.toxicity［J］.Regulatory Toxicology and Pharmacology，2003，38 (2):232－242.

［22］周利兵，姜紫勤，吳啟勛.青海地區白刺葉中微量元素的主成分分析和聚類分析［J］.安徽農業科學，2010，38(13): 6694－6650.

［23］中華人民共和國農業部標準.茶葉中鉻、鎬、汞、砷及氟化物限量標準(NY659－2003)［S］.

Analysis of am ino acids and trace elements in the processing and finished product of Lonicera tea

LI Jin－ling1，WANG Yong－sheng1，MA Qiang1，ZHANG Ji－fen1，CHEN Gang2，XU Xiao－yu1，*
(1.College of Pharmaceutical Sciences，Southwest University，Pharmacological Evaluation Engineering Research Center of Chongqing，Chongqing 400716，China;2.Research Center of Medical Chemistry and Chemical Biology，Chongqing Technology and Business University，Chongqing 400067，China)

Ob jective:To analysis the am ino acids and trace elements in p rocessing and finished p roductof Lonicera tea.Methods:Automatic am ino acid analyzer was used to detec t the content of am ino acid in the p rocessing and finished p roduct of Lonicera tea.Cu、Zn、Fe、Mn、Pb、Cr、Ni、Cd、As were determ ined by flame atom ic absorp tion spec troscopy.Results:17 am ino acids were abundant in Lonicera tea.The p rocessing of Lonicera tea d id not change the kinds of am ino acid，increased the content of Zn、Fe、Mn and reduced the content of Cu、Pb、Cr、Ni、Cd、As.After the tea was b rewed，the content of harm ful metals was com lyed w ith Lim ition Standard of Contam inants in Food(GB2762－2005).Conc lusion:The p rocessing of Lonicera tea could inc rease the content of am ino acids and beneficial trace elements，and reduce the contentof harm fulm etals which was in line w ith Lim ition Standard of Contam inants in Food(GB2762－2005).The experimentshowed that Lonicera tea was safe to d rink，and the p rocessing of Lonicera tea was advanced and reliab le.

lonicera tea;am ino acids;trace elements;flam e atom ic absorp tion spec trometry

TS272.7

A

1002－0306(2012)12－0075－04

2011－10－20 *通訊聯系人

李金玲(1986－)，女，碩士研究生，研究方向:藥用資源綜合開發與利用。

國家科技支撐計劃課題(2006BAC01A16)專項;重慶市“十一五”規劃項目;秀山縣政府資助。