萊因-埃農(nóng)氏法測定原料乳中乳糖含量的研究

蔣珍菊，林芳棟

（1.西華大學(xué)生物工程學(xué)院，四川成都 610039；2.河南省中牟縣衛(wèi)生局，河南鄭州 451450）

萊因-埃農(nóng)氏法測定原料乳中乳糖含量的研究

蔣珍菊1，林芳棟2

（1.西華大學(xué)生物工程學(xué)院，四川成都 610039；2.河南省中牟縣衛(wèi)生局，河南鄭州 451450）

將萊因-埃農(nóng)氏法引入原料乳中乳糖含量的測定，在現(xiàn)有基礎(chǔ)上考察了萊因-埃農(nóng)氏法在原料乳中測定乳糖含量的沉淀劑使用量、精密度、重復(fù)性等。由實驗結(jié)果可知，萊因-埃農(nóng)氏法的相對標準偏差（RSD）為0.398%，精密度高，重復(fù)性實驗的RSD為1.374%，重復(fù)性好，加標回收率為100.34%，乳糖盲樣測定結(jié)果也與實際相符，用該方法進行原料乳中乳糖的測定是切實可行的。

萊因-埃農(nóng)氏法，原料乳，乳含量

牛乳中含有多種成分，目前已經(jīng)知道的至少有100余種，牛乳因其營養(yǎng)豐富、易于消化吸收、香甜可口和老少皆宜等優(yōu)點，迅速走進了千家萬戶[1]。中國乳品企業(yè)之間的競爭不斷加劇，價格戰(zhàn)、資本戰(zhàn)、奶源戰(zhàn)等越演越烈，乳制品質(zhì)量安全事件是一波未平一波又起，暴露出諸多隱患，對我國的人民生命安全造成了巨大的影響。由于缺乏有效的控制和檢測技術(shù)，形形色色的乳制品摻假事件發(fā)生，嚴重損害了消費者對于乳制品安全的信任，大大地削弱了市場需求[2]。快速制定原料乳質(zhì)量檢驗標準，建立完善的原料乳質(zhì)量安全檢測方法，從源頭上保證乳制品的質(zhì)量是確保我國乳品行業(yè)可持續(xù)發(fā)展的強制實施手段，因而如何快速并準確的進行原料乳的安全性檢測是急需解決的問題，為了保證乳制品的質(zhì)量，出現(xiàn)了各種各樣的檢測方法[3-8]。乳糖是哺乳動物奶汁中的特有成分，只要乳源一定，乳糖的含量只在一定范圍之內(nèi)有微量的變化。加入摻假物后，原料中乳糖的含量也會隨之變化。通過測定原料乳中乳糖的含量，可以直接判斷原料乳是否摻假[9]。國家和相關(guān)行業(yè)也制定了相應(yīng)的標準如GB/T5413.5-2010方法中規(guī)定了兩種針對乳糖的測定方法：高壓液相色譜法和萊因—埃農(nóng)氏法[10]，SN/ T0871-2000采用分光光度法直接測定乳粉中乳糖的含量[11]。但將萊因—埃農(nóng)氏法用于原料乳中乳糖含量的測定并未見報道，本文以原料乳為原料，研究了萊因-埃農(nóng)氏法測定乳糖的最佳條件、精密度、重復(fù)性等指標，并用于原料乳中乳糖含量的測定。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

原料乳 成都鮮奶認證供應(yīng)點；乙酸鉛、草酸鉀、磷酸氫二鉀、鹽酸、硫酸銅、濃硫酸、酒石酸鉀鈉、氫氧化鈉、酚酞、無水乙醇、次甲基藍 分析純，成都科龍化工試劑廠。

BT25S電子天平 北京賽多利斯；DL-1電爐 北京中興偉業(yè)儀器有限公司；SFG-02.400電熱恒溫鼓風干燥箱 黃石市恒豐醫(yī)療器械有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 用乳糖標定斐林試液[10]稱取預(yù)先在（94±2）℃干燥箱中干燥至恒重的乳糖標樣0.7500g，用水溶解并定容至250m L。將此乳糖溶液注入一個50m L滴定管中，待滴定。甲液：稱取34.639g硫酸銅，溶于水中，加入0.5m L濃硫酸，加水至500m L。乙液：稱取173g酒石酸鉀鈉及50g氫氧化鈉溶解于水中，稀釋至500m L，靜置2d后過濾。

預(yù)滴定和精確滴定：取10m L斐林試液（甲、乙液各5m L）于250m L三角燒瓶中，再加入20m L蒸餾水，放入幾粒玻璃珠，加入比預(yù)滴定量少0.5～1.0m L的樣液，置于電爐上，使其在2m in內(nèi)沸騰，維持沸騰狀態(tài)2m in，加入3滴次甲基藍溶液，以每2s一滴的速度慢慢滴入，溶液藍色完全褪盡即為終點，記錄消耗的體積。

按式（1）和式（2）計算斐林試液的乳糖校正值（f1）：

式中：A1-實測乳糖數(shù)（mg）；V1-滴定時消耗乳糖溶液的體積（m L）；m1-稱取乳糖的質(zhì)量（g）；f1-費林試液的乳糖校正值；AL1-由乳糖液滴定毫升數(shù)查表1所得的乳糖數(shù)（mg）。

表1 乳糖及轉(zhuǎn)化糖因數(shù)表（10mL斐林試液）Table 1 Factor table of lactose and invert sugar

1.2.2 牛乳樣品中乳糖的測定 試樣處理：取牛乳樣品15g，精確到0.1mg，用100m L水分數(shù)次溶解并洗入250m L容量瓶中。緩慢加入適量乙酸鉛溶液、草酸鉀-磷酸氫二鈉溶液，并振蕩容量瓶，用水稀釋至刻度。靜置數(shù)分鐘，用干燥濾紙過濾，棄去最初25m L濾液后，所得濾液作滴定用。滴定：預(yù)滴定、精確滴定，操作同1.2.1。

試樣中乳糖的含量X按式（3）計算

式中：X-試樣中乳糖的質(zhì)量分數(shù)（g/100g）；F1-由消耗樣液的毫升數(shù)查表1所得乳糖數(shù)（mg）；f1-斐林試液乳糖校正值；V1-滴定消耗濾液量（m L）；m-試樣的質(zhì)量（g）。

2 結(jié)果與分析

2.1 乳糖標定斐林試液

按照1.2.1的實驗方法用乳糖標定斐林試液，并計算斐林試液的乳糖校正值（f1），測定三次取平均值，結(jié)果見表2。由表2可知，測得的乳糖校正值為1.097。

表2乳糖校正值Table 2 Correction value of lactose

2.2 沉淀劑加入量

由于本標準主要適用于乳粉，故對沉淀劑加入量重新進行了考察。對于同一批原料乳樣品，平行取7份，每份取15g，分別用100m L水分數(shù)次溶解并洗入250m L容量瓶中。分別緩慢加入4、6、8、10、12、14m L乙酸鉛溶液及4、6、8、10、12、14m L草酸鉀-磷酸氫二鈉溶液，并振蕩容量瓶，用水稀釋至刻度。靜置數(shù)分鐘，用干燥濾紙過濾，棄去最初25m L濾液后，所得濾液作滴定用，測定3次取平均值結(jié)果見表3。

表3 沉淀劑加入量對滴定體積的影響Table 3 The effectof the addition amount of precipitants on titration volume

由表3可以看出，當分別加入乙酸鉛溶液及草酸鉀-磷酸氫二鈉溶液各4m L時，肉眼可以明顯看出溶液呈渾濁狀態(tài)，沉淀未完全，當加入沉淀劑6m L及其以上時，溶液呈澄清狀態(tài)，滴定后發(fā)現(xiàn)，加入6m L時得到的滴定體積明顯較小，分析原因可能是由于沉淀未完全所致，加入8、10、12、14m L時結(jié)果一致，故在測定原料乳樣品時選擇加入沉淀劑乙酸鉛溶液及草酸鉀-磷酸氫二鈉溶液各8m L。

2.3 精密度實驗

為了考察實驗中的隨機誤差，稱取沉淀后在（94±2）℃干燥箱中干燥至恒重的乳糖標樣0.5g，精確到0.1mg，用水溶解并定容至250m L，按照1.2.2的方法測定乳糖含量，平行測定10次，計算RSD值，進行精密度實驗，結(jié)果見表4。

從表4可以看出，測定原料乳的乳糖含量的RSD值小于1%，說明方法精密度高，穩(wěn)定性好，且相對誤差小，可以用于實驗的測定。

2.4 重復(fù)性實驗

為了考察實驗中操作人員、儀器、實驗方法對測定結(jié)果的影響，對于同一批原料乳標樣，沉淀干燥平行取10份，每份稱取15g，精確到0.1mg，用水溶解并定容至250m L，按照1.2.2的方法測定乳糖含量，計算出RSD值，進行重復(fù)性實驗，結(jié)果見表5。

從表5可以看出，原料乳中乳糖含量的RSD為 1.374%，小于2%，說明該方法重復(fù)性好，且相對誤差小，可以用于實驗的測定。

表4 乳糖標樣精密度實驗結(jié)果Table 4 The resultof the precsion testing of lactose standard sample

表5 乳糖標樣重復(fù)性實驗結(jié)果Table 5 The result of repetitive testing of lactose standard sample

表6 乳糖加標回收率實驗結(jié)果Table 6 The result of recovery testing of lactose

2.5 加標回收率

為了考察該方法的準確性，對于同一批原料乳標樣，平行稱取2份，每份15g，在其中一份中，再加入乳糖標樣0.3g，精確到0.1mg，分別用水溶解并定容至250m L，按照1.2.2的方法測定乳糖含量，平行測定10次，計算加標回收率及RSD值。結(jié)果見表6。

從表6可以看出，原料乳中乳糖含量的平均加標回收率為100.34%，RSD值為1.610%，說明方法得到的結(jié)果與實際相符合，且穩(wěn)定性好，相對誤差小，可以用于實驗的測定。

2.6 乳糖盲樣的測定

分別取0.5、0.6、0.7、0.8、0.9g乳糖標樣，精確到0.1mg，按照本研究的實驗方法測定結(jié)果見表7。

表7 盲樣乳糖含量的測定Table 7 The determination of the lactose blind samples

從表7可知，所測定盲樣乳糖的含量，與實際模擬乳糖量相比較，絕對誤差不超過1.5%。說明此方法重復(fù)性好。

3 結(jié)論

在國標中萊因-埃農(nóng)氏法主要是針對乳粉的，本文主要研究了萊因-埃農(nóng)氏法在原料乳中乳糖含量測定中的應(yīng)用，通過實驗得出乳糖校正值為1.097，并對萊因-埃農(nóng)氏法測定原料乳中乳糖含量沉淀劑的用量進行了分析，結(jié)果表明，加入乙酸鉛溶液及草酸鉀-磷酸氫二鈉溶液各8m L時較合適。方法學(xué)考察說明，精密度實驗中RSD為0.398%，精密度高；重復(fù)性實驗的RSD為1.374%，重復(fù)性好；加標回收率為100.34%，用該方法進行原料乳中乳糖的測定是切實可行的，乳糖盲樣測定結(jié)果也與實際相符。該方法與國標中第一法相比較[10]，具有成本低、設(shè)備要求簡單和快捷等優(yōu)點。本方法檢測原料乳中乳糖含量可以作為其它方法學(xué)實驗結(jié)果是否正確的判斷標準。

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Research of content determ ination of lactose in the raw m ilk by Lane-Eynon’smethod

JIANG Zhen-ju1，LIN Fang-dong2
（1.School of Bioengineering，Xihua University，Chengdu 610039，China；2.Henan Province Zhongmou County Public Health Bureau，Zhengzhou 451450，China）

Lane-Eynon’s method was introduced in the determ ination of lactose content in raw m ilk.On the basis of the existing study，the research on lactose content in raw m ilk by Lane-Eynon’s method was carried out.The p recip itation agent usage，p recision and repeatability of this method were measured.The p recision and repeatability of the Lane-Eynon was well，w ith RSD 0.398%，1.374%respectively.The average recovery was 100.34%，the result of the m ilk b lind sam p les was consistent w ith the actual value，so it was feasib le to determ ine the content of lactose in the raw m ilk.

Lane-Eynon’s method；raw m ilk；lactose content

TS252.1

A

1002-0306（2012）14-0080-03

2011－11－22

蔣珍菊（1974-），女，博士，副教授，主要從事高分子化學(xué)改性及應(yīng)用和食品安全與檢測相關(guān)研究。

四川省教育廳科研基金項目支助（08ZC011）；四川省重點學(xué)科建設(shè)項目資助。