超高壓液相測定技術在人參皂苷含量測定中的應用

石家莊以嶺藥業股份有限公司 李 凈 祁星星 呂 潔 霍際偉

超高壓液相測定技術在人參皂苷含量測定中的應用

石家莊以嶺藥業股份有限公司 李 凈 祁星星 呂 潔 霍際偉

人參為五加科植物，具有很高的藥用價值，但由于藥典收錄的人參皂苷的測定方法運行時間較長。本文，筆者采用超高壓液相的測定方法對人參中皂苷的含量進行分析，以縮短測定時間，提高測定效率。

一、儀器與試藥

1.儀器。實驗使用的儀器主要有U3000測定儀，該測定儀包括LPG–3400RS型四元泵、WPS–3000型進樣器、TCC–3x00（RS）型柱溫箱和 VWD–3x00（RS）型檢測器；采用的色譜柱有 DIONEX C18 5 μm 4.6 mm ×100 mm 、Agilent XDB–C18 5 μm 4.6 mm×150mm。

2.試藥對照品。包括人參皂苷Rgl（中檢所：110703–201027）、人參皂苷Re （中檢所：110754–200822）、 人參皂苷Rbl（中檢所：110704-201122）等，所用試劑均為色譜純。

二、實驗方法與結果

1.色譜條件。

（1）超高壓液相條件。以乙腈為流動相A，以水為流動相B，流速為0.6 m L/m in，按下表中的規定進行梯度洗脫，檢測波長為203 nm。具體參數見表1。

表1 流速為0.6 m L/m in時的梯度洗脫要求

（2）《中國藥典》2010年版（一部）條件。以乙腈為流動相A，以水為流動相B，流速為1.0 m L/min，按下表中的規定進行梯度洗脫；檢測波長為203 nm。具體參數見表2。

表2 流速為1.0 m L/m in時的梯度洗脫要求

2.溶液的制備。

（1）對照品溶液的制備。 精密稱取人參皂苷Rgl對照品、人參皂苷Re對照品及人參皂苷Rbl對照品，加甲醇制成質量濃度為0.2 mg/m L的混合溶液，搖勻，即可得到對照品溶液。

（2）供試品溶液的制備。取本品粉末（過四號篩）約1 g，精密稱定，置于索氏提取器中；加三氯甲烷加熱回流3 h，棄去三氯甲烷液并在藥渣揮干溶劑后，連同濾紙筒移入100 m L錐形瓶中，精密加水飽和正丁醇50 mL，密塞，放置過夜，超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz）30 m in，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液25 m L，置蒸發皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至5 m L量瓶中；加甲醇稀釋至規定刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即可得到供試品溶液。

3.線性回歸分析。精密吸取上述人參皂苷對照品溶液，分別進樣0.5，1.0，2.0，4.0，8.0 μL，按規定色譜條件測定峰面積。分別以人參皂苷Rgl、Re 、Rb1對照品進樣量為橫坐標，以色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。對所得實驗數據進行線性回歸，可得不同人參皂苷的回歸方程：

不同儀器所測得的人參皂苷的含量 見表3。

表3 不同儀器所測得的人參皂苷含量

4.精密度試驗。精密吸取上述人參皂苷對照品溶液，按上述超高壓液相色譜條件，2 μL進樣，重復進樣6次，其RSD分別為人參皂苷Rgl為0.5%、人參皂苷Re為 0.6%、人參皂苷Rbl為0.5%，表明進樣精密度較好。

5.重復性試驗。在上述色譜條件下， 取同一批樣品5 份，按“2.2.2供試品溶液的制備” 項下的方法測定， 測定結果表明：人參皂苷Rg1的平均含量為0.332 2%，RSD＝0.4%；人參皂苷Re的平均含量為0.1515%，RSD＝0.3%；人參皂苷Rb1的平均含量為0.4240%，RSD＝0.3%。

6.穩定性試驗。按含量測定項下的超高壓色譜條件，在室溫條件下，對同一樣品溶液每隔0，4，8，12，24 h進樣一針，并記錄色譜圖，按峰面積計算RSD，樣品在24 h內基本穩定。不同時段、不同人參皂苷含量的測量結果見表4。

表4 不同時段、不同人參皂苷含量的測量結果

三、結論

上述實驗結果表明，利用超高壓液相測定人參皂苷含量的檢測方法準確、可靠，且大大縮短了檢測時間，提高了工作效率，同時也節約了試劑，減少了對環境的污染，使人參皂苷測定方法的經濟效益和社會效益得到了顯著提高。